Sanger法测序技术指南GB/T34265-2017

在基因组学领域，Sanger法测序是一种常用的测序技术。它是由 Frederick Sanger 在1977年发明的，也被称为“链终止法”或“二代测序技术”。相较于其他测序技术，Sanger法测序具有以下优点：

• 能够测序长达1000个核苷酸的DNA序列；
• 高精度：错误率低于0.1%；
• 可靠性强：已经广泛应用于人类基因组计划等大型研究项目中。

下面我们将介绍如何使用 GB/T34265-2017 标准，来对样品进行 Sanger法测序。

实验步骤：

1. 制备DNA样品：从样品中提取DNA（例如血液、组织、唾液等），并使用PCR扩增所需的片段。
2. 准备反应体系：将扩增产物与引物、Taq酶、dNTPs等混合，制成反应体系。
3. Sanger测序反应：在反应体系中加入一定量的不同荧光标记的二代碱基链终止剂（ddNTPs），并进行PCR扩增。该过程会生成一系列长度不同的碎片，每个碎片以一种不同的颜色标记。
4. 读取数据：使用自动DNA测序仪读取所有碎片的荧光信号，并由计算机将它们转换成原始DNA序列。
5. 测序结果分析：通过对序列的比对和组装，可以得到完整的DNA序列。

在使用 Sanger法测序 技术时，需要注意以下几点：

• 样品质量对结果影响很大，因此必须保证样品纯度和完整性。
• 在选择荧光标记的二代碱基链终止剂时，要根据需要测序的片段长度进行选择。
• 在读取数据时，需要对荧光信号进行峰检测和峰拟合，以获得最准确的数据。

总之，Sanger法测序技术是一种非常有效的测序方法，它可以在基因组学、疾病诊断等领域中得到广泛应用。GB/T34265-2017 标准规范了 Sanger法测序 技术的操作流程和实验室质量控制要求，为相关科研人员提供了更加标准化和规范化的指导。