蜂王浆中三甲氧苄氨嘧啶残留量的测定液相色谱-串联质谱法

蜂王浆中三甲氧苄氨嘧啶残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T22948一2008 蜂王浆中三甲氧芒氨喀残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationoftrimethoprimresiduesinryaljelly一 LC-MS-MSmethod 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22948一2008 前 言 本标准的附录A、附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;秦皇岛出人境检验检疫局 本标准主要起草人:曹彦忠、贾光群、张进杰、石玉秋、王占英、庞国芳
GB/T22948一2008 蜂王浆中三甲氧节氨喀残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了蜂王浆中三甲氧节氨嗜啶残留量液相色谐-串联质谐测定方法 本标准适用于蜂王浆中三甲氧茉氨喘残留量的测定 本标准的方法检出限为2.04g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 GB/T6379.12004,ISO5725-l:l994,IDT GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分:确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.22004,ISO5725-2:1994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO3696;1987,MOD) 原理 蜂王浆中残留的三甲氧节氨喘驼用去离子水提取，三氧乙酸沉淀蛋白,离心后,上清液经Oasis McX离子交换柱"或相当的固相萃取柱净化用氨水-甲醇洗脱并蒸干,残渣用乙睛-0.1%甲酸水溶液 溶解 样品溶液供液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量 试剂和材料 水.GB/T 6682，一级 4.2甲醇;色谱纯 4.3乙睛,色请纯 4.4三氨乙酸;优级纯 4.5甲酸优级纯 氨水:分析纯 三氨乙酸溶液:50%(质量分数) 20g三氧乙酸(4.4)溶于20mL水中 4.82%甲酸溶液;吸取2ml甲酸(4.5)用水稀释至100mL 4.9 0. .1%甲酸溶液;吸取1ml 甲酸(4.5)用水稀释至1000mL 410流动相;乙精0.1%甲胶游液(7+1)) 4.11氨水-甲醉溶液(1十19).5ml氨水(4.6)与95ml甲醉(4.2)混合均匀 4.12三甲氧节氨喀唁标准物质(CAs;738-70-5);纯度>99%. 4.130.1 mg/ml标准储备溶液;准确称取适量的标准物质(4.12),用甲醉配成0.lmg/ml的标准储 1 OasisMCX离子交换柱是Waters公司产品的商品名称,给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不是表 示对该产品的认可 如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品
GB/T22948一2008 备溶液,该溶液在4C保存 4.14标准工作溶液;吸取0.1ml.标准储备溶液(4.13),移至10ml容量瓶中,用甲醇配成1.04g/ml 的标准工作溶液 该标准工作溶液在4C保存 OasisMCx柱或相当者;150mg,6mL 用前依次用5mlL甲醇和10mL水活化 保持柱体 4.15 湿润 16滤膜:0.2Am. W 仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源 5.2液体混匀器 5.3振荡器 5.4氮气浓缩仪 5.5分析天平;感量0.lmg和0.01g 5 .6 真空泵;真空度应达到80kPa 5.7聚丙烯离心管:50mL 5.8移液器.0.1mL.lml. 5.9玻璃贮液器;,50 ml 5. 10浓缩管:10mL 试样制备与保存 6 试样的制备 对于冷冻的实验室样品,待其解冻后将其搅拌均匀 分出0.5kg作为试样 制备好的试样置于样 品瓶中,密封,并做上标记 6.2试样的保存 将试样于一18C冷冻保存 测定步骤 提取 称取2g试样,精确至0.01g 置于50mL具塞的聚丙烯离心管中,加人20mL水,于液体混匀器 5.2)上快速混匀1min,再置于振荡器(5.3)上振荡提取10min,加人50%三氯乙酸溶液0.5ml,快速 摇动0.5min，以3000r/min离心5min,移取上清液至另一离心管中,再向残渣中加人15ml.水,重 复上述步骤,合并上清液 7.2净化 将塞有玻璃棉塞的玻璃贮液器(5.9)连到OasisMCX柱(4.15)上,将上清液(7.1)倒人玻璃贮液器 5.9)中,使样液以小于3mL/min的流速通过OasisMCX柱,待样液完全流出后,分别用5mL甲酸溶 液(4.8)和5ml甲醇(4.2)洗柱,弃去全部流出液 最后用5mL氨水-甲醇溶液(4.11)洗脱,收集洗脱 液于10mL浓缩管(5.10)中 在45C水浴中用氮气浓缩仪(5 4)吹干 准确加人1.0ml流动相 4.10)溶解残渣,样液过0.2um滤膜后,供液相色谱-串联质谱仪测定 7.3基质标准工作溶液的制备 称取4份阴性样品各2日，精确至0.0l！ 置于0mL具塞的聚丙始管中,分别加人4pL.l0p山 20L,0L100标准工作溶液(4.14),按7.1和7.2步骤操作 制备成浓度为2.0ng/ml
GB/T22948一2008 5.0 ng/ml.0.0ng/mL,.20.0ng/mL,50.0ng/mL的基质标准工作溶液 7.4测定条件 7.4.1液相色谱参考条件 色谱柱:Atlan n,150mm×2.1mm(内径)或相当者; a antis,3m b)流动相:乙睛-0.1%甲酸溶液(7十13); c)流速:0.2mL/min; 柱温;35C; dD 进样量;20L e) 7. .4.2质谱参考条件 a)离子源;电喷雾离子源; D) 扫描方式;正离子扫描; 检测方式;多反应监测; D 电喷雾电压5500V; 雾化气压力:0.076MPa; 气帘气压力:0.069MPa; g 辅助气流速;7L/min:; 离子源温度;450C; h 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表1 表1三甲氧节氨喀的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压 中文名称 英文名称 定性离子对(m/定量离子对(m/) 碰撞气能量/V 去簇电压/V 35 291/230 291/230 50 三甲氧节氨喘吮 40 trimethoprim 291/123 50 35 50 291/275 7.5液相色谱-串联质谱测定 7.5.1定性测定 将被测组分分别选择1个母离子,2个以上子离子,在相同的试验条件下,样品中待测物质的保留 时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接 近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,若偏差不超过表2规定的范围,则可判定样品中 存在对应的待测物 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 K>50 20之K50 10GB/T22948一2008 结果计算 蜂王浆中三甲氧节氨喘唁残留量的测定结果按式(1)计算 1000 x=c×Y TO m" 式中: -试样中被测组分残留量,单位为微克每干克(s/Ake) 从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/ml.); -样品溶液定容体积,单位为毫升(mL) -样品溶液所代表试样的质量,单位为克(g). N 计算结果应扣除空白值 精密度 9.1一般规定 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,其重复性和再现性的 值是以95%的可信度来计算 9.2重复性 在重复性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,蜂王浆中三甲氧节 氨密畦添加浓度范围及重复性方程见表3. 表3添加浓度范围及重复性和再限性方程 单位为微克每千克 化合物名称 重复性限" 添加浓度范围 再现性R -0.8475 三甲氧节氨喀唉 -0.7759lgm一 2.050.0 lgr一 gR=0,6223lgm一0,6811 注:m为两次测定值的平均值 如果差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 9 在再现性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,蜂王浆中三甲氧节 氨喀瞠的添加浓度范围及再现性方程见表3.
GB/T22948一2008 附 录A 资料性附录 标准物质多反应监测(MRN)色谱图 三甲氧节氨唁晓标准物质多反应监测(MRM)色谱图见图A.1 制5.0e4 应 值 2.39 4.0e4 3.0e4 2.0e4 1.0e4 0.0 1.0 1.52.0 3.5 /min" 2.5 3.0 图A.1三甲氧节氨喀驼标准物质多反应监测(NIRNM)色谱图
GB/T22948一2008 附 录 B 资料性附录 回 收 率 本方法中三甲氧节氨喀添加浓度及其平均回收率试验数据见表B.1 表B.1三甲氧节氨嗜靛添加浓度及平均回收率试验数据 化合物名称 加浓度/4g/kg 平均回收率/% 2.0 01.7 98.1 5.0 三甲氧芋氨密嚏 10.0 97.5 50.0 104.3