蜂胶中阿魏酸含量的测定方法液相色谱-紫外检测法

蜂胶中阿魏酸含量的测定方法液相色谱-紫外检测法

国家标准 GB/T23196一2008 蜂胶中阿魏酸含量的测定方法 液相色谱-紫外检测法 Determinationofferulicaeidcontentinpropolis一HPLC-UVmethod 2008-12-31发布 2009-06-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23196一2008 前 言 本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录 本标准由中华全国供销合作总社提出并归口 本标准起草单位;杭州澳医保灵药业有限公司、中华全国供销合作总社蜜蜂产品标准化技术委员 会、农业科学院蜜蜂研究所、江苏出人境检验检疫局、南京大学、江苏老山生物科技有限公司 本标准主要起草人;虞英民,胡晓岚、朱金梁、徐承智、周金慧、李公海、陈坤、练鸿振
GB/T23196一2008 蜂胶中阿魏酸含量的测定方法 液相色谱-紫外检测法 范围 本标准规定了蜂胶中阿魏酸含量的液相色谱测定方法 本标准适用于蜂胶中阿魏酸含量的测定 本标准的检出限:4g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,ISO3696;1987,MOD) 原理 蜂胶中的阿魏酸经甲醇超声提取,沉淀、离心,再用0.454m滤膜过滤后得澄清液,经反相色谱谐柱 分离后,用液相色谱-紫外检测器测定,外标法定量,根据保留时间和峰面积进行定性和定量 试剂和材料 除另有规定外,所用试剂均为分析纯;水为GB/T6682规定的一级水(为蒸僧水或同等纯度水);未 指明用何种浴剂配制时,均指水溶液 甲醇;色谱纯 4.20.085%磷酸溶液(体积分数);量取0.85ml 磷酸,用水定容至1000mL,经0.45um滤膜过滤 4.3乙睛;色谱纯 70%甲醇(体积分数);量取70ml分析纯甲醇,加30mL水混合均匀 4.5阿魏酸标准物质;纯度>99% 4.6阿魏酸标准储备溶液(200.0 g/ml)准确称取10.0mg(精确到o.1me)阿魏酸标准物质(4.5 于50mL棕色容量瓶中,加70%甲醇(4.4)使其溶解并定容至刻度,混匀,此溶液可在温度低于4C冰 箱中冷藏保存两个月 阿魏酸标准工作溶液:分别吸取适量的阿魏酸标准储备辫液(4.6)1mL、2.5mL、5.0mL. 4.7 0.0mL.20.0mL.40.0mL80.0mL 至100mL容量瓶中,用70%甲醉(4 4)定容至刻度,配成 2.0ug/ml、5.0 /ml、80.0 /ml、l60.0 4g/ml、l0.04g/ml、20.04g/ml,40.0 04g/ml标准工作 0从g/ 0从g 溶液,现配现用 仪器与设备 液相色谱仪:配有紫外检测器 5.2分析天平;精确至0.1mg 过滤膜(聚偏氟乙烯微孔滤膜F型,$25mm);0.45pm. 超声仪
GB/T23196一2008 5.5离心机 5.6匀浆仪 试样的制备与保存 6 试样的制备 从全部蜂胶样品中取出约100g样品,装人洁净容器中分成两份,密封,并做标记 试样的保存 将试样于-10C以下保存 测定步骤 试样处理 将试样置冰柜中-10C以下冷冻,取出冷冻贮存的试样20g30g,迅速用匀浆仪打碎,称取试样 0.5g(精确到0.1mg),置于50mL棕色容量瓶中,加人35mL甲醇(4.1),超声15min(频率为 25kHz,功率为50w),加人10ml水,摇匀冷却到室温后,用水定容至刻度混匀;以4500r/min的 转速离心201 min,上清液用0.45am滤膜(5.3)过滤,滤液用于液相色谱仪紫外检测器测定 7.2色谱测定 7.2.1液相色谱条件 a 色谱柱;HypersilODS2,5Am,4.6mmx×200mm b 流动相:以0.085%磷酸溶液(4.2)为流动相A,以甲醉(4.1)为流动相B,以乙睛(4.3)为流动 相C,按表1进行梯度洗脱 表1梯度洗脱方法 时间/min 流速/ml/min0.085%磷酸溶液(流动相A/%甲醇(流动相B)/% 乙晴流动相C -20 83 2021 83一0 0-l00 117-0 l.0-l，5 2136 100 3637 1.5 0-83 00-0 0--17 83 3752 1.5 梯度洗脱方法;见表1 e) d 进样量;20AL 检测波长:316nm. e 柱温:30C f 7.2.2液相色谱测定 测定5个~7个系列浓度标准工作溶液(4.7)在上述色谱条件下的峰面积,以峰面积对相应浓度绘 制标准工作曲线,然后测定未知样品,用标准工作曲线对样品进行定量,使样品溶液中阿魏酸的响应值 在本法的线性范围内 在上述色谱条件下,阿魏酸的保留时间约为13.9min,阿魏酸标准物质色谱图和 含有阿魏酸的蜂胶样品色谱图参见图A.l、图A 2 7.3平行试验 按上述步骤,对同一试样进行平行试验测定 空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤,应不干扰测定
GB/T23196一2008 结果计算 试样中阿魏酸含量利用数据处理系统计算或按式(1)计算 cx50 X= m 式中: 试样中阿魏酸的含量,单位为微克每克4E/E); 试样中阿魏酸的浓度,单位为微克每毫升4g/mL); 试样定容体积(mL); 50 试样的质量,单位为克g). mn 计算结果保留三位有效数字 精密度 在对同一试样进行二次平行试验获得的二次测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10% 本标准的研究资料参见附录B和附录C
GB/T23196一2008 附 录A 资料性附录 标准物质色谱图和含有阿魏酸的蜂胶样品色谱图 A.1阿魏酸标准物质色谱图.见图A.1 55 50 45 5 30 25 20 l 10 w 2 1n 10 18192D 时间/min 图A.1标准物质色谱图 A.2含有阿魏酸的蜂胶样品色谱图,见图A.2 553 50 45 40” 35 30 25- 20 15 10 8号 sg 91011 时闻/mi 图A.2样品色谱图
GB/T23196一2008 B 附 录 资料性附录 方法学研究资料 B.1线性关系考察;见表B.1 表B.1含量测定线性关系试验结果(n:7) 浓度/4g/mL) 2.0 5.0 10.0 20.0 40.0 80.0 160.o 峰面积 119334 271840 542793 1059571 2144527 4388100 8443418 . 线性方程 =52976.r十25179 R'=0.9996 B.2紫外扫描图:见图B.1 1.000 0.500 0.000 -0.100 220.00 250.00 300.00 350.00 400.00 ntm 蜂值检测 序号 波长/" 吸收值 /nm 316,40 0,421 386,8o -0.003 258.80 0.1014 图B.1紫外扫描图
GB/T23196一2008 附 录 C 资料性附录 阿 魏 酸 CAs;1135-24-6 英文名称;3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-propenoicacid ferulicacid 4-hydroxy-3-methoXycinnamicacid 3methoxy-4-hydroxyeinnanmicacid 化学名称:3-(4-羚基-3-甲氧基苯基)2-丙烯酸 阿魏酸 4-羚基-3-甲氧基肉桂酸 3-甲氧基-4-羚基肉桂酸 相对分子质量:194.19 分子式:CHO 结构式: 性状描述;有顺反异构体 E型,正方棱状结晶,熔点为174C;Z型,黄色油状液体,溶于热水、乙 醇、乙酸乙酯.乙醒中可溶,石油醒、苯中难溶 用途;利胆酸的中间体,食品防腐剂