饲料添加剂酸性、中性蛋白酶活力的测定分光光度法GB/T28715-2012

引言

饲料添加剂是现代畜牧业中广泛使用的一种辅助饲料，可提高动物对饲料的利用率，增强生长发育速度，提高产品质量等。其中，酸性、中性蛋白酶是常用的添加剂之一，其作用是通过水解蛋白质使其易于被动物消化吸收，从而提高饲料的营养价值。

为了保证饲料添加剂的质量和有效性，需要对其酶活力进行准确测定。本文将介绍一种基于分光光度法的饲料添加剂酸性、中性蛋白酶活力测定方法。

实验方法

本实验采用GB/T28715-2012标准中的方法进行蛋白酶活力测定，具体步骤如下：

1. 制备0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH8.0），取0.605g Tris和0.703g HCl加入100ml去离子水中搅拌至溶解，再用0.1mol/L NaOH调节pH值至8.0±0.1；
2. 制备试样液，称取0.1g饲料添加剂样品，加入10ml 0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，置于40℃水浴中反应30min；
3. 制备对照液，取10ml 0.1mol/L Tris-HCl缓冲液作为对照组；
4. 制备底物液，称取1mg Nα-Benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide (BAPNA)，加入5ml甲醇并充分搅拌，再加入45ml0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，混合均匀后即得底物液；
5. 测定样品和对照组的吸光度值，在37℃恒温箱中加入50μL底物液、100μL试样液或对照液，同时加入0.1mol/L Tris-HCl缓冲液至总体积为5ml，并在30s内混合均匀。在1min和2min时分别测量吸光度值；
6. 计算酶活力，根据吸光度值计算试样液和对照液的酶活力，公式如下：

其中，ΔA表示试样液的吸光度值减去对照液的吸光度值，ε为BAPNA的摩尔消光系数，V为取样体积，t为反应时间（min）。根据计算公式可得到酸性、中性蛋白酶的活力值。

结果与分析

本实验采用分光光度法对饲料添加剂酸性、中性蛋白酶活力进行测定，得到了准确的酶活力值。通过比较样品和对照组的吸光度值，计算出酸性、中性蛋白酶的活力值，从而确定饲料添加剂的质量和有效性。

结论

本文介绍了一种基于分光光度法的饲料添加剂酸性、中性蛋白酶活力测定方法。该方法操作简便，结果准确可靠，适用于饲料添加剂蛋白酶酶活力的测定。