化妆品中九种四环素类抗生素的测定高效液相色谱法

化妆品中九种四环素类抗生素的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T24800.1一2009 化妆品中九种四环素类抗生素的测定 高效液相色谱法 Determimationof9tetraeyelinesinc0smetiesby highperformanceliquidchromatographymethod 2009-11-30发布 2010-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T24800.1一2009 引 言 本标准中的被测物质是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质,不得作为化妆品生产原料即组分 添加到化妆品中 如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时,则化妆品成品应符合《化妆品 卫生规范》对化妆品的一般要求,即在正常及合理的可预见的使用条件下,不得对人体健康产生危害 目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法
GB/T24800.1一2009 化妆品中九种四环素类抗生素的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了化妆品中九种四环素类抗生素的高效液相色谱测定方法 本标准适用于皮肤护理类化妆品中九种四环素抗生素的测定 本标准二甲胺四环素的检出限为25mg/kg,土霉素,四环素、去甲基金霉素的检出限为l0mg/kg" 金霉素、美他环素、多西环素的检出限为5mg/kg,差向脱水四环素和脱水四环素的检出限为 2.5mg/kg 二甲胺四环素的定量限为50mg/kg，土霉素、四环素、去甲基金霉素的定量限为25mg/kg,金霉 素,美他环素、多西环素的定量限为10mg/kg,差向脱水四环素和脱水四环素的定量限为5mg/kg 原理 以甲醇为溶剂,超声提取、离心,0.45m的有机滤膜过滤,溶液注人配有二极管阵列检测器 (DAD)的液相色谱仪检测,外标法定量 试剂和材料 除另有规定外,试剂均为分析纯 3.1甲醇:色谱纯 3.2乙睛:色谱纯 3.3九种四环素,纯度不小于97.0%;土霉素,纯度不小于97.9%;金霉素,，纯度不小于99.0%;多西 环素,纯度不小于96.5%;美他环素,纯度不小于99.6%;去甲基金霉素,纯度不小于99.0%;二甲胺四 环素,纯度不小于99.0%;脱水四环素,纯度不小于90.0%;差向脱水四环素,纯度不小于90.0% 3.4九种四环索类抗生素标准储备液;准确称取各类四环素(3.3)0.1g,精确到0.0001g,分别置于 50mL烧杯中,加适量甲醇溶解,溶液定量移人100ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,混匀,即得浓度 为1000mg/L的标准储备液 九种四环素类抗生素混合标准储备液;分别移取上述标准储备液(3.4)各10ml至100ml容量瓶 中,用甲醇定容至刻度,即得浓度为100mg/L的标准混合储备液 九种四环素类抗生素标准工作溶液用甲醉将上述混合标准储备液(3.5)分别配成一系列浓度为 3.5 1mg/L,2mg/L、5mg/儿、,10mg/L,20mg/L,50mg/儿的标准工作溶液,冰箱冷藏保存,可使用一周 3.60.01mol/草酸溶液;称取草酸(CH.O2H.O)1.26g,精确至0.001g,于50ml烧杯中,加 水溶解后,移人1000ml容量瓶中,用水定容至刻度,混匀,即得0.01mol/L的草酸溶液 仪器 液相色谱仪,配有二极管阵列检测器 微量进样器,10L 4.3超声波清洗器 4 4 离心机,大于5000r/min 4.5溶剂过滤器和0.45Am有机过滤膜
GB/T24800.1一2009 4.6具塞比色管,10mL 测定步骤 样品处理 称取化妆品试样约0.2g,精确到0.001g,于10mL具塞比色管中,加人约8mL甲醇,在超声波清 洗器中超声振荡30min,冷却至室温后,加甲醉定容至刻度 取部分溶液放人离心管中,在离心机上于 5000!/min离心20min,离心后的上清液经0.45Am有机滤膜过滤,滤液供测定用 5.2测定 5.2.1色谱条件 5.2.1.1色谱柱;KromasilC柱(250mm×4.6mm(内径),5Am,或相当者). 5.2.1.2流动相:A:甲醇与乙睛的混合溶液(1+3,V/V),B;:0.01mol/L的草酸溶液(3.7),梯度洗脱 条件见表1 表1方法的梯度洗脱条件 时间/minm A/% B/% 78 22 58 42 42 58 12 60 40 5.2.1.3流速:1.0mL/nmin 5.2.1.4检测波长;程序可变波长:;0一4.00min为350nm,4.01min~12.00min为270nm. 5.2. 柱温;25C 1 5 2. .1.6进样量:10L 5 5.2.2标准工作曲线绘制 分别移取一系列浓度为1.0mg/L、2.0mg/L5.0mg/L、10mg/L20mg/L.50mg/L的标准工作 溶液,按色谱条件(5.2.1)进行测定,记录色谱峰面积,以色谱峰的峰面积为纵坐标,对应的溶液浓度为 横坐标作图,绘制标准工作曲线 九种四环素的标准液相色谱图参见附录A的图A.1 5.2.3试样测定 用微量注射器吸取试样溶液(5.l)注人液相色谱仪,按色谱条件(5.2.1)进行测定,记录色谱峰的保 留时间和峰面积,由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的浓度 样品溶液中的被测物响应值均 应在仪器测定的线性范围之内 含量高的试样可取适量试样溶液用流动相稀释后进行测定 5 .2.4定性确认 液相色谱仪对样品进行定性测定,进行样品测定时,如果检出四环素类抗生素的色谱峰的保留时间 与标准品相一致,并且在扣除背景后的样品色谱图中,该物质的紫外吸收图谱与标准品的紫外吸收图谱 相一致,则可初步确认样品中存在被测四环素类抗生素 必要时,阳性样品需用其他方法进行确认 试验 5.3平行试验 按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定 空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤进行 结果计算 结果按式(1)计算(计算结果应扣除空白值):
GB/T24800.1一2009 V " X= 77 式中: 样品中被测四环素的质量浓度,单位为毫克每千克(mg/kg) Y 标准曲线查得被测四环素的浓度,单位为毫克每升(mg/L) 样品稀释后的总体积,单位为毫升(mL); 样品质量,单位为克(g). 方法检出限与定量限 二甲胺四环素的检出限为25mg/kg土霉素、四环素、去甲基金霉索的检出限为10g/kg,金霉 素,美他环素、多西环素的检出限为5mg/kg,差向脱水四环素和脱水四环素的检出限为2.5mg/kg 二甲胺四环素的定量限为50g/kg,土霉素、四环素、去甲基金霉索的定量限为25g/kg,金霉 素,美他环素、多西环素的定量限为10mg/kg,差向脱水四环素和脱水四环素的定量限为5mg/kg 回收率与精密度 在添加浓度5mg/kg500mg/kg浓度范围内,回收率在85%~l10%之间,相对标准偏差小 于10% 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%
GB/T24800.1一2009 附录 A 资料性附录 标准物质的液相色谱图 mAU门 800 600 400 " 200 甲胺四环素(3.489min); 土霉素(5.450min) 四环素(5.805min); 去甲基金霉素(6.340min 金霉素(7.047min)7 美他环素(7.290min); 多西环素(7.712" main; 差向脱水四环素(7.945min); -脱水四环索(9.159 min 图A.1九种四环素的标准液相色谱图