蜂蜜中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的测定液相色谱-串联质谱法

蜂蜜中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T22942一2008 蜂蜜中头饱陛琳、头饱匹林、头抱氨节、 头抱洛宁、头抱呸肪残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationofcefazolin,cephapirin.cephalexin,cefalonium cefquinommeresiduesinhoney一LC-MS-MSmethod 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22942一2008 前 言 本标准的附录A、附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;秦皇岛出人境检验检疫局 本标准主要起草人:李学民、母健、曹彦忠、刘晓茂、姜宁、庞国芳
GB/T22942一2008 蜂蜜中头抱陛味、头袍匹林头抱氨茉、 头抱洛宁,头饱哇肪残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了蜂蜜中头抱陛嗽、头抱匹林、头抱氨节、头抱洛宁、头抱唾肪残留量的液相色谱-串联 质谱测定方法 本标准适用于蜂蜜中头袍陛啾、头抱匹林、头袍氨节、头抱洛宁、头抱唾肪残留量的测定 本标准的方法检出限;头袍唾咻为104g/lkg;头袍匹林,头抱氨节、头袍洛宁、头抱畦厉为 2.04g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GBT6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义(GB/T6379.1- 2004,ISO5725-l:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,IsO5725-2:1994,IDT GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO36961987,MOD 原理 试样中五种头抱菌素类药物残留,用磷酸二氢钠缓冲溶液提取,固相萃取柱净化,液相色谱-串联质 谱仪测定,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯 水:GB/T6682,一级 4.2甲醇;色谱纯 4.3乙睛;色谱纯 44磷酸二氢钠(NaH,PO)). 4.5氢氧化纳 4.6乙酸 47 5mol/L氢氧化钠溶液;称取20g氢氧化钠(4.5),用水溶解,定容至100mL 4.80.15mol/儿磷酸二氢钠缓冲溶液;称取18.0g磷酸二氢钠(4.4)，用水溶解,定容至1000ml 然后用氢氧化钠溶液(4.7)调节至pH=8.5 4.9标准物质头抱哗琳(CAS,25953-19-9),头袍匹林(CAS,24356-60-3),头抱氨节(CASs,16549-56-7、 头袍洛宁(CAs5575-21-3),头袍唾肘(CAs;l18443-89-3),纯度>99% 4.101.01 mg/mL五种头袍菌素标准储备溶液:准确称取每种标准物质(4.9),分别用水配制成浓度为
GB/T22942一2008 1.0 mg/mL的标准储备溶液 储备液贮存在一18C冰柜中 4.11五种头抱菌素标准混合工作溶液;根据需要吸取适量的每种头抱菌素标准储备溶液(4.10),用空 白样品提取液制成适当浓度的基质混合标准工作溶液 4.12 固相萃取柱:OasiHLB固相萃取柱或相当者,500mg,6mL 使用前依次用5ml甲醉(4.2) 5 mL水(4.1)和10ml磷酸二氢钠缓冲溶液(4.8)预处理,保持柱体湿润 4.13滤膜:0.2m. 仪器 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪,配有电喷雾离子源 、0.01 5.2分析天平:感量0.1mg、 lg 5 固相萃取真空装置 5.4贮液器:501 ml 5.5微量注射器:25AL,.100AL 5.6刻度样品管;5mL,精度为0.lml 氨气浓缩仪 试样制备与保存 6 试样的制备 对无结晶的实验室样品,将其搅拌均匀 对有结晶的样品,在密闭情况下,置于不超过60C的水浴 中温热,振荡,待样品全部融化后搅匀,冷却至室温 分出0.5kg作为试样 制备好的试样置于样品瓶 中,密封,并做上标记 6.2试样的保存 将试样于常温下保存 测定步骤 7.1试样溶液的制备 称取5g试样(精确到0.01g)置于150mL三角瓶中,加人25mL磷酸二氢钠缓冲溶液(4.8),溶 解样品,混匀,用氢氧化钠溶液,调节至pH=8.5 把样品提取液移至下接OasisHLB固相萃取柱 (4.12)的贮液器中,以3mL/min的流速通过固相萃取柱,先用5m磷酸二氢钠缓冲溶液洗涤三角瓶 并过柱,再用2mL.水洗柱,弃去全部流出液 用2m乙睛洗脱,收集洗脱液于刻度样品管(5.6)中,在 40C氮气吹干,用2mL水溶解残渣,摇匀后,过0.2Am滤膜(4.13),供液相色谱-串联质谱仪测定 按 照上述操作步骤制备空白样品提取液 7.2测定条件 7.2.1液相色谱参考条件 色谱柱:ZORBAxSBC18,3.5Am,150mm×2.1mm(内径)或相当者; a 流动相梯度程序及流速见表1; b) e)柱温:30 C d)进样量;20AL 表1流动相梯度程序及流速 时间/min 流速/(L/min 水(含0.1%乙酸/% 乙睛/% 5.0 0.00 200 95.0 2.00 200 95.0 5.0
GB/T22942一2008 表1(续 时间/min 流速/l/min 水含0.1%乙酸)/% 乙睛/% 200 60.0 2.01 40.0 8.00 200 40.0 60.0 8.01 200 95.0 5.0 15.00 200 95.0 5.0 7.2.2质谱参考条件 a)离子源;电喷雾离子源; D 扫描方式;正离子扫描; 检测方式:多反应监测: 电喷雾电压;5500V d 雾化气压力:0.055MPa; e 气帘气压力:0.079MPa; 辅助气流速:6L/min g 离子源温度:400C; h 定性离子对定量离子对和碰撞气能量(CE),去簇电压(DP)见表2 表2五种头抱菌素的定性离子对、定量离子对,碰撞气能量、去簇电压 定性离子对 定量离子对 碰撞气能量" 去簇电压" 化合物中文名称 化合物英文名称 m/) m/) 456/324 头袍陛味 ceazolin 456/324 50 2 456/156 424/292 23 头抱匹林 424/292 45 cephapirin 3 424/152 348/158 1 348/158 头抱氨节 40 cephalexin 2 348/174 459/152 29 35 头弛洛宁 cefalonium 459/152 18 459/123 21 529/134 49 头抱呸肪 efquinomme 529/134 19 529/396 7.3液相色谱-串联质谱测定 7.3.1定性测定 选择每种待测物质的1个母离子,2个以上子离子,在相同试验条件下,样品中待测物质的保留时 间与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在士2.5%之内;样品谱图中各定性离子相对丰度与浓度 接近的基质标准溶液的谱图中离子相对丰度相比,偏差不超过表3规定的范围,则可判定为样品中存在 对应的待测物 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 相对离子丰度K K>50 20GB/T22942一2008 7.3.2定量测定 用基质标准混合工作溶液(4.1l)分别进样,以标准工作溶液浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘 制标准工作曲线 用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中五种头抱菌素的响应值均应在仪器测 定的线性范围内 在上述色谱条件下,五种头抱菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图参见附录A 中的图A.1 本方法的添加回收率数据参见附录B中的表B.1 7.4平行试验 按上述步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.5空白试验 除不称取试样外,均按上述分析步骤进行 结果计算 试样中五种头抱菌素残留量利用数据处理系统计算或按式(l)计算 1000 e！ X= 1000 式中: -试样中被测组分残留量,单位为微克每千克(4g/kg); nL) -从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度,单位为纳克每毫升(ng/ml -试样溶液定容体积,单位为毫升(mL); -最终试样溶液所代表的试样质量,单位为克(g) 7n 计算结果应扣除空白值 精密度 一般规定 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定的,其重复性和再现性的值 是以95%的可信度来计算 9.2重复性 在重复性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,试样中五种头抱菌 素添加浓度范围及重复性方程见表4 表4五种头抱菌素添加浓度范围及重复性限和再现性限方程单位为微克每千克 R 化合物名称 添加浓度范围 重复性限" 再现性限 头抱哗啾 10~100 g下=0.9465g-0.7255 R=0.9569gm一0.6176 头袍匹林 2.0~20 lg尸=0.9466lg朋-0.7656 gR=0.9680lgm一0.6771 头袍氨节 2.020 lgr=0.9428lgm-0.7628 gR=0,9494lgm一0.6452 头袍洛宁 2.020 r=0.1357m十0.1326 lgR=0.9066lg朋-0.6211 头袍肪 2.020 gr=0,9421lgm一0,7610 gR=0,9280lg川一0,6885 注;"为两次测定结果的算术平均值 如果两次测定值的差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 在再现性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,试样中五种头弛菌 素添加浓度范围及重复性方程见表4
GB/T22942一2008 附 录A 资料性附录 五种头抱菌素标准物质的多反应监测(IRM)色谱图 五种头抱菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图A.1 8.38 头袍畔琳 min 8.02 头预匹林 t/min 8.09 头他氮节 /min 8.,13 头抱洛宁 1/min 8,05 头抱嗜肘 1/min 图A.1五种头抱菌素标准物质的多反应监测(MIRM)色谱图
GB/T22942一2008 B 附 录 资料性附录 回 收 率 五种头抱菌素添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1 表B.1五种头抱菌素添加浓度及其平均回收率的试验数据 化合物名称 添加浓度/ug/kg 平均回收率/% 10.0 85.6 20,0 89.1 头袍幽啾 89.6 40.0 1o0.0 91." 2.0 86.7 4.0 92.4 头抱匹林 8.0 95.4 20.0 93.8 2.0 84.2 4.0 95.3 头袍氨节 98.1 8.0 20.0 94.3 2.0 87.2 4.0 91.7 头袍洛宁 8.0 l02.5 20.0 94.l1 2.0 93.7 96.5 4.0 头抱咋肪 91.5 8.0 20.0 97.9