GB/T40644-2021
杜仲叶提取物中京尼平苷酸的检测高效液相色谱法
Determinationofgeniposidicacidinextractofeucommiaulmoidesoliverleaf—HPLC
- 中国标准分类号（CCS）B04
- 国际标准分类号（ICS）65.020.01
- 实施日期2022-05-01
- 文件格式PDF
- 文本页数6页
- 文件大小530.80KB
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杜仲叶提取物中京尼平苷酸的检测高效液相色谱法
国家标准 GB/T40644一2021 杜仲叶提取物中京尼平苷酸的检测 高效液相色谱法 Determinationofgeniposidicaeidinextraetofeucommiaumoidesoliverleaf HPLC 2021-10-11发布 2022-05-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/40644一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草
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GB/T40644一2021 杜伸叶提取物中京尼平苷酸的检测 高效液相色谱法 范围 本文件描述了用高效液相色谱测定杜仲叶提取物中京尼平苷酸含量的原理、试剂与材料、仪器与设 备、测定步骤、结果计算与表示,重复性、精密度和加标回收率
本文件适用于杜仲叶提取物中京尼平苷酸含量的测定
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 原理 在同一个分析周期中,按一定时间程序调节流动相配比,使杜仲叶提取物中关健组分按各自适宜的 容量因子达到良好的分离目的
采用京尼平苷酸对应的标准物质外标法直接定量,采用的色谱柱为反相C18柱
注:京尼平苷酸又称为京尼平代酸、柜子苷酸或桅子试酸,是一种环烯帖葡萄糖苷
京尼平苷酸紫外光谱测定表明其最大紫外吸收波长为240nm,因此确定240nm作为京尼平苷酸 的高效液相色谱检测波长
5 试剂与材料 除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682一级的水 5.1试剂 5.1.1甲醇(CH,OH),色谱纯
5.1.2磷酸HPO),含量85%
5.2标准品 京尼平昔酸标准品;纯度>98%.
5.3京尼平苷酸标准储备溶液 称取200mg(精确至0.001g)京尼平苷酸标准品,置于100mL.容量瓶中,用甲醇使其溶解并定容
GB/T40644一2021 至刻度线,混匀
5.4京尼平苷酸标准工作溶液 将京尼平昔酸标准储备溶液用甲醇稀释制备一系列标准溶液,标准液浓度分别为0.01mg/ml 0.05mg/mL,0.10mg/ml,0.20mg/mL,0.40mg/mL,0.60mg/mL、1.2mg/mL,临用时配制
5.5材料 滤膜,孔径0.454m有机相滤膜
仪器与设备 o 6.1分析天平;灵敏度万分之一克
6.2高效液相色谱仪;包含梯度洗脱系统、紫外检测器及色谱工作站
6.3超声波清洗仪;超声频率40kHz一80kHz
检测方法 7.1样品处理 称取杜仲叶提取物样品0.050g(精确至0.001g),置于烧杯中,加适量甲醇超声溶解,然后转移至 50ml容量瓶中,定容至刻度，摇匀,用0.454m有机相滤膜微滤,然后进样人HPIC分析
7.2测定条件 按照制造商操作手册运行高效液相色谱仪
以下分析条件可供参考,采用其他条件应验证其适 用性
色谱条件如下 色谱柱RPC18[250mm×4.6mm(内径),54nm] 流速:l.0mL/min; 柱温:30C; 进样量;10L 检测波长;240nm: 流动相:A甲醇;B.0.1%磷酸水溶液
采用梯度洗脱梯度洗脱条件见表1
表1IHPLC梯度洗脱条件 甲醉(A/ 1% 洗脱时间/min 0.1%磷酸水溶液(B)/% 100 94 13 13 87 22 20 8o 30 25 75 40 50 50
GB/T40644一2021 7.3标准曲线绘制 按7.2色谱条件检测,分别吸取10L标准品标准工作溶液注人高效液相色谱仪,以色谱峰的峰面 积为纵坐标,对应的工作溶液标准品浓度为横坐标,进行线性回归分析得到标准曲线方程
京尼平苷酸标准品的HPLC色谱图参见附录A
7.4试样测定 按7.2的色谱条件,取7.1步骤中的滤液进样,得到试样溶液的峰面积,根据保留时间和京尼平苷酸 标准品色谱图定性
根据标准曲线计算试样溶液中京尼平苷酸的含量
试样溶液中京尼平苷酸的响应值应在标准曲线的线性范围内,超过线性范围则应将试样溶液稀释 后测定或增加提取物的质量重新检测
结果计算与表示 8.1结果计算 杜伸叶提取物中京尼平背酸含量按式(1)进行计算 c×V X一 式中: 样品中京尼平苷酸的含量,单位为毫克每克(mg/g) X 样品中京尼平苷酸的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL); 最终定容后样品的体积,单位为毫升(mL); 试样的质量,单位为克(g)
m 8.2结果表示 计算结果以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留至小数点后两位有效 数字
重复性 9 在重复条件下获得的5次独立测定结果的相对标准偏差小于5%
10 精密度 取同一试样,连续进样5次,按7.2的色谱条件检测其HPLC图谱;比较京尼平苷酸对应色谱峰的 峰面积,5次进样的峰面积的相对标准偏差(RSD)不超过5%
加标回收率 标准品添加量在待测样品浓度0.51.5倍浓度范围内,回收率在90%110%之间,相对标准偏差 小于10%
GB/T40644一2021 附 录 A 资料性 色谱图示例 京尼平苷酸标准样品及提取液色谱图示例见图A.1和图A.2
其中,峰1为京尼平苷酸
140000 120000 100000 80000 60000 40000 20000 20 30 40 50 /min 图A.1京尼平苷酸标准品的色谱图 700000 600000 500000 400000 300000 200000 100000 20 30 50 /min 图A.2杜仲叶提取物的色谱图
高效液相色谱法检测杜仲叶提取物中京尼平苷酸（GB/T40644-2021）
杜仲叶提取物中京尼平苷酸是一种具有广泛应用前景的天然药物成分。为了快速、准确地检测杜仲叶提取物中京尼平苷酸含量，我们可以采用GB/T40644-2021标准规定的高效液相色谱法进行测试。
该方法包括以下步骤：
1. 样品的制备：将杜仲叶粉末称取一定量，用甲醇超声提取，离心并过滤，最后调整pH值。
2. 色谱条件设置：采用高效液相色谱仪进行检测，使用C18反相色谱柱，以乙腈和水为流动相，梯度洗脱。检测波长为254nm。
3. 标准曲线绘制：根据标准品京尼平苷酸的不同浓度进行测试，得到峰面积与质量浓度的相关性，从而建立标准曲线。
4. 样品检测：将样品注入色谱仪中进行检测，根据标准曲线计算出其京尼平苷酸的含量。
通过该方法检测，可以准确地确定杜仲叶提取物中京尼平苷酸的含量，保证其药效和质量。此外，该方法还可以应用于其他天然药材中活性成分的检测，在药学和生命科学领域具有重要的意义。
