动物源性食品中磺胺类药物残留测定方法放射受体分析法

动物源性食品中磺胺类药物残留测定方法放射受体分析法

国家标准 GB/T21173一2007 动物源性食品中磺胺类药物残留 测定方法放射受体分析法 Determinationofsulfadrugsresiduesinanimalderivedfood Radio-reeeptoassaymethodl 2007-10-29发布 2008-04-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T21173一2007 前 言 本标准的附录A为规范性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位;福建出人境检验检疫局 本标准主要起草人:黄晓蓉、林杰,郑晶、杨方、陈彬、陈健,翁国柱 本标准系首次发布
GB/T21173一2007 动物源性食品中磺胺类药物残留 测定方法放射受体分析法 范围 本标准规定了肉类和水产品中磺胺类药物残留测定的制样和放射受体分析方法 本标准适用于肉类和水产品中磺胺类药物残留的筛选测定 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 ISO3696;1987 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992, ,neg 试样制备和保存 试样制备 从原始样品中取出部分有代表性样品,应尽可能将脂肪剔除 将可食部分放人高速组织捣碎机均 质,充分混匀,用四分法缩分不少于500g试样 装人清洁容器内,并标明标记 制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化,用于测定的样品细菌数不能超过 10个/ g 试样保存 3.2 -18C以下保存,新鲜或冷冻的组织样品可在2C一6C贮存72h. 试样于一 测定方法 4 原理 测定的基础是竟争性受体免疫反应,['H]标记的磺胺二甲嗜和样品中残留的磺胺类药物与微生 物细胞上的特异性受体竟争性结合 用液体闪烁计数仪测定样品中['H]含量的计数值epm),计数值 与样品中的磺胺类药物残留量成反比 4.2试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 4.2.1Charml组织中的磺胺类药物测定试剂盒' 4.2.1.1阴性对照浓缩干粉;贮存于2C一6C 使用时用10mL水溶解,配制成阴性组织液 阴性组 织液可在2C一6C中保存48h 如长时间不用,可于一15C以下冷冻保存2个月,使用时将其解冻,解 冻后的溶液可在2C一6C保存24h. 4.2.1.2MsU多种抗生素标准品;贮存于2C一6C 使用时用10mL水溶解,配制成MSU多种抗 生素标准溶液(其中磺胺二甲嗜晓浓度为10004g/L) MsU多种抗生素标准溶液保存方法 同4.2.1.1 1Charm组织中的磺胺类药物测定试剂盒和Charm液体闪烁计数仪是由CharmScience公司提供的产品的商 品名 给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可 如果其他等效产品具有相同的效 果,则可使用这些等效产品
GB/T21173一2007 nml 水溶解,配制成MIsU萃取缓冲液,可在 4.2.1.3MsU萃取缓冲液浓缩干粉:使用时用1000 2C6C保存2个月 4.2.1.4M2缓冲液浓缩干粉;使用时用50ml水溶解,配制成M2缓冲液，可在2C6C保存 2个月 4.2.1.5受体试剂片剂;白色药片,于一15C以下冷冻保存 4.2.1.6['H]标记的磺胺二甲密唁药物片剂:粉红色药片,于一15C以下冷冻保存 4.2.2lnmol/几盐酸:8.2ml浓盐股加水定容至1o00mL. 4.2.了闪烁液 4.2.4pH试条 4.2.5离心管;50mL 4.2.6硅绷酸盐玻璃试管及试管塞 4.2.7药片压杆 4.3仪器和设备 4.3. CharmI液体闪烁计数仪" 4.3.2离心机:400r/min. 4.3.3高速组织捣醉机 4.3.4涡旋混合器 4.3.5加热器;90c 4.3.6移液器:1mL一5mlL,100儿L~1000AL 分析步骤 5.1对照液的配制 5.1.1阴性对照液的配制;取2mL阴性组织液(4.2.1.1),加人6mLMsU萃取缓冲溶液(4.2.1.3) 中混匀,制成阴性对照液,该对照液可在室温下保存6h 5.1.2阳性对照液的配制;取0.3mlMSU多种抗生素标准溶液(4.2.1.2),加人6ml 阴性组织液 (4.2.1.1)中混匀,然后从中取2mL混合溶液加人到6mlMSU萃取缓冲溶液(4.2.1.3)中混匀,制成 阳性对照液,该对照液可在室温下保存6h 试样提取 .2.1称取10g(精确到0.1g)均质好的试样于50mL离心管,加人30mLMsU萃取缓冲溶液 5 (4.2.1.3),涡旋振荡5nmin 2.2将离心管置80C士2C孵育器内孵育45nmin,再将离心管置冰水内10min后,3300r/min离心 5 10， min 吸出上清液,注意不要将漂浮的脂肪颗粒混人上清液内 恢复室温后,用pH试条检查pH是 5 .2. 3 否为7.5 如不准确,用M2缓冲液(4.2.1.4)或1mol/L盐酸调整至pH7.5,即为样品测试液 测定 55 .3 3.1用药片压杆的平端将受体试剂片剂(4.2.1.5)压人一洁净的玻璃试管内,加300L水到试管内 5 用涡旋混合器振荡10s,使药片振碎均匀 用移液器加4mL样品测试液,或阴性对照液(5.1.1)或阳性对照液(5.1.2)到试管内 5 3. 2 3. 3 5 用药片压杆的平端压人['H]标记的磺胺二甲喀院药物片剂(4.2.1.6),用涡旋混合器振荡 15s， 上下来回10次 置65C士1C孵育器内,孵育3 min 3 取出试管,于3300r/min离心3min 离心停止后立即取出试管,倒掉上清液,用吸水材料吸 干管口边缘处的污渎 5.3.5加300L水到试管内,振荡并混合均匀,再加人3mL闪烁液(4.2.3)到试管内,将试管塞盖上
GB/T21173一2007 后,涡旋混匀 5.3.6将试管放人液体闪烁计数仪内,读['H]项的计数值 注;建议1次同时进行6支试管以下的测定 5.4控制点的确定 4.1控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值,可根据筛选水平自行设定 5 5 .4.2筛选水平为20ug/kg时,控制点设定步骤;称取10g均质好的同类空白组织样品,加人0,2ml MSU多抗生素标准溶液,充分混匀制成标准样品,按5.2和5.3进行测定 测定6个非重复的加标样 品的计数值,求出平均值乘上系数1.2,即为筛选水平20ug/kg的控制点 5 4.3当筛选水平大于204g/kg的样品时,可将样品测试液适当稀释后测定 5.5结果判定 5 .5.1当样品的计数值大于控制点时,判定为“阴性” 当样品的计数值小于或等于控制点时,应重新测定样品,且同时需要测定阴性对照液和阳性对 5 5. .2 照液 阴性对照液和阳性对照液的计数值,需在正常范围波动(见第A.3章) 当重新测定样品的计数 值大于控制点时,判定为“阴性”;小于或等于控制点时,则判定为“初筛阳性” 确证 本方法为初筛方法,阳性结果应用其他方法进行确证 检测限 在肉类和水产品中,本方法检测限以磺胺二甲密计磺胺类药物(包括磺胺甲基密,磺胺二甲基 喀唁,碱胺间甲氧喘,碱胺间二甲氧密,碱胺呤膳咻,碱胺甲嚷二,碱胺毗院、碱胺异膳陛,碱胺甲 基异嗯陛,磺胺喀、磺胺嚷幽、,磺胺甲氧哒嗓,磺胺氯哒嗓)总量为20g/kg
GB/T21173一2007 附录 A 规范性附录 仪器和试剂日常监测 I液体闪烁计数仪零点校准 A.1 Charm 取空的专用试管放人液体闪烁计数仪计数,计数值需小于50,否则需调零 如测得的计数值偏大 可能由于液体闪烁计数仪有大量静电存在所引起,可用湿抹布将试管外壁湿润后放人液体闪烁计数仪 进行测定,重复几次后可以达到正常值 A.2[C']通道校准 取['标记的嗔胶二甲喘院药物片剂加人玻璃试管,加300L水到试管内,振荡使沉淀物完全破 加了mL闪烁液到试管内竭旋混匀至试管内设有不均一的云状物 将试管放人液体闪烁计数仪 碎 内,读['H]项和['C]项的计数值 ['H]项的计数值应大于1500,且['C]项与['H]项的计数值的比 值应小于0.1 A.3试剂监测 A.3.1对每一批新的试剂需测定零质控标准,测定3次阴性对照液计数值,其平均值即为零质控标 准 当遇到样品怀疑“初筛阳性”时,通过测定阴性对照液和阳性对照液计数值与作为零质控标准的计 数值比较,可确定试剂和液体闪烁计数仪是否正常 A.3.2正常情况下,阴性对照液计数值在零质控标准计数值上下波动,幅度约士20% A.3.3正常情况下,阳性对照液计数值小于控制点 A.3.4如果测定结果与A.3.2或A.3.3不相符,应重新测定零质控标准和控制点,并重新测定样品