肠衣中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法

肠衣中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法

国家标准 GB/T23406一2009 肠衣中硝基咪哗类药物及其代谢物 残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法 Determinationofresiduesofnitroimidazolesandtheir”metabolitesincasing一 LC-MS/MSmethod 2009-03-28发布 2009-07-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23406一2009 前 言 本标准的附录A,附录B附录C和附录D为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;江苏出人境检验检疫局 本标准主要起草人:陈惠兰、丁涛、沈崇钮、张晓燕、杨雯笙、张玲、蔡宝亮、蒋原、陶宏锦
GB/T23406一2009 肠衣中硝基咪陛类药物及其代谢物 残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法 范围 本标准规定了肠衣中甲硝哗(简称MNZ,下同)及其代谢物1-(2-羚乙基)-2-胫甲基-5-硝基咪陛(简 称MNzoH,下同),二甲硝咪哗(简称DMZ,下同)及其代谢物2-胫甲基-1-甲基-5-硝基咪幽(简称 HMMNI,下同),异丙硝陛(简称IPZ.下同及其代谢物2-(2-羚异丙基)-1-甲基-5-硝基咪幽简称 IPzZOH),洛硝哒陛简称RNZ.下同)残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法 上述硝基咪陛类药物中 英文名称、结构式、CAs号和相对分子质量参见附录A 本标准适用于肠衣中硝基咪幽类药物及其代谢物残留量的测定 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,ISO3696:1987,MOD) GB/T6682 方法提要 试样加人相应内标后用乙酸乙酯提取硝基咪陛类药物及其代谢物,蒸干提取溶液,利用液相色谱 串联质谱仪测定,梯度洗脱,内标法定量 试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 4.1甲醇:HPIC级 4.2乙酸乙酯 4.3乙酸铵;HPLC级 同位素内标:DMZ-D、IPZOH-D.、HMMN-D.,纯度>98% 4.5MNZ.MNZOH、DMZ,HMMN,IPZ,IPZoOH和RNZ标准品:纯度>98% 4.6MNZ、MNZOH,DMZ、HMMNIIPZ,IPzOH和RNZ标准储备溶液:1.0mg/ml 准确称取适 量的MNZ.MINZOH,DMZ,HIMMNI、IPZ,IPZOH和RNZ标准品(4.5),用甲醇(4.1)配成1.0mg/ml 的标准储备液,储备液贮存在4C冰箱中,可保存6个月 DMZD,IPzOHH和HIMAMINI-D内标储备溶液.l004g/ml 称取适量的DMZDIPzOHD和 HMMNI-D内标物(4.4),用甲醇(4.l)配成l004g/mL储备液,储备液贮存在4C冰箱中 4.8DMZ-D,IPzZOH-和HMMNI-D内标工作溶液:1g/ml 取适量内标储备液(4.7)用甲醇 4.1)稀释成14g/ml工作溶液,内标工作溶液在4C保存 MINZ.MINzoHl,DMZ.,IHMIMNI.IPZ,IPzoH和RNZ标准工作溶液;用甲醉(4.1)分别配成浓度 4.9 范围为1ng/'ml. 50ng/ml标准工作溶液,其中内标溶液浓度为50ng/ml,现配 4.10甲醇-水(28,体积比):量取20mL甲醇(4.1)于80mL水中,混合均匀
GB/T23406一2009 仪器 5.1液相色谱-质谱/质谱仪(串联四极杆)配有电喷雾离子源 5.2分析天平;感量0.01【和0.1mg各一台 旋转蒸发仪或相当者 5 3 5.4涡旋混匀器 真空泵:真空度不低于80kPa 55 5 5.6离心机转速不低于2500. r/min 5.7移液器15mL.20o Ml 离心管;50mL,具塞 5.8 5.9滤膜;有机相,0.454m. 试样的制备与保存 试样的制备 将实验室样品均质粉碎均匀,分出0.5kg作为试样 制备好的试样置于样品袋中,密封,并做上标 记 在制样的操作过程中,应防止样品污染或发生残留含量变化 6.2试样的保存 将试样于冷冻状态下保存 测定步骤 7.1提取 准确称取10g(精确到0.01g)试样,置于50ml具塞离心管中,准确加人3种内标混合溶液(4.8) 50 L. 加人10ml.乙酸乙脉(4.2)混合30s,2500r/'min离心3min,取上层乙酸乙酯到50ml玻璃 试管中,再加人10ml乙酸乙酯(4.2),重复上述提取步骤,合并提取液,40C水浴旋转蒸发干 甲醇 水(4.10)1.0mL定容,过滤到进样瓶中,供液相色谱-质谱/质谱仪测定 7.2测定 7.2.1参考液相色谱条件 色谱柱:C(封端),34m,150mm×2.0mm(内径)或相当者; a b)流动相:甲醇十乙酸铵溶液(5mnmol/L); c)流速:0.20mL/ min; d梯度洗脱程序;参见附录B: 温;室温; e) f)进样量;25nL 7.2.2串联质谱条件 参见附录C 7.3液相色谱-串联质谱测定 7.3.1定性测定 进行样品测定时,如果检出的质量色谱蜂保留时间与标准样品一致,并且在扣除背暴后的样品谱图 中,各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比,最大允许相对偏差不超 过表1中规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测物 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >l0%一20% <10% 允许的相对偏差 士20% 士25% 士30% 士50%
GB/T23406一2009 7.3.2定量测定 标准工作溶液(4.9)在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样,以标准与内标物峰面积比值为纵 坐标,工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标,绘制标准工作曲线(1ng/ml50ng/ml),用标准工作曲线对 样品进行定量,样品溶液中标准的响应值均在仪器测定的线性范围内 其中DMZ-D作为MNZ,DMZ 和MNZOH内标使用;HMMNI-D作为HMMN和RNZ内标使用;IPZOH-D作为IPZ和IPZOH 内标使用 在上述色谱条件下,其相应的标准物质和内标离子流色谱图参见附录D. 7.4平行试验 按以上(7.17.3)步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.5空白试验 除不称取试样外,均按上述(7.17.3)步骤进行 结果计算 结果按式(1)计算 c ×m 式中: 样品中硝基咪陛及其代谢物的浓度,单位为微克每千克(4g/kg) 样品中硝基咪陛及其代谢物的峰面积与相应内标峰面积比值; 硝基咪陛及其代谢物标准的质量,单位为纳克(ng) 标准品中硝基咪陛及其代谢物的峰面积与相应内标峰面积比值; 样品质量,单位为克(g). 注:计算结果需扣除空白值 检测低限、回收率范围和精密度 本标准中MNZ.,DMZ.RNZ.,IPz.HMMNI.P2oH租MNoH测定低限为l.08/kw. 肠衣中硝基咪幽及其代谢物添加浓度及回收率范围(内标校正)的试验数据(n=10) 添加水平为1.04g/kg,MINZ,DMZ,RNZ,IPZ,MNZOH、HMMN和IPZOH回收率范围为80%- 113% 添加水平为2.0g/kg,MINZ,DMZ,RNZ,IPZ,MNZOH、HMMN和PZOH回收率范围为79%- 109%; 添加水平为5.0g/kg,MINZ,DMZ,RNZ,IPZ,MNZOH、HMMN和PZOH回收率范围为88%- 103% 在1.0g/kg、2.04g/kg和54g/kg添加水平上,相对标准偏差(RSD)为3.7%~7.4%
GB/T23406一2009 附 录A 资料性附录 硝基咪幽类药物及其代谢物中文名称,英文名称、化学结构式,C.As号和相对分子质量 表A.1硝基咪陛类药物及其代谢物中文名称,英文名称、化学结构式.,CAs号和相对分子质量 序号 中文名称/英文名称/简称 化学结构式 相对分子质量 CAS号 甲硝哗 171 443-48-1 Metronidazole CHH MNZ CH,OH OH 甲硝陛代谢物 Metronidazole-OH 187 4812-40-2 OH MNzoH 二甲硝基咪哗 Dimetridazole CIH 14 551-92-8 DM2Z 二甲硝基咪陛-代谢物 CHH,oH 158 936-05-0 Hydroxydimetridazole HMMNI 洛硝哒幽 CH.coONH 200 7681-76-7 Ronidazole RNZ CH CH CH 异丙硝哗 Ipronidazole 69 14885-29- O.N IPZ) CH 异丙硝陛代谢物 e-oH 85 35175-14-5 Ipronidazole HC IPZOH HO Hc CH
GB/T23406一2009 B 附 录 资料性附录 流动相梯度洗脱程序 表B.1流动相梯度洗脱程序 时间/minm 甲醇/% 5 mmol/L乙酸铵溶液/% 0.00 20 80 1.00 20 80 90 10 2.00 5.50 90 10 80 6.00 20 8.00 20 80
GB/T23406一2009 附 录 c 资料性附录 质谱/质谱条件及选择离子参数设定表 离子源;电喷雾离子化电离源(ESI).正离子监测 扫描方式;选择离子检测SRM): 雾化气、鞘气为高纯氮气,碰撞气为高纯氯气; 喷雾电压;4200V 加热毛细管温度;350C 表C.1选择离子参数设定表 母离子 定性离子 定量离子 碰撞电压 测定物质 m/2) mm/z) m/z 82 22 MNZ 172 128 128 14 123 14 MNZOH 188 123 6 126 81 24 DM2 142 96 96 18 5 227 HIMMN 158 140 12 140 55 21 RNZ 201 140 2 140 109 19 IPZ 170 124 124 16 122 IPZ(OH 186 168 168 DMz-D 145 16 99 99 HIMMNID 161 143 143 12 189 13 Pz0HD. 171 171
GB/T23406一2009 D 附 录 资料性附录 硝基咪陛及其代谢物和内标离子流色谱图 5.01 4.74 100 100 附 肌 0 即 DMZ142>96 MNZ172>128 相 0 D0 n 5.00 100 1 即 0 郎 0 DMZ-D.145>9 0 0MMNzoH188>123 20 " 00 10 " 0 0 40 RNZ201>140 IPZ170>124 加 " 1003 003 80 0 0 HMMMN158>140 IPzoH186>168 20 " 1003 005 89 805 0 6005 40 40 HMMNI-D.161>143 PzoHD189>171 203 20 /min 图D.1硝基咪陛及其代谢物和内标离子流色谱图