GB/T40486-2021
蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量的测定高效液相色谱法
Determinationofmelittincontentinbeevenompowder—Highperformanceliquidchromatography
- 中国标准分类号（CCS）B47
- 国际标准分类号（ICS）65.140
- 实施日期2022-03-01
- 文件格式PDF
- 文本页数7页
- 文件大小427.18KB
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蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量的测定高效液相色谱法
国家标准 GB/T40486一2021 蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量的测定 高效液相色谱法 Determinationofmelittineontentinbeevenommpowder Highperformaneeliquidchromatography 2021-08-20发布 2022-03-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/40486一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草
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本文件由中华全国供销合作总社提出
本文件由全国蜂产品标准化工作组归口
本文件起草单位:农业科学院蜜蜂研究所、中医科学院中药研究所 本文件主要起草人:李熠周金慧、黄京平、王鹏张永欣
GB/T40486一2021 蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量的测定 高效液相色谱法 范围 本文件规定了蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量测定的高效液相色谱分析方法
本文件适用于蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量的测定
规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义
原理 蜂毒溶血肽是蜂毒的主要生物活性物质,试样中的蜂毒溶血肽易溶于水,紫外最大吸收波长为 220nm.因此,用纯水溶解蜂毒干粉试样,提取液过滤后利用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定 外标法定量
试剂和材料 水为符合GB/T6682规定的一级水
试剂 5.1 5.1.1乙晴;色谱纯
5.1.2三氟乙酸;色谱纯
5.2标准品 蜂毒溶血肽(melitin,CAs:20449-79-0纯度>97%
5.3溶液的配制 5.3.1蜂毒溶血肽标准储备液(10mg/mL)准确称取蜂毒溶血肽标准物质100mg于10mL容量瓶 中,用水溶解并稀释至刻度
5.3.2蜂毒溶血肽标准工作液;分别量取适量标准储备液,用水稀释成质量浓度为204g/ml
GB/T40486一202 50 4g/mL、100"g/ml,2004g/mL,5004g/mL和2000"g/ml的系列标准工作液
5.3.30.08%三氟乙酸-乙晴溶液;取0.8ml三氟乙酸加人1.0L乙睛中充分混合
5.4材料 5.4.1 -次性注射器;lml
5.4.2滤膜;0.2Mm水相
仪器和设备 6 6.1高效液相色谱仪;配有紫外检测器 6.2涡旋仪
6.3离心机
6.4分析天平;感量0.001g.0.00001g
6.5移液器;10L,200L、1000L
试样的制备与保存 7.1试样的制备 取冷冻的蜂毒干粉试样,混合均匀后待处理
7.2试样的保存 20C储存备用
8 测定步骤 8.1样品前处理 称取蜂毒干粉样品0.15g(精确至0.001g)于50ml容量瓶中,加人30mL纯水,涡旋使其完全溶 解,纯水定容至刻度
溶液经滤膜(5.4.2)过滤后,待液相色谱分析
8.2测定 8.2.1液相色谱参考条件 色谱柱:300sB-C柱,粒径3.5m,100mm×2.1mm;或相当者
流动相A相为0.1%三氟乙酸-水溶液,B相为0.08%三氟乙酸-乙肮溶液,梯度洗脱条件见附 录A
流速:0.4mL/min
柱温;30C
检测波长:220nm
进样量;5L 8.2.2定性及定量 分别取适量试样液和相应质量浓度的标准工作液,作单点校准或多点校准,以蜂毒溶血肽标准物质 的保留时间定性,以色谱峰面积积分值定量
标准工作液及试样液中待测物质的响应值均应在仪器检
GB/T40486一2021 测的线性范围内,超过线性范围时,应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析
蜂毒溶血肽标准 物质和蜂毒干粉液相色谱图见附录B的图B.1和图B.2 8.2.3结果计算和表述 试样中蜂毒溶血肽的含量X,以质量分数毫克每克(mg/g)表示,按式(1)计算 ×V X一 n1×1000 式中: -试样液中对应的蜂毒溶血肽的质量浓度,单位为微克每毫升(g/ml) -溶解试样所用溶液的体积,单位为毫升(mL); -试样质量,单位为克(g) 测定结果用重复性条件下两次独立测定后的算术平均值表示,保留三位有效数字
检测方法灵敏度、准确度和精密度 9.1灵敏度 本方法检测限为15mg/g,定量限为50mg/ g
9.2准确度 本方法在50mg/g一600mg/g添加浓度范围内,其回收率范围为85.1%一108.4%. 9.3精密度 本方法的批内相对标准偏差<10%,批间相对标准偏差<15%
GB/T40486一2021 附 录 A 资料性) 液相色谱梯度洗脱条件 液相色谱梯度洗脱条件见表A.1
表A.1液相色谱梯度洗脱条件 时间/min A/% B/% 80 20 30 70 7.1 80 20 15.0 80 20
GB/40486?2021 ? B ???????????? ???????B.1 700 7.10 ?? 600. 500 400 300 200 100 -100 4 10 2 ?/min ?B.1??????(100g/mL.) ?????г??B,2 1400 7.10 ?? 1200 1000 800 600 400 200 10 ?/min ?B.2??????
蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量的测定高效液相色谱法GB/T40486-2021
蜂毒素是一种广泛应用于医药领域的生物活性分子，其中蜂毒溶血肽是蜂毒素中最为重要的成分之一。而蜂毒干粉是一种常见的蜂毒制品，对于蜂毒溶血肽含量的准确测定十分关键。
最新发布的GB/T40486-2021标准提出了一种高效液相色谱法，可以精确测定蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量。该方法基于高效液相色谱技术，通过选用特定的色谱柱和检测波长，可以有效地对蜂毒溶血肽进行分离和定量。
该方法具有以下优点：首先，灵敏度高，可以检测到非常低的蜂毒溶血肽含量；其次，准确性高，数据稳定可靠，可以满足医药行业对于蜂毒素含量的严格要求。此外，该方法操作简单方便，适用于大规模制备过程中的蜂毒溶血肽含量测定。
在实际应用中，该方法已经被广泛采用，成为了蜂毒素制备过程中必不可少的分析手段。通过与传统测定方法进行对比，可以发现高效液相色谱法具有更高的精度和稳定性，为蜂毒素制备提供了更好的保障。
总之，蜂毒干粉中蜂毒溶血肽含量的测定高效液相色谱法是一项非常有前途的技术，未来将在医药领域中得到更广泛的应用。
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