猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法GB/T35912-2018

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种严重危害猪工业的病原体，常导致生猪生长缓慢、死亡率增高等严重后果。因此，对PRRSV的敏感、准确检测显得尤为重要。

近年来，荧光RT-PCR技术在PRRSV的检测中得到广泛应用，其优点是灵敏度高、特异性强、快速、简便。GB/T35912-2018《猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法》是研究者们不断努力下的成果，为PRRSV的检测提供了标准方法。

具体方法如下：

1. 试剂和仪器

（1）RNA提取试剂盒

（2）反转录试剂盒

（3）SYBR Green I荧光定量PCR探针

（4）荧光定量PCR仪

2. 样品处理

（1）样品收集后冷冻保存（-80℃）。

（2）在操作前进行离心，去除样品中的杂质。

（3）将600μL RNA提取试剂加入200μL样品中，混合均匀后离心10min，取上清转移至另一无菌离心管中，加入适量乙醇沉淀。

（4）将离心管中的混合液倒入DNA酶切用离心管中，并按照反转录试剂盒说明书反转录。

3. 荧光RT-PCR检测

将反转录产物作为模板制备PCR混合液，添加SYBR Green I荧光探针，进行PCR扩增。最后通过荧光定量PCR仪分析检测结果。

总之，GB/T35912-2018标准的荧光RT-PCR技术能够快速、准确地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒，为猪工业的发展提供了重要保障。