牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的测定液相色谱-串联质谱法

牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T22983一2008 牛奶和奶粉中六种聚腿类抗生素 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationofsixpolyether”antiboticsresidues nmilkandmilkpowder一LC-MS-MSmethod 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22983一2008 前 言 本标准附录A,附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;秦皇岛出人境检验检疫局、青海出人境检验检 疫局 本标准主要起草人:薄海波、曹彦忠、雏丽丽、贾光群、星玉秀、李连通、庞国芳
GB/T22983一2008 牛奶和奶粉中六种聚酰类抗生素 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了牛奶和奶粉中六种聚酮类抗生素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法 本标准适用于液态奶(包括原料奶、纯牛奶、脱脂牛奶)和奶粉(包括纯奶粉,脱脂奶粉和婴幼儿配方 奶粉)中拉沙洛菌素(lasaloeid)莫能菌素(monensin)、尼日利亚菌素(nigeriein)、盐霉素(salinomyein)3 甲基盐霉素(narasin),马杜霉素铵(madubamyeinammonium)残留量的测定 本标准的方法检出限:牛奶中拉沙洛菌素,莫能菌素,尼日利亚菌素,盐霉素、甲基盐霉素、马杜霉素 铵检出限均为0.24g/L;奶粉中拉沙洛菌素,莫能菌素尼日利亚菌素、盐霉素、甲基盐霉素,马杜霉素 铵检出限均为1.64g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 (GB/T6379.1一2004,IsO5725-1l:1994,IDT GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.22004,ISO5725-2;l994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO3696;1987,MOD 原理 试样中聚酗类抗生素,用乙睛提取,固相萃取柱净化,高效液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯 水;GB/T6682,一级 4.2乙睛;色谱纯 4.3甲醇;色谱纯 4.4 正己婉:色谱纯 4.5乙睛饱和的正己婉;取少量乙睛(4.2)加人正己棕(4.4)中,充分混匀 静止分层后,取上层正 己炕 4.6甲酸;优级纯 4.7乙酸铵;优级纯 4.8无水硫酸钠:用前在650C灼烧4h,置于干燥器中冷却后备用 4.9水系流动相:lml甲酸与0.385g乙酸铵溶于1o00ml水,混匀 当天配制 4.10甲醇溶液(1十1):100mL甲醇与100mL水混合均匀.
GB/T22983一2008 4.11拉沙洛菌素(CAs25999-20-6),莫能菌素(CAs22373-78-0)、尼日利亚菌素(CAs28643-80-3) 盐霉素(CAs55721-31-8),甲基盐霉素(CAs55134-13-9)、马杜霉素铵(C'As84878-61-5)标准品;纯度 大于等于95% 4.12标准储备溶液;准确称取适量的每种标准物质(4.11),分别用甲醇醉(4.3)配制成浓度为1mg/m 标准储备溶液 储备液贮存在一18C冰柜中 4.13标准工作溶液;吸取1.00mL标准储备溶液(4.12),移人100mL棕色容量瓶,用甲醉定容,该溶 液浓度为10g/ml,贮存在0C~4C冰箱中 4.14OasisHLB固相萃取小柱或相当者;3ml,60t 使用前依次用3mL甲醇和5ml水活化小 w mg 柱,保持柱体湿润 4.15滤膜:0.24m. 仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱联用仪;配有电喷雾离子源(ESI源) 5.2分析天平感量0.1mg和0.01g 5.3旋涡混匀器 5.4 振荡器 5. 5 离心机;最大转速不低于5000r/min .6 5 移液器:1ml 5.7自动浓缩仪或相当者 5.8浓缩瓶50ml 5.9固相萃取装置 10氨气吹干仪 5. 试样制备与保存 6 试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分混匀,均分成两份,分别装人洁净容器内 密封后作 为试样,标明标记 在抽样和制样的操作过醒巾,应防止样晶受到污染或发生残留物含量的变化 6.2试样的保存 将试样于4C保存 测定方法 7.1提取 7.1.1牛奶样品 称取10.0其混匀的试样于50mL 聚丙烯离心管中,加无水硫酸钠(4.8)约10【和乙睛(4.2) 2×20mL,涡旋混匀1min,振荡10min,以3000r/min离心3min 合并上清液,加10mL乙晴饱和 的正己烧(4.5),涡旋1nmin,弃去正已婉减压浓缩至近干 用4mL 甲醇溶液(4.10)溶解残渣,待 净化 7.1.2奶粉样品 称取12.5!奶粉于烧杯中,加适量35C50C水将其溶解,待冷却至室温后,用水定容至 0mL充分混匀 量取I0.0区样品裤液于50ml聚内始离心管中,按71.1步骤提取 7.2净化 将7.1所得的样品溶液加载到固相萃取柱中,并用2mL甲醇溶液(4.10)淋洗浓缩瓶,并人固相萃 取柱,依次用5mL.水和3mL甲醇溶液(4.10)淋洗柱体,4mL.甲醇(4.3)洗脱 用氮气吹干仪将洗脱 液吹干,用1.0mL甲醇溶解,过0.24m滤膜,供液相色谱-串联质谱测定
GB/T22983一2008 7.3基质标准工作溶液的制备 称取6份阴性样品各l0.0g，置于50ml具塞的聚丙烯管中,分别加人不同体积的六种聚腿类抗 生素的标准工作溶液(4.13),按6 1和6.2步骤操作 制备成浓度为1.0ng/mL、5.0ng/ml 10.0ng/ml,20.0ng/ml,50.0ng/ml、l00.0ng/mL的基质标准工作溶液 7.4测定条件 7.4.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下 色谱柱:BEHC8,1.7 50mm×2.1mm(内径)或相当者; a) 丛mm b)柱温:40C; c 进样量;5.0AL; d)流动相;流动相A;甲醉醇(4.3),流动相B;水系流动相(4.9) 洗脱程序及流速见表1 表1流动相梯度程序及流速 A/% B/% 时间" /min 流速/(gl/nmin) 0.00 250 90.o 10.0 2.00 250 70.0 30.0 2.01 250 90 10.0 2.50 250 90 10.0 7.4.2串联质谱参考条件 串联质谱参考条件如下 a)离子源;电喷雾离子源; 扫描方式:正离子扫描; b 检测方式:多反应监测 c d 毛细管电压:2.8kV; 离子源温度:l10C; f 去溶剂气温度;380C; 去溶剂气(氨气)流量:600L/h; g h锥孔气(氮气)流量:50L/h; i 碰撞气流量:0.lL/h; 锥孔电压,碰撞能量和驻留时间等质谱参数及母离子和子离子详见表2 表2六种聚醒类抗生素的质谱参数和保留时间 子离子 子离子 保留时间 母离子 碰撞能量 驻留时间 锥孔电压 定性 化合物名称 定量 m/: mmin ms m/ m/: 28 377.l 613.5 377.1 72 拉沙洛菌素 1.48 50 38 595.3 675.6 5 65 莫能菌素 1.23 693.5 675.6 50 40 479.3 30 尼日利亚 657.6 50 657.6 42 1.76 742.7 25 菌素 464
GB/T22983一2008 表2(续 子离子 子离子 保留时间 母离子 碰撞能量 驻留时间 锥孔电压 化合物名称 定量 定性) min /之 ms m/ m/:) 431.3 50 65 盐霉素 1.55 773.6 431.3 50 531.5 48 431.3 45 甲基盐霉素 1.85 787.6 431.3 50 70 531.5 48 30 877.4 马杜霉素铵 1.38 939.6 877.4 50 38 896.3 30 7.5测定 7.5.1定性测定 样品溶液按照液相色谱-串接质谱分析条件进行测定时,如果检出的质量色谱峰保留时间与基质标 准溶液中对应物质的保留时间一致,并且在扣除背景后的样品质谱图中,子离子的相对丰度与浓度接近 的,相同条件下所得到的基质标准溶液谱图相比,误差不超过表3规定的范围,则可以判断样品中存在 对应的被测物质 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K K>50 20GB/T22983一2008 精密度 9.1 一般规定 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定的,其重复性和再现性的值 是以95%的可信度来计算 9.2重复性 在重复性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,试样中六种聚酥类 抗生素添加浓度范围及重复性方程见表4 表4六种聚腿类抗生素添加浓度及重复性限和再现性限方程单位为微克每千克 化合物名称 样品基质 添加浓度范围 重复性限" 再现性限R 牛奶 拉沙洛菌素 lgr=1.0148lgm-0.5230lgR=0.9584lgm-0.5858 奶粉 1.6~32 牛奶 0.2一4 莫能菌素 lg"=1.1903gm一0.5961 gR=l.3408lgm一0.5902 1.632 奶粉 02 牛奶 lg"一0.9507以历一0.53201gR=0.8905lg从一0.572s8 尼日利亚菌素 奶粉 1.632 牛奶 0.24 盐霉素 lgr=0.9679lgm-0.5258lgR=0.9683lgm-0.9527 1.632 奶粉 0.24 牛奶 甲基盐霉素 lgy=1.0899lgm一0,5782lgR=1.0254lgm一0,6140 奶粉 1.632 牛奶 0.2~4 -1.0860l -0.6474 =1.05231 -0.6765 马杜霉素锁 R lgr- lgm一 lgm 奶粉 1.632 注:"为两次测定结果的算术平均值 如果两次测定值的差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 在再现性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,试样中六种聚隧类 抗生素添加浓度范围及再现性方程见表4
GB/T22983一2008 附 录A 资料性附录 标准物质的多反应监测(MRM)色谱图 六种聚酥类抗生素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图.见图A.1一图A.6 693.5/675.56 693.5/479.32 l.23 1.23 1009% 100% 1.00 2.00 I/min 1.00 2.00 /min 图A.1莫能菌素标准物质反应监测(MIRM)色谱图 939.6/877.36 1.38 00% 939.6/895.5 1.38 100% Tt TTTTTT T" 2 w2w 1/min /min 图A.2马杜霉素铵标准品物质的多反应监测MRM)色谱图 1.50 613.5/377.14 613.5/595.35 1.50 100% 1009% 2.00 /min 1.0 2.00 /in 图A.3拉沙洛菌素标准物质的多反应监测(RM)色谱图
GB/T22983一2008 773.6/431.l 1.55 773.6/531.5 100/"% 1.55 100/% 1.00 1.00 2.00 2.00 /min l/min 图A.4盐霉素标准物质的多反应监测(RM)色谱图 742.7/657.6 1.76 742.7/46l.44 l.76 100% 1009% 1.00 /min /min 尼日利亚菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图 图A.5 787.6/531.31 787.6/431.47 1.85 l..85 100% 100% 1.00 2.0 1.00 2.00 /min /min 图A.6甲基盐霉素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图
GB/T22983一2008 附 录 B 资料性附录 回 收 率 六种聚酥类抗生素在牛奶中添加浓度及其平均回收率的试验数据,见表B.l;六种聚酥类抗生素在 奶粉中添加浓度及其平均回收率的试验数据,见表B.2 表B.1六种聚醒类抗生素在牛奶中添加浓度及其平均回收率的试验数据 化合物名称 添加浓度/4g/kg 平均回收率/% 97.6 92.3 拉沙洛菌素 95.8 l0 87.6 0.5 94.0 91.7 莫能菌素 92.4 10 899 88.3 0.5 94，4 尼日利亚菌素 97.0 10 95.5 87.8 92.3 盐霉素 85,8 97.5 l0 86.6 0.5 91.7 甲基盐霉素 92.4 10 89.8 88.9 94.8 马杜霉素锁 97.0 98.5 10
GB/T22983一2008 表B.2六种聚腿类抗生素在奶粉中添加浓度及其平均回收率的试验数据 平均回收率/% 化合物名称 添加浓度/4g/kg 87.6 92.3 拉沙洛菌素 10 85,8 20 95.5 86.0 91.7 莫能菌素 92.4 89.9 88.3 94.4 尼日利亚菌素 97.0 10 87.5 87.6 92.3 盐霉素 10 85.8 95.5 20 86.0 91.7 甲基盐霉素 92.4 10 89.9 88.3 94.4 马杜霉素铵 97.0 10 87.5 20