GB/T31270.15-2014
化学农药环境安全评价试验准则第15部分：蚯蚓急性毒性试验
Testguidelinesonenvironmentalsafetyassessmentforchemicalpesticides―Part15:Earthwormacutetoxicitytest
- 中国标准分类号（CCS）B13
- 国际标准分类号（ICS）65.100
- 实施日期2015-03-11
- 文件格式PDF
- 文本页数9页
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化学农药环境安全评价试验准则第15部分：蚯蚓急性毒性试验
国家标准 GB/T31270.15一2014 化学农药环境安全评价试验准则 第15部分蚯蚓急性毒性试验 Iestguidelinesonenvironmentalsafetyassessmentforchemieal pestieides一Part15:Earthwormacutetoxiecitytest 2014-10-10发布 2015-03-11实施 国家质量监督检监检疫总局 发布 国家标准花管理委员会国家标准
GB/I31270.15一2014 前 言 GB/T31270(化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分 -第1部分:土壤降解试验; 第2部分;水解试验; 第3部分:光解试验; 第4部分;土壤吸附/解吸试验 第5部分 :土壤淋溶试验; 第6部分:挥发性试验; 第 7部分;生物富集试验; 部分;水-沉积物系统降解试验; 第 鸟类急性毒性试验; 第 10部分:蜜蜂急性毒性试验 部分:家蚕急性毒性试验; 部分:鱼类急性毒性试验; 第 部分;蚤类急性活动抑制试验 部分:藻类生长抑制试验; 15部分;蚯蚓急性毒性试验; 第 16部分;土壤微生物毒性试验; 第 部分天敌赤眼蜂急性毒性试验， 第 17 第 18部分;天敌两栖类急性毒性试验; 第19部分:非靶标植物影响试验， 第20部分;家畜短期饲喂毒性试验 第21部分;大型甲壳类生物毒性试验 本部分是GB/T31270的第15部分
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
请注意本文件的某些内容可能涉及专利
本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任
本部分由农业部提出并归口 本部分负责起草单位;农业部农药检定所、环保部南京环境科学研究所 本部分主要起草人:卜元卿,徐晖,金怡、程燕、杨海荣、魏方林,慕卫
GB/I31270.15一2014 化学农药环境安全评价试验准则 第15部分:蚯蚓急性毒性试验 范围 GB/T31270的本部分规定了蚯蚓急性毒性试验的材料、,条件,操作,质量控制、数据处理,试验报 告等的基本要求
本部分适用于为化学农药登记而进行的蚯蚓急性毒性试验,其他类型的农药可参照使用
本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药
术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
2.1 生殖带elitellum 蚯蚓身体前端表皮上的一种腺体,为鞍状或环带状,通常可通过颜色与蚯蚓身体其他部分区分开 2.2 成蚓adutworm 身体前端呈现出生殖带的蚯蚓
2.3 半致死浓度medianlethalconcentratiom 在急性毒性试验中,引起50%供试生物死亡时的供试物浓度,用L.C表示
注单位为mga.i./k起干土
2.4 供试物testsubstanee 试验中需要测试的物质
2.5 sticide 化学农药chemiealpest 利用化学物质人工合成的农药
其中有些以天然产品中的活性物质为母体,进行仿制、结构改造， 创新而成,为仿生合成农药
同义词;有机合成农药syntheticorganicpestieide. [NY/T1667.1一2008,定义2.3.1] 2.6 原药techmiealmaterial 在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品,不能含有可见的外来物质和任何添加物,必 要时可加人少量的稳定剂
-28.,定义2.5.1] NY/T1667.2 制剂 fomulationproduet 由农药原药(或母药)和助剂制成使用状态稳定的产品
GB/I31270.15一2014 [NY/T1667.2一2008,定义2.4们 2.8 有效成分aetieingredient;a.i. 农药产品中具有生物活性的特定化学结构成分
[NY/T1667.22008,定义3.1 2.9 参比物质refereneesuhstances 在测试中为证实或否定供试物的某种特性或判断测试系统有效性而使用的化学物质或混合物
试验概述 在适量人工土壤加人农药溶液并充分拌匀,每个处理放人10条蚯蚓,在适宜条件下培养两周
在 第7d和第14d观察记录蚯蚓的中毒症状和死亡数,求出农药对蚯蚓的半致死浓度LC值及95%置 信限
试验方法 4.1材料和条件 4.1.1供试生物 推荐选择赤子爱胜蚯蚓Eiseniafoeida)成蚓进行试验,体重在0.30只一0.60g之间 4.1.2供试土壤 人工土壤(配方参见附录A) 4.1.3供试物 供试物应使用农药制剂、原药或纯品
难溶于水的可用少量对蚯蚓毒性小的有机溶剂助溶,有机溶 剂用量一般不得超过0.1mL(g)/儿L 4.1.4主要仪器设备 主要仪器设备如下: -培养箱 标本瓶; 容量瓶等
4.1.5试验条件 试验温度为20C士2C,相对湿度为70%90%,光照强度400lx一800lx
4.2试验操作 4.2.1 预试验 按正式试验的条件,以较大的间距设若干组浓度,求出供试物对蚯蚓全致死的最低浓度和全存活的 最高浓度,在此范围内设置正式试验的浓度
GB/I31270.15一2014 4.2.2正式试验 在预试验确定的浓度范围内按一定级差设置5个~7个浓度组,并设一个空白对照组,使用助溶剂 的还应增设溶剂对照组,并设一组不加农药的空白对照,每个浓度组均设3个重复
在标本瓶中放 500g土(标本瓶中土壤厚度不低于8cm),加人农药溶液后充分拌匀如用有机溶剂助溶时,需将有机 35%
每个处理放人蚯蚓10条,用 游剂挥发净),加适量燕僧水调节土壤含水量占土壤干重的30% 纱布扎好瓶口,将标本瓶置于20C士2C湿度70%一90%、光照强度400lx一800lx的培养箱中
试 验历时两周,于第7d和第14d倒出瓶内土壤,观察记录蚯蚓的中毒症状和死亡数(用针轻触蚯蚓尾部， 蚯蚓无反应则为死亡),及时清除死蚯蚓
根据蚯蚓7d和14d的死亡率,求出农药对蚯蚓的毒性1C 值及95%置信限
4.2.3限度试验 设置上限浓度100mga.i
/kg干土,若未见蚯蚓死亡,则无需继续进行试验
4.2.4参比物质试验 为检验实验室的设备、条件、方法、供试生物、供试土壤的质量是否合乎要求,应设置参比物质作方 法学上的可靠性检验
参比物质为分析纯氯乙酰胺
4.3数据处理 4.3.1统计分析方法的选择 可采用寇氏法,直线内插法或概率单位图解法计算得到每一观察时间(7d,l4d)的LC和95%置 信限,也可应用有关毒性数据计算软件进行分析和计算
4.3.2寇氏法 用寇氏法可求出蚯蚓在7d和14d的LC值及95%置信限
Lc的计算见式(1) logLC=X一i(习P一0.5 式中: X -最高浓度的对数; -相邻浓度比值的对数; 习P 各组死亡率的总和(以小数表示). 95%置信限的计算见式(2): 95%置信限=logLCa士1.96slogLCn0 标准误的计算见式(3): D SlogLC0=; 式中 1个组的死亡率; l一; 各浓度组蚯蚓的数量
4.3.3直线内插法 采用线性刻度坐标,绘制死亡百分率对试验物质浓度的曲线,求出50%死亡时的Lc值
GB/I31270.15一2014 4.3.4概率单位图解法 用半对数纸,以浓度对数为横坐标、,死亡百分率对应的概率单位为纵坐标绘图
将各实测值在图上 用目测法画一条相关直线,从直线中读出致死50%的浓度对数,估算出LC值
4.4质量控制 质量控制的条件包括 -空白对照组死亡率不超过10%; -参比物质试验中氯乙酰胺对蚯蚓14dL.C应在20mga
i./kg干土80mga
i./kg干土 之间
试验报告 试验报告至少应包括下列内容 供试物的信息,包括供试农药的通用名、化学名称、结构式.CAs号、纯度、基本理化性质、来 源等; 供试生物的名称、来源、大小及健康情况 试验条件,包括试验温度,光照等， 供试土壤中的供试物浓度及试验开始后7d及14d的LC值和95%置信限,并给出所采用的 计算方法 对照组蚯蚓的死亡率、行为反应异常的比例; -注明人工土壤配方与配制方法; 对蚯蚓的毒性等级划分参见附录B
GB/I31270.15一2014 附 录A 资料性附录 人工土壤成分及配比 人工土壤成分及配比参见表A.1
表A.1人工土壤组成成分及配比 成分 含量/% 说明 泥炭藓 10 pH5.5一6.0 高岭土 高岭石含量大于30% 20 工业沙 68 0m一200m颗粒含量大于50% 碳酸钙 调节人工土壤pH至6.0士0.5
GB/I31270.15一2014 B 附 录 资料性附录 农药对蚯蚓毒性等级划分 按农药对蚯蚓半致死浓度LCa,将农药对蚯蚓的急性毒性分为四级,见表B.1
表B.1农药对蚯蚓的毒性等级划分 毒性等级 LCa(14d)/mga
i./kg干土 剧毒 LCo0.l 高毒 0,1
化学农药环境安全评价试验准则第15部分：蚯蚓急性毒性试验GB/T31270.15-2014
蚯蚓急性毒性试验是一种评估化学农药对蚯蚓的毒性的实验方法。蚯蚓广泛分布于土壤中，是土壤生态系统中的重要生物类群之一。因此，通过对蚯蚓的毒性影响进行评价，可以更好地了解化学农药对土壤生态系统的影响。
GB/T31270.15-2014是我国编制的针对农药环境安全评价试验的标准之一，其第15部分详细规定了蚯蚓急性毒性试验的实验步骤、数据处理方法和结果表达方式。
在进行蚯蚓急性毒性试验前，需要对蚯蚓进行初步筛选，并保证其体型大小和品种均匀。试验中，将化学农药按照一定比例加入培养土中，制成不同浓度的溶液，然后将蚯蚓置于其中，观察并记录不同浓度下蚯蚓死亡情况。
为了确保试验结果可靠，GB/T31270.15-2014还规定了多项实验要求，如试验环境温度、湿度、光照等条件的控制，试验时间和蚯蚓数量的确定等。此外，试验过程中还需要对试验组和对照组进行比较，以验证化学农药对蚯蚓的毒性影响，同时对试验结果进行统计学分析，提高评价结果的科学性和可靠性。
试验结果通常以半数致死浓度（LC50）和最低致死浓度（LD50）等参数来表示。其中，LC50表示化学农药在一定时间内可以导致蚯蚓死亡的最小浓度，而LD50则表示化学农药能够导致50%的蚯蚓死亡的最小浓度。
总之，蚯蚓急性毒性试验是一种重要的化学农药环境安全评价方法，其能够反映化学农药对土壤生态系统的潜在危害。GB/T31270.15-2014为蚯蚓急性毒性试验提供了规范的实验步骤和数据处理方式，有助于保障农药环境安全评价工作的科学性和准确性。
