GB/T40187-2021
核酸适配体亲和性和特异性评价技术导则
Technicalguidanceforaffinityandspecificofaptamer
- 中国标准分类号（CCS）A20
- 国际标准分类号（ICS）07.080
- 实施日期2021-12-01
- 文件格式PDF
- 文本页数5页
- 文件大小305.25KB
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核酸适配体亲和性和特异性评价技术导则
国家标准 GB/T40187一2021 核酸适配体亲和性和特异性评价技术导则 Ieehniealguidaneefoaffinityandlspeeificofaptamer 2021-05-21发布 2021-12-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/40187一2021 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准由标准化研究院归口 本标准起草单位:河北省食品检验研究院、标准化研究院、江南大学、合肥工业大学、科技 大学、河北农业大学、西南大学,浙江工商大学、河南大学、北京食品科学研究院、河北医科大学 本标准主要起草人;张岩、周巍、马爱进、王周平,瞿昊、罗昭锋,郑磊、王向红陈佳、马良、田益玲、 王赞、张雅伦、张涛、康文艺、王彦波、傅玲琳、孙勇、陈伟、吕品
GB/40187一2021 核酸适配体亲和性和特异性评价技术导则 范围 本标准规定了核酸适配体与目标物结合亲和性和特异性的评价规则和测定方法
本标准适用于金属离子,小分子,大分子、细胞及颗粒物、组织以及混合目标物等不同层次目标物体 系的核酸适配体的亲和性和特异性评价
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
3.1 亲和性aimity 特定目标物与核酸适配体之间相适应而存在的引力,它是特定目标物与核酸适配体固有的结合力
注:亲和性的强弱,一般以平衡解离常数K，来表示
3.2 特异性specifieity 相同测定方法、相同物质的量浓度等条件下,测定核酸适配体对目标物及其非目标物的结合数 量比
注:当结合数量比值越高,说明特异性越好
3.3 平衡解离常数disceiationconstant 核酸适配体与目标物结合达到解离平衡时各产物浓度的幕函数的乘积除以反应物浓度的幕函数
注，绝大多数情况下,核酸适配体与目标物是1:1结合,核酸适配体的平衡解离常数可以简化为溶液中游离状态 的核酸适配体浓度与游离状态的目标物物质浓度的乘积再除以两者复合物的浓度
数值上等于目标物物质被 核酸适配体结合一半时目标物物质的浓度(Kn)
K值越小,表明两者相互作用越强
CAc" Kp CE 式中: KD 平衡解离常数; 核酸适配体的物质的量浓度; CA 目标物分子物质的量浓度 复合物的物质的量浓度
C
GB/T40187一2021 评价规则 4.1亲和性 用核酸适配体与目标物结合的平衡解离常数(K)来表示核酸适配体与目标物亲和性的强弱
K 值越低表明其亲和性越强
金属离子,小分子与核酸适配体复合物的K值一般在数十纳摩尔每升至 微摩尔每升范围之内;大分子、细胞、组织与核酸适配体复合物的K值一般在皮摩尔/升至纳摩尔每升 范围之内
4.2特异性 给定条件下分别测定核酸适配体对目标物及其非目标物的结合数量比
对不同非目标物具有不同 的特异性,当比值大于3时一般认为具有特异性 5 测定方法 5.1测定方法质量控制 测试过程应添加阴性对照,包括目标物的阴性对照和核酸适配体的阴性对照
目标物的阴性对照 尽量选择与目标物结构类似,来源相近的非目标物;核酸适配体的阴性对照建议选择碱基数量相同的无 意义序列或筛选时获取的低亲和性序列;至少选择两种原理不同的方法进行比对,使用时要特别注意每 种方法的基本原理及适用范围
5.2亲和性测定方法 5.2.1无需复合物与未结合适配体分离的测定方法 无需复合物与未结合适配体分离是指不需要将复合物从检测体系中分离出来,根据相应测试信号 变化实现亲和性测定
此类方法适用于结合前后产生光谱信号或热量变化与目标物或核酸适配体浓度 呈正相关性的体系
方法包括荧光光谱法,紫外吸收法、等温滴定微量热法、微量热泳动法等
荧光光 谱法、紫外吸收法多适用于金属离子,小分子测定;等温滴定微量热法,微量热泳动法多适用于小分子、 大分子测定
5.2.2需要复合物与未结合适配体分离的测定方法 需要复合物与未结合适配体分离是指需要将复合物从检测体系中分离出来,根据相应测试信号变 化实现亲和性测定
此类方法适用于只有通过分离才能实现复合物定量的体系
方法包括荧光光谱 法、,微球分离法、流式细胞术,酶联核酸适配体法、表面等离子体共振法、生物膜干涉法,毛细管电泳、凝 胶阻滞电泳等分子互作分析方法
荧光光谱法多适用于细胞、组织等的测定;流式细胞术多适用于大分 子、细胞等的测定;酶联核酸适配体法多适用于小分子,大分子、细菌、病毒等的测定;表面等离子体共振 法、生物膜干涉法多适用于小分子,大分子和细胞等的测定;毛细管电泳、凝胶阻滞电泳多适用于大分子 和细胞等的测定;微球分离法多结合荧光光谱、荧光定量聚合酶链式反应(PCR)等适用于小分子、大分 子等的测定
5.3特异性测定方法 相同条件下(相同测定方法、相同物质的量浓度等条件)根据5.2的方法进行测定,计算核酸适配体 对目标物及其非目标物的结合数量比
GB/40187一2021 防污染措施 检测过程用水规格和试验方法按照GB/T6682中的规定执行,防止交叉污染的措施按照GB/T27403 中的规定执行
GB/T40187-2021核酸适配体亲和性和特异性评价技术导则解析
一、背景介绍
核酸适配体是一种由DNA或RNA构成的寡核苷酸序列，在分子生物学中有着广泛的应用。通过选择性结合目标蛋白质或其他分子，可以用于分子检测、药物研发以及基因治疗等领域。由于NAAs的亲和性和特异性对其应用效果有着至关重要的影响，因此如何准确地评价这些参数就成为了科研工作者们需要解决的难题。
二、主要内容
GB/T40187-2021标准对NAAs的亲和性和特异性评价方法做出了规范。该标准主要包括以下内容：
- 术语和定义：对NAAs实验中常见的术语和定义进行了详细说明，便于理解和操作。
- 实验条件：明确了NAAs评价实验的相关条件，包括温度、pH值、离子强度等。
- 实验步骤：标准规定了NAAs评价实验的具体步骤，包括配体制备、试样处理、结合实验和数据处理等。
- 数据处理：标准对NAAs评价实验中常用的数据处理方法进行了详细介绍，包括用于计算亲和力和特异性的常见公式。
- 实验结果：标准要求在实验报告中应当详细记录所有实验结果，包括NAAs的亲和性、特异性以及其他相关参数。
三、意义和应用
GB/T40187-2021标准的发布，为NAAs的研究和应用提供了有力支持。该标准规范了NAAs评价实验的步骤和方法，可使得实验结果更加精确可靠。同时，该标准可推广到各个相关领域，促进各类NAAs的研究和应用。
四、结论
GB/T40187-2021标准的发布，对于NAAs的研究和应用具有重要意义。遵循该标准进行NAAs的亲和性和特异性评价，将能够获得更加准确和可靠的实验结果，推动相关领域的快速发展。
