GB/T31270.13-2014
化学农药环境安全评价试验准则第13部分：类急性活动抑制试验
Testguidelinesonenvironmentalsafetyassessmentforchemicalpesticides―Part13:Daphniasp.acuteimmobilisationtest
- 中国标准分类号（CCS）B13
- 国际标准分类号（ICS）65.100
- 实施日期2015-03-11
- 文件格式PDF
- 文本页数11页
- 文件大小366.06KB
以图片形式预览化学农药环境安全评价试验准则第13部分：类急性活动抑制试验
化学农药环境安全评价试验准则第13部分：类急性活动抑制试验
国家标准 GB/T31270.13一2014 化学农药环境安全评价试验准则 第13部分:蚤类急性活动抑制试验 Testguidelinesonenvirommentalsafety assessmentforchemicalpestieides Part13:Daphniasp
acuteimobilisationtest 2014-10-10发布 2015-03-11实施 国家质量监督检监检疫总局 发布 国家标准花管理委员会国家标准
GB/I31270.13一2014 前 言 GB/T31270(化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分 -第1部分:土壤降解试验; 第2部分;水解试验; 第3部分:光解试验; 第4部分;土壤吸附/解吸试验 第5部分 :土壤淋溶试验; 第6部分:挥发性试验; 第 7部分;生物富集试验; 部分;水-沉积物系统降解试验; 第 鸟类急性毒性试验; 第 10部分:蜜蜂急性毒性试验 部分:家蚕急性毒性试验; 部分:鱼类急性毒性试验; 第 部分;蚤类急性活动抑制试验 部分:藻类生长抑制试验; 15部分;蚯蚓急性毒性试验; 第 16部分;土壤微生物毒性试验; 第 部分天敌赤眼蜂急性毒性试验， 第 17 第 18部分;天敌两栖类急性毒性试验; 第19部分:非靶标植物影响试验， 第20部分;家畜短期饲喂毒性试验 第21部分;大型甲壳类生物毒性试验 本部分是GB/T31270的第13部分 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利
本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任
本部分由农业部提出并归口 本部分负责起草单位;农业部农药检定所、环保部南京环境科学研究所 本部分主要起草人;蔡磊明,王晓军,陈丽萍、卜元卿,姜辉、王成菊,查金苗、安雪花
GB/I31270.13一2014 化学农药环境安全评价试验准则 第13部分:蚤类急性活动抑制试验 范围 GB/T31270的本部分规定了蚤类急性活动抑制试验的材料、条件、操作,质量控制、数据处理、试 验报告等的基本要求
本部分适用于为化学农药登记而进行的蚤类急性活动抑制试验,其他类型的农药可参照使用
本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药
术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
2.1 半数抑制浓度medianeffeetiveconeentration 在急性活动抑制试验中,引起50%供试生物活动受抑制时的供试物浓度,用EC'表示
注:单位为mga.i./L 2.2 活动抑制immobilisationm 轻晃试验容器,蚤在15s内不能游动视为活动抑制,但允许附肢微弱活动 2.3 供试物 testsubstance 试验中需要测试的物质
2.4 化学农药 themiealpestieide 利用化学物质人工合成的农药
其中有些以天然产品中的活性物质为母体,进行仿制、结构改造、 创新而成,为仿生合成农药
同义词,有机合成农药syntheie organiepesticide [NY/T1667.12008,定义2.3.1 2.5 原药technicalmaterial 在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品,不能含有可见的外来物质和任何添加物,必 要时可加人少量的稳定剂
[NY/T1667.2一2008,定义2.5.1] 2.6 制剂 formulationproduct 由农药原药(或母药)和助剂制成使用状态稳定的产品
[NY/T1667.2一2008,定义2.打]
GB/I31270.13一2014 有效成分 redient;a.i. activeingre 农药产品中具有生物活性的特定化学结构成分
[NY/T1667.2一2008,定义3.1 2.8 参比物质 referenceSubstanceS 在测试中为证实或否定供试物的某种特性或判断测试系统有效性而使用的化学物质或混合物
试验概述 用供试物配制一系列不同浓度的试验药液,然后将试验用蚤转移至试验药液中,连续48h观察试 验用蚤的中毒症状与活动受抑制情况,并求出48h的EC值以及95%置信限
试验方法 4.1 材料和条件 4.1.1供试生物 推荐使用大型蚤(Duphniam4gad Straus),保持良好的培养条件,使大型蚤的繁殖处于孤雌生殖 选用实验室条件下培养3代以上,出生24h内的非头胎蚤
试验用蚤应是来源于同一母系的健 状态
康涵,即未表现任何受胁迫现象(如;死亡率高、出现雄蚤和冬卵,头胎延迟、体色异常等) 4.1.2供试物 供试物应使用农药制剂,原药或纯品
对难溶于水的农药,可用少量对涵类低毒的有机溶剂助浴 有机溶剂用量一般不得超过0.1nL(g)/儿. 4.1.3参比物质 参比物质为重铬酸钾(分析纯以上)
4.1.4主要仪器设备 主要仪器设备如下 -溶解氧测定仪; pH计 水质硬度测定仪; 电子天平 移液器 玻璃或其他化学惰性材料制成的容器等
4.1.5试验用水 蚤类的培养、驯化及试验推荐使用重组水,若选择其他水应符合附录A的规定
重组水推荐使用 Iso标准稀释水、,ElendM4培养液和ElendtM7培养液,配制方法参见附录B
ElendtM4培养液和 ElendeM7培养液不能用于含有金属受试物的测试
试验期间水质应保持稳定,满足pH为6.0% 9.0. 济解氧多80mg/l
对于大型涵,水质硬度(以caco.计)为10mg/儿一250mg/L,对于其他涌类,可
GB/I31270.13一2014 适当降低水质硬度
4.1.6试验条件 试验水温18C22C,同一试验中,温度变化应控制在士1C之内;光照周期光暗比)为l6h8h， 或全黑暗条件(尤其对光不稳定的供试物)
试验期间试验容器中不应充气和调节pH,不得喂食受 试蚤
4.2试验操作 4.2. 预试验 按正式试验的条件,先将蚤类暴露于较大范围浓度系列的试验药液中48h,每一浓度放5只幼逼、 可不设重复,以确定正式试验的浓度范围
4.2.2正式试验 在预试验确定的浓度范围内按一定比例间距(几何级差应控制在2.2倍以内)设置至少5个浓度 组,并设空白对照组,如使用溶剂助溶应设溶剂对照组
每个浓度和对照均设4个重复,每个重复至少 5只试验用蚤,承载量为每只蚤不小于2mL
如果试验浓度少于5个,应在报告中给予合理解释
试 验开始后24h,48h定时观察、,记录每个容器中试验用蚤活动受抑制数和任何异常症状或表现
4.2.3限度试验 设置上限浓度100mga.i./L.,即在供试物达100mga.i./1时受试蚤抑制率不超过10%,则无需继 续试验;否则需进行正式试验
如供试物溶解度小于100mga../L,则采用最大溶解度作为上限浓度
4.2.4参比物质试验 为检验实验室的设备、条件、方法及供试生物的质量是否合乎要求,设置参比物质作方法学上的可 靠性检验
应定期(至少每季度一次)进行参比物质试验
参比物质为重铬酸钾 4.2.5操作要求 试验操作及试验过程中蚤不能离开水,转移时要用玻璃滴管 4.3数据处理 4.3.1统计分析方法的选择 可采用寇氏法、直线内插法或概率单位图解法计算每一观察时间(24h,48h)的蚤类半抑制浓度 ECa,也可采用相关统计学软件进行数据分析和计算
4.3.2寇氏法 用寇氏法可求出蚤类在24和48h的C值及95%置信限
EC的计算见式(1). ogECn=X一i(习P一0.5) 式中: X -最高浓度的对数; 相邻浓度比值的对数; 习P 各组抑制率的总和(以小数表示)
GB/I31270.13一2014 95%置信限的计算见式(2): 95%置信限=logEC士1.96SslogEC 标准误的计算见式(3): 网 SlogEC0= 3) 式中: 1个组的抑制率; lb 各浓度组蚤的数量
4.3.3直线内插法 采用线性刻度坐标,绘制抑制百分率对试验物质浓度的曲线,求出50%活动排制时的EC值
4.3.4概率单位图解法 用半对数纸,以浓度对数为横坐标、抑制百分率对应的概率单位为纵坐标绘图
将各实测值在图上 用目测法画一条相关直线,从直线中读出活动抑制50%的浓度对数,估算出C值 4.4 质量控制 质量控制条件包括 -对照组试验受抑制通数不超过10%; 试验过程中供试物浓度不低于初始浓度的80%; 在20丫条件下,参比物质重铬酸钾对大型涵的EC(24h)应处于0.6mg/L一2.1mg/儿L 之间 试验结束时对照组和试验组的溶解氧浓度不小于3.0mg/L
试验报告 试验报告至少应包括下列内容: -供试物的信息,包括供试农药的通用名、化学名称、结构式.CAs号、纯度、基本理化性质,来 源等; 供试生物的名称,来源、大小及饲养情况 -试验条件,包括水温,光照溶解氧,pH及水质硬度等， 试验药液的浓度,试验开始后24h、48h的EC值及95%置信限及中毒症状,并给出所采用 的计算方法 试验质量控制条件描述; 对蚤的毒性等级划分参见附录C
GB/I31270.13一2014 附 录A 资料性附录 合格试验用水的部分化学特性 合格试验用水的化学特性参见表A.1 表A.1合格试验用水的部分化学特性 物 质 浓 度 颗粒物 <20mg/1 总有机碳(TOC <2mg/L 游离氨 4g/1 残留氧 <10门 总有机磷农药 <501 nL 总有机氯农药与多氯联苯(PCB <50ng/I 总有机氯 25ng/I
GB/I31270.13一2014 B 附 录 资料性附录 重组水的配制 表B.1给出了Is标准稀释水的配制方法
表B.1Iso标准稀释水 贮备液(单一物质) 每升Iso标准稀释水中贮备液的加人量" ml 物质 浓度/mg/L CaCl2H.O 11760 25 25 Mgso
7H.o 4930 NaHC(O 2590 25 KCl 230 25 注配制用水为纯水,如去离子水,蒸懈水或反向渗透水,其电导率<104S/cm.
s
表B2和表B3给出了EleudM培养液和EluondM7培养液的配制方法
用去岗子水,燕溜水 或反向渗透水(以下均简称水)分别配制贮备液,贮备液I,常量营养贮备液和混合维生素贮备液
制 备ElendtM4培养液和ElendtM7培养液时,用贮备液I制备贮备液l,在使用前最后加人常量营养贮 备液和混合维生素贮备液
表B.2ElendtM4培养液和EendtM培养液的贮备液I,贮备液的配制 为制备贮备液将贮备液I 贮备液l 与ElendtM4培养液 加人到水中的量/(ml/L 浓度(mg/L 单一物质 的浓度关系 M4 M7 HBO 57190 20000倍 l.0 0.25 MnCl4H.O 7210 20000倍 .0 0.25 6120 LcClHG 倍 20000 1.0 0.25 RbC 420 20000倍 0.25 1.0 SrCl6H.O 3040 20000倍 l.0 0.25 NaBr 320 0.25 20000倍 l.0 NaMo(O2H.O 1260 1.0 0.25 20000倍 CuCl2H,(O 335 20000倍 1.0 0.25 ZnCl 260 20000倍 l.0 l.0 CoCl
6H.o 00倍 200 20 1.0 1.0 65 Kl 20000倍 1.0 1.0
GB/I31270.13一2014 表B.2(续 为制备贮备液】将贮备液1 贮备液l 与ElendtM4培养液 加人到水中的量/ml/L 浓度/mg/L 单一物质) 的浓度关系 M4 M7 43.8 20000 倍 1.0 1.0 NaSeO NHVO 11.5 20000倍 1.0 1,0 NaEEDTA2H.O 5000 2000倍 FeSO
7H.O 1991 2000倍 2LFeEDTA溶液 1000僧 20.0 5.0 注:NaEDTA和FeSO两者单独制备,混在一起后立即灭菌
表B.3ElendtM4培养液和EendtM7培养液的配制 为制备ElendtM4培养液和 ElendtM7培养液,水中 与ElendtM4培养液 组分 浓度/mg/L) 加人各组分的量/ml/1) 的浓度关系 M4 M7 2o 5o 50 贮备液 僧 CaCl2H.o 293800 1000倍 1.0 1.0 MgSO7H.O 246600 2000倍 0.5 0.5 KCI 58000 10000倍 0.1 0.1 常量营养 NaHCO 64800 1000倍 1.0 1.0 贮备液 NaSiO9H.O 5000倍 0.2 0.2 50000 单一物质 NaNO 2740 10000倍 0.l 0, KHPo 1430 10000僧 0.1 0.1 K.HPO. 184o 10000倍 0.1 0.1 混合维生素贮备液" 10000倍 0,1 0.1 注:为了避免盐沉淀,应将适量的贮备液加人到500ml~800ml水中,然后定容至1L
”混合维生素贮备液是由盐酸硫胺(维生素B、氮胺(维生素B2)和钙长石(维生素H)配制而成,浓度分别为 750 mg/L,10mg/儿和7.5" 5mg/L
混合维生素贮备液应以较小分装冷藏保存
GB/I31270.13一2014 c 附 录 资料性附录 农药对潘类毒性等级划分 按对蚤类活动的半数抑制浓度ECa(48h),将农药对蚤类的急性毒性分为四个等级,见表c.1
表c.1农药对潘类的毒性等级划分 毒性等级 ECn48h)/mga.i./L) 剧毒 EC'a0,1 高毒 0.1
GB/I31270.13一2014 参 考 文 献 [1]NY/T1667.1一2008农药登记管理术语第1部分:基本术语 2] NY/T1667.2一2008农药登记管理术语第2部分;产品化学 [幻] FAO1989).Guidelinesonenvironmentaleriteriaforthe heregistrationofpesticides.Foodand AgrielureorganiationoftheUnitedNations [4钉]OECD(2004).Guideline202:Daphnia sp.,AcutelImmobilisationTest.OECDGuideinesfor heTeingoChemieals Toxieity [5 GuidanceDocumentonAquatic TestingofDifficultSubstancesandMixtures， OECDEnvironmentalHealthandSafetyPublication.SeriesonTestingandAssessment.No.23. Paris2000. [6USEPA(1996).AquaticlnvertebrateAcuteToxicityTest,FreshwaterDAphnids(O)CSPP 850.1010).EcologicalEffectsTestGuidelines
蔡道基.农药环境毒理学研究北京;环境科学出版社,1999. [7
化学农药环境安全评价试验准则第13部分：类急性活动抑制试验GB/T31270.13-2014
类急性活动抑制试验是一种常见的环境毒理试验方法，用于评价化学物质对水生动物急性毒性的影响。而GB/T31270.13-2014则是针对这种试验方法的具体实施规范。
该标准要求实验中选用的测试生物应当符合一定的要求，如体长、体质量等，以保证实验结果的可靠性。同时还需要对实验过程中的温度、pH值等因素进行严格的控制，以避免这些因素对实验结果的影响。
在类急性活动抑制试验中，通常会将化学物质溶于水中，并将测试生物放置在其中，观察一定时间内它们的行为活动和生存情况。如有死亡或异常行为的测试生物，则需要记录下来，并根据相关标准进行分级，以评价化学物质对其的毒性。
从实验结果中可以看出，化学物质对水生生物的急性毒性主要取决于其化学结构和浓度。不同种类的测试生物也可能会出现不同的反应。因此，在进行类急性活动抑制试验时，需要对不同种类的测试生物进行不同的处理，以保证实验数据的准确性。
总的来说，类急性活动抑制试验是一种常用的评价化学物质对水生动物毒性的方法。而GB/T31270.13-2014则为这种试验提供了一定的规范，可以帮助我们更加科学地评价化学物质对环境的影响。
