饲料中尼卡巴嗪的测定

饲料中尼卡巴嗪的测定

国家标准 GB/T19423一2020 代替GB/T194232003 饲料中尼卡巴嗦的测定 Determinationofnicarbazininfeeds 2020-12-14发布 2021-07-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/T19423一2020 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草 本文件代替GB/T19423一2003《饲料中尼卡巴的测定高效液相色谱法》,与GB/T19423 2003相比,除编辑性修改外,主要技术变化如下: Se -增加了液相色谱-串联质谱测定方法(见第5章) -更改了高效液相色谱法的检出限,增加了定量限(见第1章,2003年版的第1章) -更改了高效液相色谱法的提取和净化方法(见4.5.1、4.5.2,2003年版的7.1); -更改了高效液相色谱法的试验数据处理(见4.6,2003年版的7.4). 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAc/Tc76)提出并归口 本文件起草单位;广东省农业科学院农产品公共监测中心,浙江省兽药饲料监察所、贵州省兽药侧 料检测所 本文件主要起草人;王威利、丁晨红,张志健、赵贵,万凯、,王旭、李亚菲,苏秋权、林雪贤,章厉韵 侯轩、黄晓梅、殷秋妙,梁锐崔泽锋,谢丽丽、王英 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 GB/T194232003
GB/T19423一2020 饲料中尼卡巴嗦的测定 范围 本文件描述了饲料中尼卡巴嗦的高效液相色谱和液相色谱-串联质谱测定方法 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中尼卡巴嗦的测定 本文件高效液相色谱法中配合饲料,浓缩饲料的检出限为0.5mg/kg,定量限为1mg/kg,添加剂 预混合饲料的检出限为1mg/kg,定量限为2mg/kg;液相色谱串联质谱法的检出限为0.02mg/kg,定 量限为0.05mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195动物饲料试样的制备 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 高效液相色谱法 4.1原理 试样中的尼卡巴曝用甲醇-乙睛混合溶液提取,经MAx固相萃取小柱净化后,用高效液相色谱仪 检测,外标法定量 4.2试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂 4.2.1水:(GB/T6682,一级 4.2.2乙睛:色谱纯 4.2.3提取溶液:甲醇十乙睛=50+50. 4.2.480%乙晴溶液;准确量取80mL乙睛(4.2.2),加水定容至100mL,混匀 4.2.5氢氧化钠溶液(0.2mol/L)准确量取0.8g氢氧化钠,用水稀释并定容至100mL,混匀 4.2.64%甲酸乙晴溶液;准确量取4ml甲酸,用乙腊(4.2.2)稀释并定容至100mL,混匀 4.2.7标准储备溶液(10004g/mL):称取尼卡巴嗦(Nicarbazin,CHN,O.,CAs号:330-95-0,含量 不低于99%)标准品10mg(精确至0.01mg)于10mL容量瓶中,加人2mL二甲基亚碱溶解,用乙晴 (4.2.2)定容,摇匀,于-18C以下保存,有效期为3个月 4.2.8标准中间溶液(100g/mL.);准确量取标准储备溶液(4.2.7)1ml,置于10mL容量瓶中,用乙
GB/T19423一2020 睛(4.2.2)稀释至刻度,于-18以下保存,有效期为3个月 4.2.9标准系列溶液:准确移取适量标准中间溶液(4.2.8于10nml容量瓶中,用80%乙晴溶液 4.2.4稀释定容配成标准系列溶液,质量浓度分别为:0.04g/ml,0.14g/mL,0.24g/mL,0.54g/mlL l4g/ml、5g/ml10g/mL.20g/mL临用现配 4.2.10MAX固相萃取小柱:60mg/3ml,或性能相当者 4.2.11微孔滤膜:0.45Hm,有机系 4.3仪器设备 4.3.1高效液相色谱仪:配紫外检测器/二极管阵列检测器 43.2分析天平:感量0.001g和0.01mg 4.3.3涡漩混合器 4.3.4氮吹仪 4.3.5超声波清洗机 43.6冷冻离心机转速不低于8000r/min 4.3.7固相萃取装置 4.4样品 按G;B/T20195制备试样,至少200g,粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛,充分混匀,装人 磨口瓶中保存,备用 4.5试验步骤 4.5.1提取 平行做两份试验 称取试样2g(添加剂颜混合饲料0.2迟一l迟尼卡巴嗓含量小于10mg),精确至 0.oolg.于0mL离心管中,准确加人5mL提取游液(42.3),涡漩混匀1min,置于0C水裕超声规 取20mmn,每隔5mmin充分振荡一次 于80o0!/min离心了mina 取上清液于50mL离心管中,残溢 用25mlL提取溶液(4.2.3)重复提取一次,合并两次提取液,混匀 准确移取5mL提取液于15ml离 心管中,加人0.2mL氢氧化钠溶液(4.2.5),涡漩混匀后,得到试样待净化溶液,备用 注:当添加剂预混合饲料中尼卡巴嗓含量大于1%时,建议适当减少称样量试样中约相当于尼卡巴嗓含量10m 进行测定 4.5.2净化 MAX固相萃取小柱(4.2.10)先用3ml提取溶液(4.2.3)预淋洗 将4.5.1得到的试样待净化溶液 全部过柱,抽干 用5mL4%甲酸乙睛溶液(4.2.6)洗脱,收集洗脱液,于50水浴中氮气吹至少于 2mL，用80%乙晴溶液(4.2.4)定容至5mL,涡漩混匀后过0.45Mm微孔滤膜,得到试样溶液,用高效 液相色谱仪测定 4.5.3测定 4.5.3.1高效液相色谱参考条件 色谱柱:C柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5.04m;或性能相当者 流动相:乙睛十水=50十50. 流速:l.0mL/ /min 柱温:30C
GB/19423一2020 进样量:20AL 检测波长;350nm. 4.5.3.2标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下,分别取标准系列溶液(4.2.9)和4.5.2得到的试样溶液上机测定 尼卡巴嗓 标准溶液的高相液相色谱图见附录A 4.5.3.3定性 以保留时间定性,试样溶液中尼卡巴嗓保留时间应与标准系列溶液中尼卡巴嗓的保留时间一致,其 相对偏差在士2.5%之内 4.5.3.4定量 以尼卡巴嗦标准系列溶液中的浓度为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,标准曲线的相 关系数不应低于0.99 试样溶液与标准溶液中尼卡巴嗦的响应值均应在仪器检测的线性范围内,如超 出线性范围,应将试样提取液用提取溶液(4.2.3)稀释(稀释倍数n)至线性范围内,重新试验 单点校准 定量时,试样溶液中尼卡巴嗦的浓度与标准溶液浓度相差不超过30% 4.6试验数据处理 试样中尼卡巴嗦的含鼠以质量分数计 多点校准按公式(I)计算,单点校准按公式(2)计算 1000 p×V×V×1 m×V×1o0o 式中: 试样中尼卡巴嗦的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); Z" -从标准曲线查得的试样溶液中尼卡巴嗦的质量浓度,单位为微克每毫升(4g/mL) p V 试样提取溶液的总体积,单位为毫升(mL); 试样定容的体积,单位为毫升(mL). V V -用于净化的试样提取液的体积,单位为毫升mL); 试样的质量,单位为克(g); mn 超出线性范围后,需要进一步稀释的倍数 A×V×VX0X1000 X w= A.×V×n×1000 式中: -试样中尼卡巴嗦的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); Z" A 试样溶液中尼卡巴嗦的峰面积 V 试样提取溶液的总体积,单位为毫升(mL):; V -试样定容的体积,单位为毫升(mL); -标准溶液中尼卡巴嗦的质量浓度,单位为微克每毫升(4g/mL); A 标准溶液中尼卡巴嗓的峰面积; 用于净化的试样提取液的体积,单位为毫升(mL); V 试样的质量,单位为克(g); m -超出线性范围后,需要进一步稀释的倍数 测定结果用平行测定的算术平均值表示,计算结果保留三位有效数字
GB/T19423一2020 4.7精密度 在重复性条件下,两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10% 5 液相色谱-串联质谱法 5.1原理 试样中的尼卡巴嗓用甲醇-乙腊混合溶液提取,经MAX固相萃取小柱净化后,用液相色谱-串联质 谱仪检测,基质匹配外标法定量 5.2试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂 5.2.1水:G;B/T6682,一级 5.2.2乙睛;色谱纯 5.2.3提取溶液;甲醇十乙腊一50十50. 5.2.4氢氧化钠溶液(0.2mol/L):准确量取0.8g氢氧化钠,用水稀释并定容至100mL,混匀 5.2.54%甲酸乙晴溶液;准确量取4mL甲酸,用乙睛(5.,2.2)稀释并定容至100mL,混匀 5.2.6标准储备溶液(10001 /ml):同4.,2.7 4g 5.2.7标准中间溶液(104g/mL) );准确量取标准储备溶液(5.2.6)0.1ml,置于10ml容量瓶中,用乙 睛(5.2.2)稀释至刻度,于-18以下保存,有效期为3个月 5.2.8标准工作溶液(14g/mL);准确量取标准中间溶液(5.2.7)1.0mL,置于10mL容量瓶中,用乙脖 5.2.2)稀释至刻度,于-18C以下保存,有效期为1个月 5.2.9MAX固相萃取小柱:60mg/3mL,或性能相当者 5.2.10微孔滤膜:0.22Mm,有机系 5.3仪器设备 5.3.1液相色谱-串联质谱;配有电喷雾离子源 5.3.2分析天平:感量0.001g和0.01mg 5.3.3涡漩混合器 5.3.4超声波清洗机 5.3.5冷冻离心机转速不低于8000r/n min 5.3.6固相萃取装置 5.4样品 按GB/T20195制备样品,至少200g,粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛,充分混匀,装人 磨口瓶中保存,备用 选取与待测样品类型相同,均匀一致，且在待测物保留时间处仪器响应值小于方 法定量限30%的饲料样品,作为空白样品 5.5试验步骤 5.5.1提取 平行做两份试验 称取试样2g(添加剂预混合饲料1g),精确至0.001g,于50ml离心管中,准确 加人25ml提取溶液(5.,2.3),涡漩混匀1min,置于50C水浴超声提取20min,每隔5min充分振荡-
GB/T19423一2020 次 于8000r/min离心5min 取上清液于100m容量瓶中,残渣用25mL提取溶液(5.2.3)重复提 取一次,合并两次提取液,用提取溶液(5.2.3)定容至刻度,混匀 准确移取2ml提取液于15mL离心 管中,加人0.1mL氢氧化钠溶液(5.2.4),涡漩混匀后,得到试样待净化溶液,备用 注当添加剂预混合饲料中尼卡巴嗓含量大于1%时,建议适当减少称样量(试样中约相当于尼卡巴嗓含量10mg) 进行测定 5.5.2净化 MAx固相萃取小柱(5.2.9)先用3ml提取溶液(5.2.3)预淋洗 将5.5.1得到的试样待净化溶液 全部过柱,抽干,准确加人5mL4%甲酸乙腊浴液(5.2.5)洗脱,收集洗脱液,准确移取洗脱液2mL,用 乙睛(5.2.2)定容至10ml,混匀后过0.22m微孔滤膜,得到试样溶液,用液相色谱-串联质谱仪测定 5.5.3基质匹配标准系列溶液的制备 称取基质空白试样,按照5.5.1和5.5.2处理得到空白试样溶液 取适量的标准工作溶液(5.2.8). 以空白基质溶液进行稀释,配制成质量浓度分别为0.04ng/ml,0.1ng/mL,0.2ng/ml、1ng/mL 2ng/mL、5ng/mL、10ng/ml、20ng/mL和50ng/mL基质匹配标准系列溶液,待测,临用现配 5.5.4测定 5.5.4.1液相色谱参考条件 色谱柱:C;柱,柱长100mm,内径2.1mm,粒径2.7Am,或性能相当者 柱温:30C 流速:0.3ml/min 进样量:5AL 流动相A;水;B;乙晴 梯度洗脱程序见表1 表1梯度洗脱程序 时间 B min % 0.0 60 40 1.0 60 40 2,0 20 80 4.5 20 80 4.6 60 40 8.0 60 40 5.5.4.2质谱参考条件 电离方式;电喷雾电离,负离子模式(ESI=). 检测方式:多反应监测(MRM). 毛细管电压:4.5kV 离子源温度:400C 脱溶剂温度526c
GB/T19423一2020 干燥气流量:氨气600L/h 尼卡巴嗦的定性、定量离子对及其他参考质谱条件等见表2 表2尼卡巴嗦的定性、定量离子对及其他参考质谱条件 监测离子对 锥孔电压 碰撞能量 被测物名称 eV 1/3 13 300,.90>137.05" 15 尼卡巴嗓 37 300.90>107.05 为定量离子 5.5.4.3基质匹配标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下,分别取基质匹配标准系列溶液(5.5.3)和5.5.2得到的试样溶液上机测定 尼卡巴嗦标准溶液定量离子质量色谱图见附录B. 5.5.4.4定性 在相同试验条件下,试样溶液与基质匹配标准系列溶液中尼卡巴嗦的保留时间相对偏差应在 士2.5%之内 根据表2选择的定性离子对,比较试样谱图中尼卡巴嗓定性离子的相对离子丰度与浓 度接近的基质匹配标准系列溶液中对应的定性离子的相对离子丰度,若偏差不超过表3规定的范围， 则可判定为样品中存在对应的尼卡巴嗦 表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% -50 20~50(含) 0~20(含 10 /% 士20 士25 士30 士50 最大允许偏差/ 5.5.4.5定量 以尼卡巴嗓基质匹配标准系列溶液的浓度为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,标准曲 线的相关系数不应低于0.99 试样溶液与标准溶液中尼卡巴嗦的响应值均应在仪器检测的线性范围 内,如超出线性范围,应重新试验或将试样溶液和基质匹配标准溶液用提取溶液(5.2.3)稀释(稀释倍数 n)至线性范围内,重新测定 单点校准定量时,试样溶液中尼卡巴嗦的浓度与标准溶液浓度相差不超 过30% 5.6试验数据处理 试样中尼卡巴嗦的含量以质量分数计 多点校准按公式(3)计算,单点校准按公式(4)计算: p×V1×Vs 3 7 ×n m×V×1000 式中 -试样中尼卡巴嘴的舍量,单位为毫克每千克(me/ke) Z0 从标准曲线查得的试样溶液中尼卡巴嗦的质量浓度,单位为纳克每毫升(ng/nmL). ？, V 试样提取溶液的总体积,单位为毫升(mL) V -试样定容的体积,.单位为毫升(aml.)
GB/T19423一2020 试样的质量,单位为克(g); n V， -用于净化的试样提取液的体积,单位为毫升(ml); 超出线性范围后,需要进一步稀释的倍数 A×V×V.×p Z= 1000 A.×V×m× 式中 -试样中尼卡巴嗦的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); u 试样溶液中尼卡巴嗦的峰面积 w -试样提取溶液的总体积,单位为毫升(mL); 试样定容的体积,单位为毫升(ml); V. 标准溶液中尼卡巴嗦的质量浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); -标准溶液中尼卡巴秦的峰面积 -用于净化的试样提取液的体积,单位为毫升(ml); 试样的质量,单位为克(g) n -超出线性范围后,需要进一步稀释的倍数 测定结果用平行测定的算术平均值表示,计算结果保留三位有效数字 5.7精密度 在重复性条件下,两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的15%
GB/T19423一2020 附 录 A 资料性 尼卡巴嗓标准溶液的高效液相色谱图 尼卡巴嗦标准溶液的高效液相色谱图见图A.1 检测器A350nm 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00 10.00 12.5 20.0 时间/min 图A.1尼卡巴膝标准溶液0.1g/mL)的高效液相色谱图
GB/T19423一2020 附录 B 资料性) 尼卡巴嗦标准溶液的定量离子质量色谱图 尼卡巴嗓标准溶液的定量离子质量色谱图见图B.1 1:300.9000>137.0500(- 100000 90000 80000 70000 60000 50000 40000 30000 20000 10000 5.5&.o6.57.07.5 4.5 0.0 2.5 4.0 5.0 时间/minm 图B.1尼卡巴嗓标准溶液(2ng/mL)的定量离子质量色谱图

饲料中尼卡巴嗪的测定GB/T19423-2020

GB/T19423-2020《饲料中尼卡巴嗪的测定》是中国国家标准中关于饲料中尼卡巴嗪含量检测的规范。尼卡巴嗪是一种常用的抗生素，广泛应用于畜禽养殖业中，但过高的使用量会对人体健康产生不良影响，因此需要对其含量进行监测和控制。

首先，该标准规定了尼卡巴嗪的检测方法。涵盖了样品处理、提取、净化、分离、检测等多个步骤。其中，样品处理是关键的一步，可以通过不同的预处理方法选择合适的样品前处理方法来提高检测灵敏度和准确性。

其次，该标准还规定了尼卡巴嗪的检测原理及测定方法，包括高效液相色谱法、气相色谱法、液相质谱法等。这些方法具有灵敏、准确、可靠的特点，能够满足不同需求的检测要求。

此外，该标准还规定了尼卡巴嗪的检测限值。根据国家相关标准和法规，对尼卡巴嗪在饲料中的含量进行了限制和要求。该标准提出了合理的检测限值，并要求对超限样品进行处置。

最后，该标准还规定了检测过程中的质量控制要求。包括实验室的环境条件、设备、试剂等方面的要求，以确保检测结果的准确性和可靠性。

综上所述，GB/T19423-2020《饲料中尼卡巴嗪的测定》为监测饲料中尼卡巴嗪含量提供了标准化的方法和流程，从样品处理、提取、净化、分离、检测等多个方面进行了规范。这将有助于保障畜禽养殖业的安全生产，保护人类健康，促进相关行业的发展和进步。

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