畜禽肉中地塞米松残留量的测定液相色谱-串联质谱法

畜禽肉中地塞米松残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T20741一2006 畜禽肉中地塞米松残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 residues Methodforthedeterminationofdesamethasne" inlivestockandpoultrymuscles- LC-MS-MSmethod 2007-03-01实施 2006-12-31发布 国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T20741一2006 前 言 本标准的附录A和附录B为资料性附录 本标准由秦皇岛出人境检验检疫局提出 本标准由国家质量监督检验检疫总局归口 本标准起草单位:秦皇岛出人境检验检疫局、山东农业大学 本标准主要起草人:庞国芳、刘永明、曹彦忠、范春林、张进杰,李学民、吴艳萍、李金,连玉晶、林忠 本标准系首次发布的国家标准
GB/T20741一2006 畜禽肉中地塞米松残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中地塞米松残留量的液相色谱-串联质谱测定方法 本标准适用于牛肉、猪肉羊肉和鸡肉中地塞米松残留量的测定 本标准的方法检出限:0.2ug/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 (GB/T6379.1一2004,Iso5725-l:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,IsO5725-2;1994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T66821992,neqIs03696:1987 原理 动物组织样品中加人内标甲基强的松龙(6-alpha-methylprednisolone),样品用乙酸乙酯提取,提取 液浓缩后,经过ONDELUTsi固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱仪测定,内标法定量 试剂和材料 水为GB/T6682规定的一级水 甲醇;色谱纯 乙睛;色谱纯 乙酸乙酯;色谱纯 甲酸;优级纯 正己炕:色谱纯 内酮:色谱纯 丙酮-正己炕溶液I:丙酮正己婉(2+8) 丙酮-正己炕溶液I:丙酮十正己婉(4十6) 无水硫酸钠;分析纯 在650C马弗炉中灼烧6h,贮存于干燥器中 氢氧化钠优级纯 4.11氢氧化钠溶液;0.3mol/L 称取12g氢氧化钠,用水溶解,定容至1000ml 4.12地塞米松和甲基强的松龙标准物质:纯度>99% 4.13地塞米松标准储备溶液:l.0mg/mL 准确称取100mg地塞米松标准物质,用甲醉溶解,定容 至100 ml 配成的标准储备液可在温度低于一20C冰箱中保存三个月 4.14甲基强的松龙标准储备溶液;l.0mg/mL 准确称取100mg甲基强的松龙标准物质,用甲醉溶
GB/T20741一2006 解,定容至100mL 配成的标准储备液可在温度低于一20C冰箱中保存三个月 4.15地塞米松标准工作溶液吸取适量的地塞米松标准储备溶液,用甲醉分别配成54g/mL和 0.0504g/mL两种浓度的标准工作溶液 配成的标准工作溶液可在温度低于一20C冰箱中保存 个月 4.16地塞米松基质标准工作溶液;分别吸取适量的地塞米松标准工作溶液,用空白样品提取液分别配 成浓度分别为1.0ng/ml2.0ng/ml5.0ng/mL.50.0ng/mL的基质标准工作溶液 基质标准工作 溶液应现用现配 mL 4.17甲基强的松龙标准工作溶液吸取适量的甲基强的松龙标准储备溶液,用甲醇分别配成54g/n 和0.5 54g/mL两种浓度的标准工作溶液 配成的标准工作溶液可在温度低于一20C冰箱中保存 个月 4.18BONDELUTSi固相萃取柱或相当者;500mg,3ml 使用前用2ml.丙酮十正己婉(2十8)预 处理,保持柱体湿润 4.19滤膜:0.20 从m 0 仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪;配有大气压化学电离鄙(APc. 5.2分析天平感量0.1mg和0.01g 5.3液体混匀器 5.4固相萃取真空装置 5.5均质器 5.日振荡器 具塞玻璃离心管;50mL 7 5.8真空泵真空度应达到80kPa 5.9离心机 S 10旋转蒸发器 5. .11氮气浓缩仪 5. 12样品管;10mL 5. .13梨形瓶;150ml 5. .14筒形漏斗 试样的制备与保存 试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分搅碎,混匀,均分成两份,分别装人洁净容器内 密 封作为试样,注明标记 在抽样和制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 试样保存 6. 2 将试样于一18C冷冻保存 测定步骤 7.1提取 称取5g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞玻璃离心管中,加人0.54g/mL.内标甲基强的松龙 (G-alphamethylprednisolone)标准工作溶液20L,加人10ml0.3mol/1氢氧化钠溶液,在液体混匀 器上混匀1min,加20mL.乙酸乙酯,用均质器均质1min,在振荡器振荡20min,以3000r/min离心 5min,取上清液过盛有25g无水硫酸钠的简形漏斗至梨形瓶中 再用20ml乙酸乙酯提取一次,过无
GB/T20741一2006 水硫酸钠筒形漏斗,合并上清液,用旋转蒸发器于45C水浴上减压蒸发至近干,用1mL乙酸乙酯和 5 m 正己烧溶解 7.2净化 将提取液移至经预处理的BONDELUTsi固相萃取柱中,用2ml丙酮十正己烧(4十6)洗涤梨形 瓶和萃取柱,弃去全部流出液 在65kPa的负压下,减压抽干1min,用6mL丙酮十正己烧(4十6)以 <3mlL/min流速洗脱,收集洗脱液于10ml.样品管中,用氮气浓缩仪吹干,用1ml.流动相溶解,过 0.20m滤膜,供液相色谱-串联质谱仪测定 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 色谱柱;AtlantisdC,3um,150mm×2.1mm(内径)或相当者， a 流动相:乙睛+0.1%甲酸水(50十50); bb 流速;200L/min c 柱温;30C; d 进样量:20L e 质谱条件 离子源;大气压化学电离源(APCI) a b 扫描方式:正离子扫描 检测方式:多反应监测; c 雾化电流:3.00uA 气帘气压力;0.138MPa; 雾化气压力;0.276MPa; 辅助加热气压力:0.138MPa:; g 离子源温度;250C h 定性离子对,定量离子对,去簇电压和碰撞能量见表1 表1地塞米松和甲基强的松龙的质谱参数 名称 定性离子对(m/: 定量离子对(m/2) 去簇电压/八V 碰撞能量/八V 14 393,2/373.2 21 地塞米松 393.2/373,2 21 393.2/355.2 17 375.2/161.2 16 26 甲基强的松龙 375.2/161.2 16 375.2/339.2 7.3.3液相色谱-串联质谱测定 在仪器最佳工作条件下,采用内标法进行定量测定,内标为甲基强的松龙,为减少基质的影响,定量 采用基质标准工作溶液进样,样品溶液中地塞米松的响应值应在仪器测定的线性范围内 地塞米松和 甲基强的松龙标准物质总离子流图参见图A.1 在上述色谱条件和质谱条件下,地塞米松和甲基强的 松龙参考保留时间见表2 表2地塞米松和甲基强的松龙的参考保留时间 名 称 保留时间/min 地塞米松 3,75 甲基强的松龙 3.48 本方法的添加回收率数据参见附录B
GB/T20741一2006 7.4平行试验 按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.5空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤同时完成空白试验 结果计算 测定结果可由计算机按内标法自动计算,也可按式(1)计算 1000 X= -"会只"会H 1000 式中 -试样中被渊物残留量.单位为做克每干克(g/ke) 基质标准工作溶液中被测物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mlL); 试样溶液中被测物的色谱峰面积 基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积; 试样溶液中内标物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); 基质标准工作溶液中内标物的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); 基质标准工作溶液中内标物的色谱峰面积; 试样溶液中内标物的色谱峰面积 样液最终定容体积,单位为毫升(mL) 试样溶液所代表试样的质量,单位为克(g) m 注:计算结果应扣除空白值 精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,重复性和再现性的值 以95%的可信度来计算 重复性 在重复性测定条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,动物组织中地塞米 松含量范围及重复性方程见表3 表3含量范围及重复性和再现性方程 名称 含量范围/(ug/kg) 重复性限r 再现性限R 地塞米松 0.210.0 lgr=1.0682lgm一0.6579 lgR=1.0357lg一0.5583 注:m为两次测定结果的算术平均值， 如果差值超过重复性限,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 9.2再现性 在再现性测定条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,动物组织中地塞米 松的含量范围及再现性方程见表3.
GB/T20741一2006 附 录 A 资料性附录 地塞米松和甲基强的松龙标准物质总离子流图 地塞米松和甲基强的松龙标准物质总离子流图,见图A.1 3.75 650 地寒米松 1600 550 500 450 406 350 300 256 3.48 206 甲基强的松龙 56 100 050 000 950 900 85o 800 750 700 650 600 55o 500 450 400 350 300 250 200 150 100 3.96 50 /min 图A.1地塞米松和甲基强的松龙标准物质总离子流图
GB/T20741一2006 附录 B 资料性附录 收率 本方法牛肉中地塞米松添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1 表B.1地塞米松添加浓度及其平均回收率的试验数据 药物名称 添加浓度/ug/kg 平均回收率/(% 0.2 98.68 0.4 89.94 地塞米松 1.0 91.36 98.72 10.0