GB/T35951-2018
化妆品中螺旋霉素等8种大环内酯类抗生素的测定液相色谱-串联质谱法
Determinationofeightmacrolideantibioticssuchasspiramycinincosmetics—LC-MS/MS
- 中国标准分类号（CCS）Y42
- 国际标准分类号（ICS）71.100.70
- 实施日期2018-09-01
- 文件格式PDF
- 文本页数12页
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化妆品中螺旋霉素等8种大环内酯类抗生素的测定液相色谱-串联质谱法
国家标准 GB/T35951一2018 化妆品中螺旋霉素等8种大环内酯类 液相色谱-串联质谱法 抗生素的测定 Determinationofeightmaeroideantibiotiessuchas spiramycinincosmetics一LC-MS/MS 2018-02-06发布 2018-09-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/35951一2018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准由轻工业联合会提出
本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口
本标准起草单位:苏州世谱检测技术有限公司、广东华鑫检测技术有限公司、江苏隆力奇生物科技 股份有限公司、上海市日用化学工业研究所、完美()有限公司、欧诗漫生物股份有限公司、苏州质量 检测科学研究院、河北省食品检验研究院、江苏省食品药品监督检验研究院、江苏省产品质量监督检验 研究院、苏州大学、苏州赛分科技有限公司
本标准主要起草人:车文军、杨祥、沈敏、代丹、周建青、张丽华、李晓敏、陆小宇、杨安全、范素芳、 方痒,哀利文.刘园,、李海、廖华勇,康微.王小丹、.张征.张岩,武中平、卢剑李建祥、黄学英
GB/T35951一2018 引 言 本标准的被测物质是我国《化妆品安全技术规范(2015年版)》规定的禁用物质
禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质
《化妆品安全技术规范 2015年版)》规定:若技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时,应进行安全性风险评估,确保 在正常、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害
目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法
GB/35951一2018 化妆品中螺旋霉素等8种大环内酯类 抗生素的测定液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了化妆品中螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗 红霉素含量的液相色谱-串联质谱(IC-Ms/MS)测定方法的试验方法、结果计算,回收率与精密度、允许 差等内容
本标准适用于膏霜乳液、水剂类化妆品中螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌 素、克拉霉素、罗红霉素含量的测定
本标准方法检出限与定量限参见附录A中的表A.1
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 试验方法 3.1原理 样品经提取液超声提取、离心后，经固相萃取小柱净化,用液相色谱-串联质谱法测定和确证,外标 法定量
3.2试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 3.2.1甲醉;色谱纯
3.2.2乙腊;色谱纯
3.2.3甲酸;色谱纯
3.24正已烧色谱纯 3.2.5氢氧化纳
3.2.6磷酸二氢纳. 3.2.70.1mol/儿氢氧化纳溶液-称取4.0g氢氧化钠,并用水稀释至1L 3.2.8甲醉水溶液(3+7):量取30mL甲醉(3.2.1)与70ml水混合
3.2.9乙晴水溶液(28);量取20ml乙腊(3.2.2)与80ml水混合
3.2.10磷酸盐缓冲溶液(0.1mol/L):溶解12.2g磷酸二氢钠于950ml水中,用0.lmol/I氢氧化钠 溶液调节pH值至8.0,最后用水稀释至1L
3.2.118种大环内酯抗生素标准样品/物质;纯度均不小于96%
螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹 桃霉素、红霉素、泰乐菌素,克拉霉素,罗红霉素的药物名称、英文名称,CAs登录号、分子式、相对分子
GB/T35951一2018 质量及结构式参见附录B中的表B.1
3.2.12标准储备溶液;准确称取适量各标准物质(3.2.1l)分别置于50ml.容量瓶中,用甲醇定容至刻 度,配制成浓度为500mg/L的储备液,冷藏避光保存,有效期为一个月
3.2.13混合标准储备溶液;分别准确移取阿奇霉素、竹桃霉素、红霉素,泰乐菌素,克拉霉素,罗红霉素 标准储备溶液(3.2.12)0.2 ml 和螺旋霉素、替米考星标准储备溶液(3.2.12)6.0ml于100ml容量瓶 中,用甲醇定容至刻度,配制成阿奇霉素、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素浓度为 mg/L,螺旋霉素、替米考星浓度为30mg/儿的混合标准储备溶液,临用前现配
3.2.14OasisHLB固相萃取柱或相当者;200mg,3ml
使用前依次用5ml甲醇,5ml.水活化.
3.2.15微孔滤膜:0.22Hm,有机相
3.3仪器和设备 3.3.1液相色谱-串联质谱仪(IC-MS/MS)配有电喷雾离子源(ES)
3.3.2电子天平:感量为0.0001g和0.01g
3.3.3离心机:转速不低于6000r/min
3.3.4超声波清洗机
3.3.5固相萃取装置
3.3.6氮气吹干仪
3.3.7涡旋混合器
3.3.8具塞塑料离心管:15ml
3.4试样制备 3.4.1提取 3.4.1.1膏霜乳液类化妆品(水包油 称取试样约0.2g(精确至0.0001g)于15mL具塞塑料离心管中,准确加人10mL甲醇(3.2.1 涡旋分散均匀后,超声提取15min,以6000r/min离心10min,移取5.0mL上清液,加15mL磷酸盐 缓冲溶液(3.2.10)混匀后,待净化
3.4.1.2膏霜乳液类化妆品(油包水) 称取试样约0.2g精确至0.0001g)于15mL具塞塑料离心管中,加人2ml正已烧(3.2.4),分散 均匀后,准确加人10mL磷酸盐缓冲溶液(3.2.10),超声提取15min,以6000r/min离心10min,弃去 上层正己烧后,移取5.0ml下层清液,加5mL磷酸盐缓冲溶液(3.2.10)混匀后,待净化
3.4.1.3水剂类化妆品 称取试样约0.2g精确至0.0001g)于15mL具塞塑料离心管中,用磷酸盐缓冲溶液(3.2.10)定容 至10ml,混匀,以6000r/min离心5min,移取5.0mL上清液,待净化
3.4.2净化 将试样提取液转移至固相萃取小柱(3.2.14)中,依次用5mL.水,5mL甲醇水溶液(3.2.8)淋洗 弃去流出液,减压抽干后,用5mL甲醇(3.2.1)洗脱,收集洗脱液
在40C水浴中用氨气吹至近干 加人1.0ml乙腊水溶液(3.2.9),在涡旋混合器上混合1min后,过微孔滤膜(3.2.15)后滤液待测
GB/35951一2018 3.5液相色谱-串联质谱测定 3.5.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下: 色谱柱:C柱,100mm×2.1mm(i.d.),5m,或相当者; a b 流动相:A:乙睛,B;0.2%甲酸溶液,梯度洗脱梯度洗脱条件见表l 柱温:30C; c d 进样量:l0!L 表1梯度洗脱程序表 时间/minm 流速mL/mim) 0.0 10% 90% 0,30 20% 80% 2,0 0.30 4.0 30% 70% 0.30 7.0 40% 60% 0.30 10.l 95% 5% 0.30 10% 90% 0.30 11.0 90% 18.0 10% 0.30 3.5.2串联质谱参考条件 串联质谱参考条件如下: 电离方式:电喷雾电离,正离子模式 a b 喷雾电压;3.0kV; 雾化温度300C; c d 毛细管温度;350C; e 鞘气压力:50Arb(1Arb=1psi); fD 辅助气压力.20Arb(IArb=0.3L/mim) 碰撞气、鞘气和辅助气:氯气(99.999%); 8 h 扫描模式:多反应监测(MRM)模式,8种大环内酯类抗生素的质谱参数见表2
表2质谱参数 母离子 子离子 碰撞能 透镜电压 药物名称 序号 Parention Daughterion Collisionenergy Tubelens No
Drugs eV m/之 n/3 174.0" 螺旋霉素 32 843.3 105 31 Spiramyein 142.1 阿奇霉素 591.2 46 749.0 103 37 Azithromycin 158.0 替米考星 174.l 47 869.1 124 Tilicosin 98.2 43
GB/T35951一2018 表2续) 母离子 子离子 碰撞能 透镜电压 序号 药物名称 Parention Colisionenergy Daughterion Tubel.ens No. Drugs eV 22 Y 竹桃霉素 158.0” 25 688.3 84 544.2 16 Oleandomycin 576.2 红霉素 3 734.0 84 20 Erythromyecin 158.0 173.9 泰乐菌素 916.0 ll1 Tylosin 155.9" 克拉霉素 590.22 2 84 748.0 8 158.0” Clarithramvcin 罗红霉素 679.2 28 837.2 79 Roxithromyein 158.0" 22 定量离子(Quantitativeion)
3.5.3混合标准工作溶液的制备 用乙腊水溶液(3.2.9)将混合标准储备溶液(3.2.13)逐级稀释得到阿奇霉素、竹桃霉索、红霉素,泰 乐菌素、克拉霉素,罗红霉素浓度为5g/L.10g/L.25g/L,50g/L1004g/儿及螺旋霉素、替米考 星浓度为1504g/L.300g/L7504g/L、15004g/L.3000g/几的系列混合标准工作溶液.浓度由低 到高进行检测,以定量离子峰面积对质量浓度作图,做出标准曲线回归方程
3.5.4测定步骤 样品待测液中各组分的响应值应在标准曲线的线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进样测定
3.5.5定性判定 在相同条件测定样品溶液和标准溶液,如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中的 某种组分峰的保留时间一致(变化范围在土2.5%),并且所选择的两对子离子的质荷比一致,样品溶液 中定性离子相对丰度与浓度相当标准工作溶液中定性离子的相对丰度进行比较时,相对偏差不超过 表3规定的范围,则可判断样品中存在该组分
8种大环内酯类抗生素标准物质选择离子质量色谱图参见附录C中的图C.1
表3定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差 -50% >20%一50% >10%一20% <10% 相对离子丰度 允许的相对偏差 士20% 士25% 士30% 士50% 3.6空白试验 除不加试样外,均按上述测定条件和步骤进行
GB/35951一2018 结果计算 结果按式(1)计算,计算结果保留至小数点后两位
Cx×K X，=" n 式中: x -样品中待测组分含量,单位为微克每千克(4g/kg); 由标准曲线得出的测试液中某种组分的浓度,单位为微克每升(4g/L); 定容体积,单位为毫升(mL); K 稀释倍数; -样品质量,单位为克(g). n 回收率与精密度 阿奇霉素、竹桃霉素、红霉素,泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素在添加浓度54g/L一254g/范围内 及螺旋霉素、替米考星在添加浓度为150g/L7504g/儿范围内,回收率在85%l10%之间,相对标 准偏差小于10%
允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%
GB/T35951一2018 附 录 A 资料性附录) 8种大环内酯类抗生素测定方法检出限与定量限 8种大环内酯类抗生素测定方法检出限与定量限参见表A.1
表A.18种大环内酯类抗生素测定方法检出限与定量限 化合物 检出限/g/g 定量限/g/g 0.75 螺旋霉索 2.5 阿奇霉素 0,08 0.30 替米考星 0.75 2.5 竹桃霉素 0.01 0.04 红霉素 0.01 0.04 0.,08 0.30 泰乐菌素 克拉霉素 0.08 0.30 0.08 罗红霉素 0.30 注:检出限与定量限以取样量0,2g,定容体积1mL,进样量10Al计
GB/35951一2018 附录B 资料性附录 8种大环内酯类抗生素的药物名称英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量及结构式 8种大环内酯类抗生素的药物名称,英文名称、CAs登录号、分子式、相对分子质量及结构式参 见表B.1
表B.18种大环内酯类抗生素的药物名称、英文名称,CAS登录号、分子式、相对分子质量及结构式 相对分子 序号 药物名称 分子式 英文名称cAs登录号 结构式 质量 螺旋霉素 CaHNO 8025-81-8 843.05 Spiramyein OH OHH 阿奇霉索 Azithromyein 83905-01-5 CHN.O 748,98 替米考星 Tilicosin 108050-54-0CHN.O 869.13 OH H0 Oleandomyeinm 7060-744 CHNOP 785.85 竹桃霉素 HO O
GB/T35951一2018 表B.1续 相对分子 序号 药物名称 英文名称 CAS登录号 结构式 分子式 质量 114-07-8 CHNO 733.93 红霉素 Erythromycin 1401-69-0 泰乐菌素 Tylosin CHNO 916.10 HO Ho. 81103-11-9 CHNo 747.95 克拉霉素 Clarithramyeinl 罗红霉素 Roxithromycin80214-83-1CH%N.O 837.05
GB/35951一2018 附录 C 资料性附录 标准物质选择离子质量色谱图 8种大环内酯类抗生素标准物质选择离子质量色谱图参见图C.1
100 00 100 1O0 100 100 100 100 说明 -螺旋霉素; 阿奇霉素; 替米考星; 竹桃霉素; -红霉素 泰乐菌素; 克拉霉素; -罗红霉素
图c.18种大环内酯类抗生素标准物质选择离子质量色谱图
化妆品中螺旋霉素等8种大环内酯类抗生素的测定液相色谱-串联质谱法GB/T35951-2018
大环内酯类抗生素是一类广泛应用于医药、畜牧业和农业等领域的抗生素，其在化妆品中的应用也越来越普遍。然而，这些抗生素有可能对人体健康产生潜在风险，因此需要对其在化妆品中的含量进行测定。
GB/T35951-2018标准是我国化妆品中螺旋霉素等8种大环内酯类抗生素的测定方法标准。此标准采用液相色谱-串联质谱法进行检测，液相色谱是一种常用的分析技术，具有分离效果好、灵敏度高、重现性好等特点，而串联质谱则能够提高检测的准确性和可靠性。
GB/T35951-2018标准中液相色谱-串联质谱法测定大环内酯类抗生素的过程中，需要先将样品制备成适合分析的形式，然后使用高效液相色谱系统进行分离，最后通过串联质谱仪器对化合物进行检测和鉴定。
除了以上介绍的液相色谱-串联质谱法，还有其他方法可以用于测定大环内酯类抗生素的含量，如高效毛细管电泳法、气相色谱-质谱法等等。但是，由于不同的检测方法具有各自的优缺点，因此在实际应用中需要根据具体情况选择合适的检测方法。
总之，随着人们对化妆品安全性的要求越来越高，对其中可能存在的潜在风险也需要越来越重视。GB/T35951-2018标准提供了一种可行的方法，能够对化妆品中螺旋霉素等8种大环内酯类抗生素进行检测，有助于保障人们的健康和安全。
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