GB/T30926-2014
化妆品中7种维生素C衍生物的测定高效液相色谱-串联质谱法
Determinationof7kindsofvitaminCderivativesinCosmetics――Highperformanceliquidchromatography-tandemMassspectrometry
- 中国标准分类号（CCS）Y42
- 国际标准分类号（ICS）71.100.70
- 实施日期2014-11-01
- 文件格式PDF
- 文本页数11页
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化妆品中7种维生素C衍生物的测定高效液相色谱-串联质谱法
国家标准 GB/T30926一2014 化妆品中7种维生素C衍生物的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Deerminationof7kindsofvitaminCderivativesinCosetics Highperformmanceliquidchromatography-tandemMassspeetrometry 2014-07-08发布 2014-11-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T30926一2014 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由轻工业联合会提出
本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口
本标准起草单位:大连市产品质量监督检验所(国家日化产品质量监督检验中心)、大连标准检测技 术研究中心、上海市日用化学工业研究所、上海香料研究所
本标准主要起草人毛希琴,郑顺利,胡侠,潘炜、沈敏、钱酋
GB/T30926一2014 化妆品中7种维生素C衍生物的测定 高效液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了化妆品中7种维生素C衍生物[抗坏血酸葡萄糖昔、3-O-乙基抗坏血酸,抗坏血酸磷 酸酯盐(以抗坏血酸磷酸酯计,抗坏血酸硬脂酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸 四异棕榈酸酯]的测定高效液相色谱串联质谱法 本标准规定的高效液相色谱串联质谱法适用于化妆品中7种维生素C行生物的定量测定 本标准方法对所有目标化合物检出限均为34g/g,对所有目标化合物定量限均为10g/g
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 原理 利用水和二氯甲烧双液相体系将水溶性维生素c衍生物(抗坏血酸葡萄糖苷,3-0-乙基抗坏血酸 抗坏血酸磷酸酯盐)与化妆品中油溶性成分及表面活性剂初步分离,水提物用C,固相萃取小柱脱除其 中的非极性强的干扰成分后,用反相高效液相色谱分离,串联四级杆质谱检测,标准曲线外标法定量
油溶性维生素cC衍生物(抗坏血酸硬脂酸酯,抗坏血酸棕榈酸酯,抗坏血酸二棕榈酸酯,抗坏血酸 四异棕榈酸酯)用有机溶剂溶解提取,必要时用硅胶固相萃取小柱脱除蜡基基质后,用反相高效液相色 谱分离,串联四级杆质谱检测,标准曲线外标法定量
试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682中规定的一级水
4.1标准物质;7种维生素C衍生物的化合物名称,INC1名称,CAs号,分子式、结构式、相对分子质量 和纯度参见附录A
4.2甲醇;色谱纯
4.3异丙醉色谱纯 么4 甲酸;色谱纯
4.5二氯甲烧
4.6无水乙醇
4.7 四氢吠喃 4.8环己烧
4.9丁基胫基茴香腿(BHA. 4.102,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)
GB/T30926一2014 4.11维生素E醋酸酯
4.12柠檬酸
4.13亚硫酸氢钠(NaHsO,). 4.14甲酸
4.15乙二胺四乙酸(EDTA)二钠
4.16 C 固相萃取小柱:200mg/3mL
使用前,依次用3ml甲醇和3ml水活化 使用前,用3mL环己烧(4.8)活化
417硅胶因相草取小柱;20nw/3 ml
4.18溶液I:称取0.0037gEDTA二钠,0.5gNaHsO.,用500mL蒸圜水溶解 4.19溶液I;称取0.0037gEDTA二钠,0.5gNaHSO,用500ml.20%甲醇水溶液(以100ml 甲醉十400ml.水配制)溶解
4.20溶液I;称取BHA,BHT,VE醋酸酯,柠檬酸各0.lg,用500ml无水乙醇(4.6)溶解 4.21溶液;称取BHA,BHT,VE醋酸酯,柠檬酸各0.lg,用500ml四氢吠喃(4.7)溶解
4.22溶液V:称取BHA,BHT,VE醋酸酯各0.1lg,用500mL环己烧(4.8)溶解
4.23溶液V:向200ml溶液I(4.20)中加人1ml甲酸(4.14). 4.24溶液:称取0.0037gEDTA二钠(4.15),0.5gNaHsO.(4.13),用500mL40%甲醇水溶液(以 200mL甲醇十300mL水配制溶解
注:溶液I配制均应尽量选择棕色瓶,配制后应注意避光保存,建议保存时间不超过2周
4.250.05%甲酸的水溶液:向1L.水中加人0.5ml甲酸(4.4)
4.260.05%甲酸的甲醉异丙醉溶液.500mL甲醉十500mL异丙醉十0.5mL甲酸(4.4). 4.270.05%甲酸的甲醇溶液;向11甲醇中加人0.5ml甲酸(4.4)
4.28标准储备液 4.28.1油溶性维生素C衍生物标准储备液 准确称取油溶性维生素C衍生物(抗坏血酸硬脂酸酯,抗坏血酸棕榈酸酯,抗坏血酸二棕榈酸酯 抗坏血酸四异棕榈酸酯)各标准物质250mg分别置于4个25mL的棕色容量瓶中,用溶液(4.21)溶 解定容,配制浓度为10mg/mL的标准储备溶液,于4C一6C条件下避光保存,抗坏血酸硬脂酸酯、抗 坏血酸棕榈酸酯和抗坏血酸二棕榈酸酯的保存期为3天,抗坏血酸四异棕榈酸酯的保存期为2周
4.28.2水溶性维生素C衍生物标准储备液 准确称取3种水溶性维生素C衍生物(抗坏血酸葡萄糖苷,3-O-乙基抗坏血酸,抗坏血酸磷酸醋 钠)各标准物质250mg分别置于4个25m的棕色容量瓶中,用溶液l(4.19)溶解定容,配制浓度为 10mg/mL标准储备液,于4C6C条件下避光保存,保存期为3天
4.29系列标准溶液 4.29.1系列标准溶液A 将4种油溶性维生素C衍生物的标准储备液(4.28.1)等体积混合并用溶液N4.21)稀释10倍,配 制1mg/mL的混合标准溶液
用溶液4.21)逐级稀释,配制成浓度分别为1000g/L,8004g/L 600 /L,200 /儿L,1004g/L的系列标准混合溶液
需现用现配
04g/l 04g 4.29.2系列标准溶液B 将3种水溶性维生素C衍生物的标准储备液(4.28.2),等体积混合并用溶液I4.18)稀释10倍， 配制1mg/mL的混合标准溶液
用溶液I4.18)逐级稀释，配制成浓度分别为1000 e/L
GB/T30926一2014 8004g/L,600g/L,2004g/L,l004g/L的系列标准混合溶液
需现用现配
注:鉴于本方法中抗坏血酸磷酸酯盐(一般为镁盐或钠盐形式)均以抗坏血酸磷酸酯形式被检出,方法无法分辨是 抗坏血酸的哪种盐形式
为统一测试结果,建议选择抗坏血酸磷酸酯钠作为标准物质,测试结果则报告以抗坏 血酸磷酸醋计的含量[按式(2)进行]
4.300.2m微孔聚丙烯滤膜针式过滤器 4.310.2m微孔尼龙滤膜针式过滤器
仪器和设备 5.1高效液相色谱串联四级杆质谱联用仪(ESI源. 52分析天平;感量01mgs0.l mg 5.3漩涡混合器
5.4超声波清洗器 5.5离心机转速不小于5000r/min,离心试管容量10mL,15ml 5.6离心机;转速不小于12000r/min,离心试管容量2ml 5.7移液枪或移液器
分析步骤 6.1油溶性维生素C衍生物的分析 6.1.1试样制备 6.1.1.1膏霜、乳液、化妆水、粉基类等化妆品样品的制备 称取0.1《样品(精确至0.001g)于10mL具塞离心管中,准确加人5mL溶液N(4.21),涡旋混合 1min,室温超声10min后,移取1ml一2ml于2mL塑料离心管中,12000r/min离心5min,转人进 样瓶中待测,或涡旋混匀后的溶液5000r/min离心10min后经聚丙烯滤膜过滤(4.30)转人进样瓶中 待测
6.1.1.2甲油类化妆品样品的制备 称取0.1g样品(精确至0.001g)于10ml.具塞离心管中,向离心管中分别准确加人4mL溶液 (4.21)和1mL溶液V4.22)涡旋混合1min.移取1mL2mL于2mL具塞塑料离心管中 12000r/min离心5min,转人进样瓶中待测,或涡旋混匀后的溶液5000r/min离心10min后经聚丙 烯滤膜过滤器(4.30)转人进样瓶中待测
6.1.1.3唇膏等蜡基化妆品样品的制备 称取0.1只样品精确至0.001g)于10m具塞离心管中,向离心管中准确加人2mL溶液 V(4.22)于50C水浴中超声分散至澄清透明,然后向离心管中准确加人3mL.溶液(4.20),涡旋混匀 1min,移取1ml2ml于2mL塑料离心管中,12000r/min离心5min,转人进样瓶中待测,或涡旋 混匀后的溶液5000r/min离心10min后经聚丙烯滤膜过滤器(4.30)转人进样瓶中待测
必要时,用硅胶固相萃取小柱脱除蜡基基质
具体操作如下 称取0.1g样品(精确至0.001g)于10ml.具塞离心管中,向离心管中加人3mL溶液V4.22)于 0C水浴中超声分散至澄清透明
将所有溶液趁热过硅胶固相萃取小柱(4.17),再用1ml~2ml 己炕(4.8)(50C水浴中预热)润洗离心管,润洗溶液一并加人硅胶固相萃取小柱,待上述所有溶液通过
GB/T30926一2014 固相萃取小柱后,用3mL5m环己婉(4.8)(50C水浴中预热)淋洗柱床,最后准确移取5mL溶液 I(4.23)洗脱柱床,用刻度试管收集洗脱溶液
溶液体积应为5mL,若溶液体积不足5mL,需用溶液 V(4.23)定容至5mL,涡旋混匀,转人进样瓶中待测
注1:鉴于抗坏血酸四异棕榈酸酯在上述条件下将与蜡基一起脱除,因此本方法不适用于唇膏中抗坏血酸四异棕榈 酸酯的检测 注2:对于目标物含量低于100ppm的测试样品或其他均一性难以保证的样品,为保证测试结果的准确性和重复 性,建议将取样量增加至0.5 ,并适当增加提取溶液的体积,再按照上述步骤进行分析测试
g~lg" 6.1.2测定 6.1.2.1液相色谱参考条件 液相色谱测定参考条件如下 色谱柱SB-Aq.3Am,3mmI.D.X100mm
或其他相当的具亲水作用色谱柱; a) 柱温:30C; b 流动相:A相0.05%甲酸的水溶液(4.25);B相0.05%甲酸的甲醇异丙醇溶液(4.26); 流速:0.25mL/min d 进样量:2AL fD 液相色谱分离条件见表1
表1液相色谱分离条件 时间 流速 流动相A含量 流动相B含量 min mml/mmin 0.25 20 80 0.25 100 0.25 100 0.25 20 80 7.l 0.25 10 20 80 注1:0min~7min为色谱分离过程,7min~10min为色谱柱重新平衡过程 注2色谱柱的型号,内径和长度及色谱填料粒径可根据色谱分离情况自由选择
注3;流动相中甲酸漆加比例可根据不同型号的质谱响应情况在0.02%一0.1%之间调节 注4:流动相的梯度设置可根据不同色谱柱上目标化合物的保留时间做相应调整
6.1.2.2质谱参考条件 质谱测定参考条件如下 a)电离方式:电喷雾电离; b 雾化气;氮气,35Psi e)干燥气;氮气,流速10L/min,温度;350C; 碰撞气:氨气 dD 毛细管电压:3500V; 检测方式:多反应监测(MRM); 其他质谱条件见表2
GB/T30926一2014 表2油溶性维生素C衍生物质谱分析参考参数 抗坏血酸硬脂酸醋抗坏血酸二棕榈酸酣抗坏血酸四异棕榈酸 化合物名称 抗坏血酸棕榈酸酯 EsI模式 413.2 441.2 651.5 1151.9 母离子 碎裂电压 240 65 220 220 定量子离子 255,2 283.3 255,2 913,4 (20) 35 碰撞电压) 20 36 定性子离子 157.0 157.0 4l3.2 675,l l4 55 碰撞电压》 14 22 6.1.2.3定性分析 在同一色谱/质谱条件下进行标准溶液(4.,29.1系列标准溶液A)和样品溶液的测定,如果样品溶液 中检出的色谱蜂的保留时间与某标准物质色谱蜂的保留时间- 一致,所选择的2对监测离子对的质荷比 一致,而且样品溶液中监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的监测离子对的相对丰度比的 也 偏差不超过表3规定范围,则可判定样品中存在相应的目标成分
油溶性维生素c衍生物标准物质总 离子流质谱图和提取离子(定量)质谱图参见附录B 表3定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差 -5o >2050 >10~20 <10 相对离子丰度/% 允许的相对偏差/% 士20o 士25 士30 士50 6.1.2.4定量测定 样品溶液中油溶性维生素C衍生物含量,用标准曲线外标法确定
化妆品样品中油溶性维生素C 衍生物含量(4g/g)则按式(1)进行计算
c×V 样品中目标物的含量一 ×10 n 式中: -从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度-,单位为微克每升(g/L) 按稀释倍数折算的被测样液总体积,单位为毫升(mL) 称取样品的质量,单位为克(g)
1 计算结果至少保留3位有效数字
注:为保证定量测试的准确性,测试过程应尽量在10h内完成
6.2水溶性维生素C衍生物的分析 6.2.1 膏霜、乳液化妆水、沫浴液,洗面奶,粉类等化妆品样品的制备 称取0.lg样品精确至0.001g)于15ml具塞离心管中,向离心管中准确加人4ml溶液 I(4.I8),涡旋混合使样品均匀分散后,向离心管中加人3ml二氧甲婉(4.5),涡旋混合lmin,然后于 5000r/min离心10min,准确移取上层清液2ml,过C固相萃取小柱(4.16)
抗坏血酸磷酸酯盐的测试:弃去前5滴流出溶液后,在萃取小柱出口位置放置5mL试管收集后面
GB/T30926一2014 所有流出溶液,涡旋混匀并经有机尼龙膜过滤器(4.31)后转人进样瓶中待测 抗坏血酸葡萄糖苷和3-O-乙基抗坏血酸的测试:待上样液自然流干后,在萃取小柱出口位置放置 10ml.刻度试管收集洗脱溶液
用5ml溶液I(4.24)洗脱柱床,待洗脱液自然流干后,取下试管
试 管中溶液体积应为5ml,若试管中溶液体积不足5ml,需用溶液(4.24)定容至5ml
涡旋混匀,取 1ml.过有机尼龙膜过滤器(4.31)后转人进样瓶中待测
注:对于目标物含量低于100ppm的测试样品或其他均一性难以保证的样品,为保证测试结果的准确性和重复性， 建议将取样量增加至0.5g~lg,同时溶液I(4,18)和二氧甲烧(4.5)的添加量适当增加至15ml.和5ml.用 50ml离心管进行涡旋混合后按照上述步骤进行分析测试 6.2.2测定 6.2.2.1液相色谱参考条件 液相色谱测定参考条件如下 ，3mm(i.d.)×100 色谱柱:SBAq,3m nmm
或其他相当的具亲水作用色谱柱 a b 柱温:25C; 流动相.A相0,05%甲酸的水溶液(4.25);B相0.05%甲酸的甲醉溶液(4.27); s
D 流速0.3mL/" /min; 进样量:2L; fD 液相色谱分离条件:75%A相十25%B相等度洗脱
注:流动相中甲酸添加比例可根据不同型号的质谱响应情况在0,02%~0,1%之间调节;流动相的梯度可根据不同 色谱柱上目标化合物的保留时间在10%一25%范围做相应调整
6.2.2.2质谱参考条件 质谱测定参考条件如下 电离方式;电喷雾电离 a b)雾化气氮气,35Psi 干燥气;氮气,流速10L/nmin,温度;350C; 碰撞气:氮气; d 毛细管电压;3500V 检测方式;多反应监测(MRM); 其他质谱条件见表4
表4水溶性维生素c衍生物质谱分析参考参数 化合物名称 抗坏血酸葡萄糖苷 抗坏血酸磷酸酯盐 3-O-乙基抗坏血酸 ESI模式 母离子 337.0 254.9 203.0 碎裂电压 140 110 70 277.0 236.8 定量子离子 5.l 碰撞电压 16 2 4 174.0 174.1 定性子离子 79.2 碰撞电压 20 22 2
GB/T30926一2014 6.2.2.3定性分析 在同一色谱/质谱条件下进行标准溶液(4.29.2系列标准溶液B)和样品溶液的测定,如果样品溶液 中检出的色谱峰的保留时间与某标准物质色谱峰的保留时间一致,所选择的2对监测离子对的质荷比 也一致,而且样品溶液中监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的监测离子对的相对丰度比的 偏差不超过表3规定范围,则可判定样品中存在相应的目标成分
水溶性维生素C衍生物标准物质总 离子流质谱图和提取离子(定量)质谱图见附录B 6.2.2.4定量测定 对以抗坏血酸磷酸酯计的含量(4g/g)测定则需先按式(1)计算出样品中以标准物质抗坏血酸磷酸 酯钠计的含量,然后再按式(2)进行折算
256.10 样品中抗坏血酸磷酸酯的含量 样品中以抗坏血酸磷酸酯钠计的含量 322.05 式中 抗坏血酸磷酸酯的相对分子质量; 256.10 抗坏血酸磷酸酯钠的相对分子质量
322.05 洼;为保证定量测试的准确性,测试过程应尽量在1oh内完成
检出限和定量限 所有目标化合物检出限均为3g/g,目标化合物定量限均为10g/g
回收率和精密度 油溶性维生素C衍生物目标物含量在104g/g10004g/g范围内,回收率为80%110%,相对 标准偏差小于10%
水溶性维生素C衍生物目标物含量在104g/g10004g/g范围,回收率为85%105%,相对标 准偏差小于10%
允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于其算术平均值的10%
GB/T30926一2014 附 录A 资料性附录 7种维生素c衍生物的化合物名称,INCI名称,CAs号、分子式、结构式、相对分子质量和纯度 表A.17种维生素C衍生物的化合物名称、,INc名称,CAs号分子式、结构式、 相对分子质量和纯度 序号化合物名称 INC名称 CAS号 分子式 结构式 相对分子质量 纯度 .OH Ho 3-O-乙 3-O-ethyl. CHO. 86404-04-8 204.18 基抗坏血股 ascorbiacid HO .OH 抗坏血酸 HCG ascorbyl 129499-78-1 CHOm 338.26 H0 葡萄糖甘 glucoside Ho" oH H HO sodiumascorbyl 抗坏血 HO 66170-10-3cHNa.O),！ 322.05 酸磷酸酯纳 Na phosphate 抗坏血 ascorbyl 137-66-6 CHo 414.53 >98% 酸棕榈酸醋 palmitate 抗坏m ascorby 25395-66-8 CaHe(O 442.59 酸硬脂酸酯 stearate 抗坏血酸 ascorbyl 28474-90-0 652.94 CHO 二棕榈酸酯 dipalmitate 抗坏血酸四 ascorbyl 183476-82-6CHa.O 1129,76 异棕榈酸醋tetraisopalmitate" 国食药监许[200]479号《国际化妆品原料标准中文名称目录(2010? 年版)中文名称为四己基葵解抗坏 、血 酸酯
国食药监许[2010]479号《国际化妆晶原料标准中文名称目录(2010年版))INc1名称为Tetrhexyldeeyl ascorbate
GB/T30926一2014 附 录 B 资料性附录 标准物质总离子流质谱图和提取离子(定量)质谱图 TIc(总离子流质谱图) -MRM(413.2>255.2) -MRM(441.2>283.3) MRM651.5>255.2) +MRM1151,9)913. 10 tmin 图B.1油溶性维生素c衍生物总离子流质谱图及提取离子(定量)质谱图 Tc(总离子流质谱图) -MRM337.0>277.0 -MRM(254.9>236.8) -MRM(203,>85.) 12II.6I.s 2公2有2
2.厅 江2a43.638424号 //min 图B.2水溶性维生素c衍生物总离子流质谱图及提取离子(定量)质谱图
化妆品中维生素C衍生物的测定方法——基于高效液相色谱-串联质谱法GB/T30926-2014
维生素C是一种重要的营养物质，它不仅可以增强人体免疫力，还可以抗氧化、美白皮肤等。因此，维生素C被广泛应用于化妆品中。然而，维生素C非常不稳定，易被氧化降解，从而影响其功效。为了解决这个问题，人们研究出了多种维生素C衍生物，这些衍生物具有更好的稳定性和吸收性。
但是，如何准确测定化妆品中的维生素C衍生物成为了一个难题。传统的测定方法如高效液相色谱法（HPLC）和紫外分光光度法（UV）存在着灵敏度低、特异性差等问题。因此，GB/T30926-2014标准中规定了一种基于高效液相色谱-串联质谱法的测定方法。
该方法首先使用高效液相色谱分离化妆品样品中的维生素C衍生物，然后通过串联质谱进行检测和定量。相比传统方法，这种方法具有更高的精确度和灵敏度，同时可以同时检测多种维生素C衍生物。
在实际应用中，该方法已被广泛应用于化妆品的质量控制和研发中。它可以有效地帮助化妆品生产商保证产品的品质，并且为新产品的开发提供了重要的技术支持。
