牛肝和牛肉中阿维菌素类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

牛肝和牛肉中阿维菌素类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T20748一2006 牛肝和牛肉中阿维菌素类药物 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Methodforthedeterminationofavermectinsresidues inbovineliverandmusces LC-MS-MSmethod 2007-03-01实施 2006-12-31发布 国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T20748一2006 前 言 本标准的附录A和附录B为资料性附录 本标准由秦皇岛出人境检验检疫局提出 本标准由国家质量监督检验检疫总局归口 本标准起草单位:秦皇岛出人境检验检疫局、广东出人境检验检 疫局 本标准主要起草人;庞国芳、林峰、林海丹、吴映、谢守新 本标准系首次发布的国家标准
GB/T20748一2006 牛肝和牛肉中阿维菌素类药物 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了牛肝和牛肉中伊维菌素(ivermectin)、阿维菌素(abatmectin)、多拉菌素(doramectin) 和爱普瑞菌素eprinomectin)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法 本标准适用于牛肝和牛肉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和爱普瑞菌素残留量的测定 本标准的方法检出限伊维菌素,阿维菌素、多拉菌素和爱普瑞菌素均为44g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 (GB/T6379.1一2004,Iso5725-1l:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.22004,IsO5725-2;1994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992,neqISO3696;1987) 原理 牛肝和牛肉中残留的阿维菌素类药物用乙晴提取后,用中性氧化铝柱净化,液相色谱-串联质谱 检测 试剂和材料 除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 乙睛色谱纯 4.2冰乙酸 4.3中性氧化铝Brockmann活度1级或相当者 无水硫酸钠:经650C灼烧4h,置于干燥器中备用 4.5中性氧化铝净化柱;取一空的固相萃取柱管,下部填人少量脱脂棉,装人2g中性氧化铝(4.3),上 部再填充4g无水硫酸钠,使用前装填 4.6三乙胺 4.7伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素,爱普瑞菌素标准物质;纯度>99% 4.8标准储备溶液:100g/mlL 准确称取适量的伊维菌素、阿维菌素,多拉菌素和爱普瑞菌素标准物 质,用乙睛分别配制成100g/mL的标准储备溶液,-18C贮存,爱普瑞菌素标准储备溶液可使用3个 月,伊维菌素,阿维菌素、多拉菌素储备溶液可使用1年 4.9混合标准储备溶液:0.54g/ml 准确吸取0.5mL伊维菌素,阿维菌素,多拉菌索和爱普瑞菌素 标准储备溶液至100ml容量瓶中,以乙睛稀释并定容 一18C旷存,可使用3个月
GB/T20748一2006 4.10基质混合标准工作溶液;根据需要,吸取不同体积的混合标准储备溶液(4.9),用空白样品提取液 配成不同浓度的基质混合标准工作溶液 当天配制 4.11滤膜:0.45Am 仪器和设备 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪:配有大气压化学电离源(APCI 5.2分析天平感量0.1mg和0.01g 5.3组织捣碎机. 4 5. 匀质机 5.5离心机转速大于4000; r/min 5.6超声波 5.7液体混匀器 5.8KD浓缩瓶;25mL 5.9固相萃取装置 5.10旋转蒸发器 试样的制备与保存 6.1试样的制备 取样品约500g用组织捣碎机捣碎,装人洁净容器作为试样,密封,并标明标记. 试样的保存 将试样于一18C冰箱中保存 测定步骤 7.1提取 准确称取2尽试样,精确至0.0g 置于50ml离心管中,加人sml乙肺,以800r/min均质 20s,4000r/nmin离心5min,上清液转移至50mL比色管中,另取一50mL离心管加人8mL.乙睛,洗 涤匀质刀头10s,洗涤液移人前一离心管中,用玻棒捣碎离心管中的沉淀,在液体混匀器上涡旋30s 4000r/min离心5min,上清液合并至50ml.比色管,离心管中的沉淀再加人5m乙晴,用玻棒捣碎 离心管中的沉淀,于液体混匀器上涡旋30s,4000r/min离心5min,上清液合并至50mL比色管,待净 化 7.2净化 将中性氧化铝净化柱(4.5)安置在固相萃取装置上,将上清液(7.1)小心倒人中性氧化铝净化柱中. 控制流速在1mL/min一2mL/min,待样液完全流出后,再向净化柱中加人2ml乙晴淋洗净化柱,收 集全部流出液,流出液转移至KD浓缩瓶中,于40C旋转燕发至干,用1.0ml乙晴溶解残渣,超声 0min,过0.45m滤膜(4.l1)后,供液相色谱-串联质谱测定 称取2g阴性样品,按7.1和7.2步骤制备空白样品提取液,用于配制系列基质混合标准工作 溶液 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 色谱柱:lntersilC8-3色谱柱,5pm,150mm×4.6mm(内径)或相当者; a b 柱温;40C; c 流动相甲醉十水=9十1,每1L该溶液加人1ml三乙胶; d 流速:1.0mL/" /min;
GB/T20748一2006 进样量:50Al e 7.3.2质谱条件 离子源;大气压化学电离源 aa b)扫描方式;负离子扫描 检测方式多反应监测(MRM) C d)雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体;使用前应调节各气体流 量以使质谱灵敏度达到检测要求; 喷雾电压,去簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度; e 定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞气能量见表1 表1四种阿维菌素类药物的质谱参数 采集时间 去簇电压 定性离子对 定量离子对 碰撞气能量 被测物名称 /2 /2 /ms 873,7/567.2 -28 伊维菌素 873.7/567.2 200 -44 873.7/837.5 28 871.7/565.2 -36 阿维菌素 200 -47 871.7/565.2 31 871.7/853.5 897.6/591.2 -38 多拉菌素 897.6/591.2" 200 -44 897.6/879.4 -28 -23 912.5/876.6 912.5/876.6 47 爱普瑞菌索 200 912.5/565.3 38 7.3.3液相色谱-串联质谱测定 7.3.3.1定性测定 每种被测组分选择1个母离子,2个以上子离子,在相同试验条件下,样品中待测物质的保留时间 与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的 标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,偏差不超过表2规定的范围,则可判定为样品中存在 对应的待测物 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50 10 >2050 -l020 允许的最大偏差 士2o 士25 士30 士5o 7.3.3.2定量测定 在仪器最佳工作条件下,对混合标准工作溶液进样(4.10),以峰面积为纵坐标,混合标准溶液浓度 为横坐标绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中待测物的响应值均应在仪器 测定的线性范围内 外标法定量 四种阿维菌素的标准物质的多反应监测(MRM)色谱图参见图A.1 四种阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见表B.1 平行试验 按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.5回收率试验 阴性样品中添加标准溶液,按7.17.2操作,测定后计算样品添加的回收率
GB/T20748一2006 结果计算 结果按式(1)计算: x=xxI 式中 试样中被测组分残留量.单位为散克每干克(风/kep) -从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/ml) 样品溶液最终定容体积,单位为毫升(mL), 样品溶液所代表最终试样的质量,单位为克(g) m 精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,重复性和再现性的值 以95%的可信度来计算 9.1重复性 在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,被测物的含量范围及重 复性方程见表3和表 44 表3含量范围及重复性和再现性方程(基质为肌肉 化合物名称 含量范围/4g/kg 重复性限r 再现性限R 伊维菌素 216 lgr=0.85lgm一0.506 gR=0.999lgm一0,511 阿维菌素 216 r=0.419 gR=0.865lgm一0.306 r=0,152m十0.38 -0.291 二价.s13 多拉菌素 eR 2l6 爱普瑞菌素 -16 r=0.471m lgR=0.826lgm一0.328 2一 注:m为两次测定结果的算术平均值 表4含量范围及重复性和再现性方程(基质为肝脏 化合物名称 含量范围/(4g/kg 重复性限r 再现性限R 伊维菌素 2~16 lgr=0.656lgm-0.499 R=0.184m十0.222 阿维菌素 l6 r=0,.0562m十0.390 R=0.053m十0,726 多拉菌素 216 r=0,0979m十0.236 gR=0.833lgm一0.492 =0.116m十0.293 R=0.35lm 爱普瑞菌素 216 注:m为两次测定结果的算术平均值 如果差值超过重复性限,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 9.2再现性 在再现性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,被测物的含量范围及再 现性方程见表3和表4
GB/T20748一2006 附 录 A 资料性附录 四种阿维菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图 四种阿维菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图,见图A.1 3.9 5.5 14121 800 阿维幽素 伊维岗素 600 1000 400 500 200 /min t/min 3.6 4.6 爱普瑞素 15001 122 多拉菌素 1000 800 1000 600 400 00 200 1/min /min 四种阿维菌素标准物质的多反应监测MRM)色谱图 图A.1
GB/T20748一2006 附录 B 资料性附录 收率 四种阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据,见表B.1 表B.1四种阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据(n=10 样品基质 化合物名称 添加水平/ug/kg a回收率/% 4.0 76.4 伊维菌素 8.0 72.7 16.0 92.6 4.0 80.2 96.5 阿维菌素 8.0 16.0 96.8 肌肉 4.0 78.9 多拉菌素 8.0 93.5 16.0 77.6 82.2 4.0 爱普瑞菌素 71.3 8.0 92.o 16.0 4.0 84.2 伊维菌素 8.0 85.5 16.0 87.9 79.7 阿维菌素 8.0 87.7 92.9 16,0 牛肝 79.8 多拉菌素 8.o 80.1 16.0 84.8 4.0 107.0 爱普瑞菌素 8.0 112.0 16.0 110.0