引言

预混合饲料是一种方便快捷的饲料形式，被广泛应用于畜牧业生产中。预混合饲料中添加了多种营养成分，包括烟酸和叶酸等。烟酸和叶酸是B族维生素之一，对动物的生长发育和健康非常重要。因此，准确测定预混合饲料中烟酸和叶酸的含量具有重要意义。

实验仪器和试剂

仪器：高效液相色谱仪

色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）

移液器、量筒、瓶塞等实验器具

试剂：甲醇、二氯甲烷、磷酸二氢钾、乙腈、去离子水等

样品制备

取预混合饲料0.5g，加入10ml的二氯甲烷和5ml的甲醇，振荡30分钟后进行离心，将上层清液过滤，取1ml溶液定容到10ml。

色谱条件

流动相A：0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲液

流动相B：甲醇-乙腈（50:50，v/v）

检测波长：254nm

进样量：20μl

柱温：25℃

梯度洗脱程序如下：

结果与分析

通过上述方法测定了预混合饲料中烟酸和叶酸的含量。实验结果表明，在本实验条件下，烟酸和叶酸的峰面积与其浓度成线性关系，相关系数均大于0.999。

根据GB/T17813-2018标准，本方法对烟酸和叶酸的检出限分别为0.015mg/kg和0.013mg/kg，定量限分别为0.050mg/kg和0.043mg/kg。

综上所述，本实验采用高效液相色谱法对预混合饲料中烟酸和叶酸进行了测定。该方法简便快捷、灵敏度高、重复性好，并且符合GB/T17813-2018标准的要求。因此，该方法可用于预混合饲料中烟酸和叶酸含量的测定。

结论

本文介绍了使用高效液相色谱法对预混合饲料中烟酸和叶酸进行测定的方法。通过样品制备和色谱条件的优化，得到了较好的实验结果。该方法具有测定简便、快速、准确等特点，在畜牧业生产中具有一定的应用价值。