GB/T30955-2014
饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法
DeterminationofaflatoxinB1,B2,G1,G2contentinfeeds―Highperformanceliquidchromatographywithimmunoaffinitycolumnclean-up
- 中国标准分类号（CCS）B46
- 国际标准分类号（ICS）65.120
- 实施日期2015-01-10
- 文件格式PDF
- 文本页数6页
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饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法
国家标准 GB/T30955一2014 饲料中黄曲霉毒素B、B2、G、G的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 DeterminationofaflatoxinB,B2.G,Gcontentinfeeds Highperformaneeliauidechromatographywithimmunoafrinitycolumnelean-up 2014-07-08发布 2015-01-10实施 国家质量监督检监检疫总局 发布 国家标准花管理委员会国家标准
GB/T30955一2014 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口
本标淮起草单位;浙江大学饲料科学研究所,农业科学院农业质量标淮与检测技术研究所[国 家饲料质量监督检验中心(北京]、北京中检维康技术有限公司
本标淮主要起草人;余东游、饶正华、李卫芬、李兰、王雄、果旗、梁权
GB/T30955一2014 饲料中黄曲霉毒素B,B,G,G的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 范围 本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B、B,G,G的免疫亲和层析净化-高效液相色谱法的测定 方法
本标准适用于饲料中黄曲霉毒素B、B.,G.,G的测定
本标难的检测展,黄曲霉毒素B，为0.2g/ke，黄曲霉毒素B为0.2g/ke,黄曲霉毒素G为 0.34g/kg,黄曲霉毒素G为0.3g/lkg 本标准的定量限;黄曲霉毒素B为1.0ug/kg,黄曲霉毒素B为1.04g/lkg,黄曲霉毒素G为 .04e/kg,黄曲霉毒素G.为1.0g/kE
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 原理 试样经过甲醇-水提取后,提取液经过滤、稀释后,滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层 析柱层析净化,经高效液相色谱仪分离,荧光检测器柱后光化学衍生测定黄曲霉毒素B,B,G,G的 含量
试剂 除非另有说明,均为分析纯的试剂;实验室用水符合GB/T6682中二级用水规定,标准溶液和流动 相用水符合一级用水规定
4.1甲醇;色谱纯
4.2苯色谱纯
4.3乙睛;色谱纯
4.4甲醇十水(8十2)取80ml甲醇(4.1)加20nL水,混合均匀
4.5甲醇十水(45十55);取45ml甲醉(4.1)加55ml水,混合均匀
苯十乙睛(98十2)取2mL乙睛(4.3)加人98mL苯(4.2),混合均匀. 4.6 黄曲霉毒索标准储备溶液;用茶+乙脯(o8十2)溶液(46)分别配制0.100.mw/mL的黄曲霉毒索 4.7 标准储备液,保存于4C备用,可使用1年 B、B,G,G 黄曲霉毒素混合标淮工作液;准确移取适量的黄曲霉毒素B、B.G,G 4.8 标准储备溶液4.7,
GB/T30955一2014 50C下,氮气吹干仪吹干,用适量的甲醇水(4555)溶液(4.5)定容为混合标准工作液,黄曲霉毒素 B,B,G,G各分别为0ng/ml、lng/ml5ng/ml10ng/ml50ng/ml 4.9PBS缓冲溶液;称取8.0g氯化钠,1.2g磷酸氢二钠,0.2g磷酸二氢钾,0.2g氯化钾,用990ml 纯水溶解,然后用浓盐酸调节pH值至7.0,最后用纯水稀释至1000mL 4.10次氯酸钠
仪器和设备 实验室常规仪器、设备、材料及下列各项
5.1高速均质器,l8000r/min一22000r/min,或震荡器
5.2黄曲霉毒素免疫亲和柱,柱容量>300ng 5.3玻璃纤维滤纸,直径1lcm,孔径1.54m.
5.4玻璃定量管,10mL 5.5氮吹仪,50
5.6光化学行生系统
5.7 高效液相色谱仪,带荧光检测器 试样采集与制备 按GB/T14699.l采样;按GB/T20195用四分法缩减至500g,粉碎后过lm孔径的分析筛,混 匀后装人密闭容器,冷藏保存
分析步骤 7.1提取 称取试样(粒度小干1mm)50.0g于250mL具塞锥形瓶中,加人5.0g氯化钠及准确加人10.0mL (V,)甲醇十水(8十2)溶液(4.4!),以均质器高速搅拌提取2min,或震荡器震荡30min
定量滤纸过滤， 准确移取10.0ml(V)滤液并加人40.0ml(Vv,)PIS缓冲溶液(4.9)稀释,用玻璃纤维滤纸过滤1一2次,至 滤液澄清,备用
7.2净化 将免疫亲和柱连接于100mL玻璃定量管下
准确移取I00mLV)样品提取液注人玻璃定量管 中,将空气压力泵与玻璃定量管连接,调节压力使溶液以不超过2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱 待溶液全部流出后,以10.0ml纯水清洗柱子2次,弃去全部流出液
准确加人1.0ml(V)甲醉(4.l) 洗脱流速不超过1mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,加纯水定容为2.0mL,供色谱检测用
7.3测定 7.3.1 色谱条件 色谱柱;c柱,长150mm,内径Amm,填料直径5 1m,或相当者
心 流动相:甲醇十水(45+55)溶液(4.5)
流速:0.8ml/min 检测波长激发波长3601 ;发射波长440 nm; nm
GB/T30955一2014 光化学衍生系统
柱温:30C
进样量;20AL 7.3.2色谱测定 分别取相同体积样液和标准工作溶液注人高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定试样的响应值 峰高或峰面积)
经过与黄曲霉毒素B、B,G,G标准溶液谐图比较响应值得到试样中黄曲霉毒素 B,B.G,G的浓度c(g/L)
标准品色谱图参见附录A
警告 -黄曲霉毒素是高致癌性物质,应十分小心处理
使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用 5%浓度次氯酸钠溶液浸泡过夜
结果计算与表述 结果计算 8.1 试样中黄曲霉毒素B、B,G,G，含量以质量分数X，计,单位为微克每千克(4g/kg),按式(1 计算 ×V×c， xY P' X，= ×10' P.文 m×V 式中: 试样溶液中黄曲霉毒素B、B,G,G各组分的峰面积值; V 样品的总稀释体积,单位为毫升(ml); 黄曲霉毒素B,B,G,G各标准溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/ml); 标准溶液的进样体积(aL); V
各标准游液峰面积平均值 黄曲霉毒素B、B,G、,G 试样质量,单位为克(g)
1 8.2结果表示 测定结果用平行测定的算术平均值表示,计算结果表示到小数点后一位
重复性 在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%
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饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法GB/T30955-2014
黄曲霉毒素是一种由黄曲霉菌产生的毒素，它能够污染饲料和食品，并对人畜的健康造成危害。因此，在饲料生产和使用过程中，需要对其中的黄曲霉毒素进行检测。
目前，常用的检测方法包括免疫学方法和物理化学方法。其中，免疫学方法主要通过抗体与黄曲霉毒素结合来进行测定，具有灵敏度高、选择性好等优点。而在实际检测中，免疫亲和柱净化-高效液相色谱法是一种比较常用的方法。
按照GB/T30955-2014标准中规定的步骤进行检测，主要包括以下几个步骤：
1. 样品的制备
首先需要将饲料样品进行粉碎和筛选，然后再加入适量的提取剂进行振荡提取。提取液经过离心等处理后，即可得到待检测的样品溶液。
2. 免疫亲和柱净化
将样品溶液通过预处理好的免疫亲和柱进行净化，该步骤可以去除样品中的杂质和干扰物质，提高检测的准确性和灵敏度。
3. 高效液相色谱分析
经过免疫亲和柱净化后的样品溶液，再通过高效液相色谱进行分析。该步骤可以对样品进行进一步的分离和检测，保证检测结果的准确性。
4. 结果分析与判定
通过高效液相色谱分析得到的数据，可以进行结果分析和判定。根据GB/T30955-2014标准中规定的限量标准，可以判断样品中是否存在超标现象，从而保证饲料的安全性。
总之，免疫亲和柱净化-高效液相色谱法是一种可靠、灵敏度高的检测方法，可以用于饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。在实际应用中，需要严格按照GB/T30955-2014标准中规定的步骤进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。
