河豚鱼和鳗鱼中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的测定液相色谱-串联质谱法

河豚鱼和鳗鱼中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T22960一2008 河豚鱼和鳗鱼中头袍哗琳、头袍匹林、 头抱氨茉、头抱洛宁、头抱呸肘 残留量的测定液相色谱-串联质谱法 Determinationofcefazolin,cefapirin,cephalexin,cefalonium. cefquinomeresiduesinfuguandeel- LC-MS-MSmethod 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22960一2008 前 言 本标准的附录A、附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;秦皇岛出人境检验检疫局 本标准主要起草人:李学民、王贺琴、母健、曹彦忠、刘晓茂、庞国芳
GB/T22960一2008 河豚鱼和鳗鱼中头弛啾、头抱匹林、 头跑氨茉、头抱洛宁、头饱哇肘 残留量的测定液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了河豚鱼和鳗鱼中头抱陛琳,头抱匹林、头抱氨节、头抱洛宁、头抱唾肪残留量的液相色 谱-串联质谱测定方法 本标准适用于河豚鱼和鳗鱼中头抱陛琳、头抱匹林、头抱氨节、头抱洛宁、头抱畦肪残留量的测定 本标准的方法检出限;头抱哗咻为l04g/kg;头抱匹林,头袍氨节,头抱洛宁,头抱唾肪为2.04g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第1部分;总则与定义(GBT6379.1 2004,ISO5725-l:l994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分:确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2一2004,IsO5725-2;1994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO3696;1987,MOD 原理 试样中五种头抱菌素药物残留用乙睛提取,旋转蒸发除去乙晴,用水定容,液相色谱-串联质谱谐仪测 定,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯 水:GB/T6682,一级 4.2甲醇;色谱纯 4.3乙睛色谱纯 乙酸 么 45正已烧 4.6乙睛饱和的正己婉;取100ml正己炖(4.5)和.50ml乙腊(4.3)于250ml分液漏斗中,振摇1 min 静置分层后,弃掉乙晴 4.7标准物质:头抱哗琳(CAS:25953-19-9),头抱匹林(CAs:24356-60-3)、头抱氨节(CAs:16549-56-7) 头袍洛宁(CAs;5575-21-3),头袍唾肪(CAs;1l18443-89-3),纯度>99% 4.81.01 mg/ml五种头袍菌素标准储备溶液:准确称取适量的每种标准物质(4.7),分别用水配制成 浓度为1.0mg/mlL的标准储备溶液 储备液贮存在一18C冰柜中 4.9五种头抱菌素标准混合工作溶液;根据需要吸取适量的每种头抱菌素标准储备溶液(4.8),用水稀 释成适当浓度的标准混合工作溶液
GB/T22960一2008 4.10滤膜:0.2Am. 仪器 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪;配有电喷雾离子源 5.2分析天平，感量0.lmg.0.0n g 5.3均质器 5.4微量注射器;25AlL,l00A" 5.5刻度样品管;5mL,精度为0.1mL 5.6高速冷冻离心机;带有50mL具塞离心管,转速达到10000r/min以上 5.7氮气浓缩仪 试样制备与保存 试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分搅碎,混匀,均分成两份,分别装人洁净容器内 密 封后作为试样,标明标记 在抽样和制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的 变化 6.2试样的保存 将试样于一18C保存 测定步骤 试样溶液的制备 称取5只试样(精确到0.01g)置于50mL离心管中,加人20ml乙腊(4.3),使用均质器(5.3)均 质1min,提取液使用高速冷冻离心机(5.6)在10C,10000r/min离心10min,把上层提取液移至另 离心管中 用15mL乙睛重复提取一次,合并两次的提取液,并加人10mL乙睛饱和的正已烧(4.6). 振荡1nmin,弃掉正己烧 把提取液移至100m鸡心瓶中,在40C旋转蒸发除去乙腊,用2mL.水溶解 残渣,摇匀后,样液过0.2Am滤膜(4.10),供液相色谱-串联质谐仪测定 7.2空白样品添加标准混合工作溶液的制备 分别准确移取适量五种头抱菌素标准混合工作溶液(4.9),添加到5.0只样品中,按照7.1步骤操 作,制得头抱陛啾浓度分别为104g/kg,20ug/kg、404g/kg、100g/kg;头抱匹林、头抱氨节,头抱洛 宁,头抱唾肪浓度分别为2.0ug/kg、4.0g/kg、8.04g/kg、20g/kg四个样品添加标准混合工作溶 液,供液相色谱-串联质谱仪测定 测定条件 7.3.1液相色谱参考条件 a)色谱柱;ZORBAXSBC8,3.5Anm,150mm×2.1mm(内径)或相当者; 流动相组成、流速及梯度程序见表1 b) c)柱温;30C; d 进样量:20l 表1流动相梯度程序及流速 时间/min 流速/(AL/min 水(含0.1%乙酸/% 乙睛/% 0.00 200 95.0 5.0 2.00 200 95,0 5.0 2.01 200 40.0 60.0
GB/T22960一2008 表1(续 时间/min 流速/(AlL/min 水(含0.1%乙酸/% 乙睛/% 8.00 200 40.0 60.0 8.01 200 95.0 5.0 15,00 95.0 200 5.0 7.3.2质谱参考条件 离子源:电喷雾离子源; a b 扫描方式:正离子扫描; c 检测方式:多反应监测; 电喷雾电压;5500V dD e 雾化气压力:0.055MPa; 气帘气压力:0.079MPa g)辅助气流速;6L/min; 离子源温度:400C h 定性离子对、定量离子对和去簇电压(DP)、碰撞气能量(CE)见表2 表2五种头抱菌素的定性离子对、定量离子对,去簇电压和碰撞气能量 化合物中文名称 化合物英文名称定性离子对(m/)定量离子对(n 去簇电压/ 碰撞气能量/ m/2 456/324 17 cefazolin 456/324 50 头袍坐啾 456/156 24 424/292 23 424/292 45 头抱匹林 cephapirin 424/152 34 348/158 14 10 头抱氨节 cephalexin 348/158 22 348/174 29 459/152 头袍洛宁 cefaloniumm 459/152 35 459/123 18 21 529/134 529/134 头抱瞠肪 cefauinome 49 19 529/396 7.4液相色谱-串联质谱测定 4.1定性测定 7. 选择每种待测物质的1个母离子,2个以上子离子,在相同试验条件下,样品中待测物质的保留时 间与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在士2.5%之内;样品谱图中各定性离子相对丰度与浓度 接近的基质标准溶液的谱图中离子相对丰度相比,偏差不超过表3规定的范围,则可判定为样品中存在 对应的待测物 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 2050 相对离子丰度K 士20o 士25 土50 士30 允许的最大偏差 定量测定 用7.2制备的空白样品添加标准混合工作溶液分别进样,以标准工作溶液浓度为横坐标,以峰面积 为纵坐标,绘制标准工作曲线 用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中五种头袍菌素的响应值均
GB/T22960一2008 应在仪器测定的线性范围内 在上述色谱条件下,五种头抱菌素标准物质的多反应监测MRM)色谱 图参见附录A中的图A.1 本方法的添加回收率数据参见附录B中的表B.1 7.5 平行试验 按上述步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.6空白试验 除不称取试样外,均按上述分析步骤进行 结果计算 试样中五种头抱菌素残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算 1000 -xY X= -× 000 式中: -试样中被测组分残留量,单位为微克每千克(4g/kg); 从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); -试样溶液定容体积,单位为毫升(mL) -最终试样溶液所代表的试样质量,单位为克(g) n 计算结果应扣除空白值 精密度 9.1 -般规定 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2规定确定的,其重复性和再现性的值 是以95%的可信度来计算 9.2重复性 在重复性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,试样中五种头袍菌 素添加浓度范围及重复性方程见表4 表4五种头抱菌素添加浓度范围及重复性和再现性方程单位为微克每千克 R 头抱菌索名称 添加浓度范围 重复性限" 再现性限 8 9719n -1.0535 aR一价.s8n -0.514 头抱陛啾 10l100 lgr=0, R 头抱匹林 2.020 lgr=1.2213lgm-1.1577 =0.1947m十0.1223 lgr=1.0504lgm-1.0257 lgR=0.9167lgm-0.6055 头抱氨节 2.0~20 头抱洛宁 2.0~20 lgr=1.0704lgm-1.1l73 lgR=0.8523lgm-0.6099 头抱唾肪 2.0~20 lgr=0.6656lgm-0.7313 lgR=0.926llg-0.6502 注:m为两次测定结果的算术平均值 如果两次测定值的差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 在再现性试验条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,试样中五种头抱菌 素添加浓度范围及再现性方程见表4
GB/T22960一2008 附 录A 资料性附录 标准物质多反应监测(MRN)色谱图 五种头抱菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图A.1 8.38 头抱啤琳 t/min 8.02 头拍匹林 t/min 8,09 头拍节 t/min B.13 头抱洛宁 /min 8.05 头袍哇厨 1/min 图A.1五种头抱菌素标准物质的多反应监测(NMRM)色谱图
GB/T22960一2008 附 录 B 资料性附录 回 收 率 五种头抱菌素添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1 表B.1五种头抱菌素添加浓度及其平均回收率的试验数据 化合物名称 添加浓度/ug/kg 平均回收率/% 10 82.6 20 85.7 头抱陛啾 40 89.7 10o 97.2 2.0 81." 4.0 90.9 头抱匹林 8.0 98.2" 20 95.7" 2.0 85.9 92.5 4.0 头抱氨节 03.4 8.0 20 89.8 2.0 86. 4.0 89.6 头袍洛宁 8.0 96.5 20 93. 2.0 82.5 4.0 105,6 头抱畦肪 8.0 95.9 20 94.3