植物代谢产物胰蛋白酶抑制因子测定酶联免疫吸附法

植物代谢产物胰蛋白酶抑制因子测定酶联免疫吸附法

国家标准 GB/T40368一2021 植物代谢产物胰蛋白酶抑制因子测定 酶联免疫吸附法 Determinationofkunitztrypsininhihitorofplant metabolites Enzyme-linkedimmumosorhentassay 2021-08-20发布 2022-03-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/T40368一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口 本文件起草单位;江南大学、北京工商大学北京萨姆伯科技有限公司、丽水蓝城农科检测技术有限 公司 本文件主要起草人;马爱进、国华、郝帅、刘丽强、胥欣欣、林璐、章舒祺
GB/T40368一2021 植物代谢产物胰蛋白酶抑制因子测定 酶联免疫吸附法 范围 本文件规定了植物代谢产物胰蛋白酶抑制因子的酶联免疫吸附测定方法 本文件适用于大豆及其制品中代谢产物胰蛋白酶抑制因子的测定 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 原理 样品经处理后,样液中胰蛋白酶抑制因子与微孔板中包被的胰蛋白酶抑制因子抗体(捕获抗体)结 合,洗板除去未结合的其他成分,再与胰蛋白酶抑制因子的酶标抗体结合,加酶标底物显色,用酶标仪在 50nm波长下测定吸光度值,计算胰蛋白酶抑制因子含量 试剂和材料 5 除非另有规定,本方法所用化学试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水 5.1胰蛋白酶抑制因子检测试剂盒;参见附录A 5.2胰蛋白酶抑制因子;纯度>95%,CAs号为9035-81-8 5.3应按照试剂盒说明书所述,配制所需溶液 6 仪器设备 6.1小型粉碎机 6.2分样筛;孔径0.9mm. 6.3匀浆机 6.4涡旋混合器 6.5电子天平;感量0.01g 6.6具塞离心管:15ml
GB/T40368一202 6.7 微孔板酶标仪;带450nm滤光片 6.8试剂盒所要求的仪器 样品的制备与保存 7.1固态样品 称取100g样品,用小型粉碎机进行粉碎,粉碎后的样本过孔径0.9mm分样筛 装人清洁密封容 器,并加以标识,待测 7.2半固态样品 称取100g样品,用匀浆机充分混匀后,装人清洁密封容器,加以标识,待测 7.3液态样品 称取100只样品,用涡旋混合器充分混匀后,装人清洁密封容器,并加以标识,待测 7.4样品保存 取样后应立即试验,如不能及时试验,应在一18C冰箱中冻存,且不超过2周 8 试验步骤 8.1样本前处理 称取1.00g样品,置于15mL具塞离心管中,加人试剂盒所要求提取液,按照试剂盒说明书所述方 法进行稀释和检测 8.2测定 按照酶联免疫试剂盒所述操作步骤对待测试样(液)进行定量检测 8.3平行试验 按以上步骤,对同一标准溶液、,同一样品溶液均应进行平行试验测定 8.4空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤进行 8.5阳性质控 根据待测样本中胰蛋白酶抑制因子的含量,选择一个合适的质控标准,以确定试验过程的操作准 确性 g 试验数据处理 g.1酶联免疫试剂盒定量检测的标准工作曲线绘制 按照试剂盒说明书提供的计算方法或者计算机软件,根据标准品质量浓度与吸光度变化关系绘制 标准工作曲线
GB/T40368一2021 9.2待测液浓度计算 按照试剂盒说明书提供的计算方法以及计算机软件,将待测液吸光度代人9.1所获得标准工作曲 线,计算待测液质量浓度(p). 9.3结果计算 样品中胰蛋白酶抑制因子的含量按式(1)计算 o×V×a×1000 X=" m×1000 式中: X -样品中胰蛋白酶抑制因子的含量,单位微克每千克(g/kg); -从标准工作曲线上得到的样品中胰蛋白酶抑制因子质量浓度，单位为纳克每毫升 ng/ml); -样本提取液体积,单位为毫升(mL); 在前处理过程中的稀释倍数; 试样的称样量,单位为克(e). m 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留3位有效数字 10精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20% 准确度 11 本方法供酶联免疫试剂盒测试的胰蛋白酶抑制因子溶液加标浓度为0.5ng/mL时,平均回收率为 83.0%~120.7% 当供酶联免疫试剂盒测试的胰蛋白酶抑制因子溶液加标浓度为1.0ng/mL时,平均 回收率为85.3%~111.6% 当供酶联免疫试剂盒测试的胰蛋白酶抑制因子溶液加标浓度为5.0ng/mL 时,平均回收率为93.7%~101.9% 其他 12 当称取大豆、豆粕等固态样本1.00g时,胰蛋白酶抑制因子的检出限为2004g/kg,定量限为 3004g/kg 当称取豆腐、豆乳等半固态样本1.00g时,胰蛋白酶抑制因子的检出限为204g/kg,定量 限为304g/kg 当称取豆奶,豆浆等液态样本1.00g时,胰蛋白酶抑制因子的检出限为2g/kg,定量 限为34g/kg
GB/T40368?2021 ? A ???? ???()?塣 A.1 A.2???0.01nmol/IpH7.4λ? A.3??;0.01mol/LpH7.4λ? A.4?????0ng/ml0.2ng/mL0.6ng/mL1.8ng/mL5.4ng/mL 10.8ng/m A.5?????;???-?? A.6????(10?);????á A.7? A.8???

植物代谢产物胰蛋白酶抑制因子测定酶联免疫吸附法GB/T40368-2021详解

一、引言

植物代谢产物是指植物体内经过生化反应得到的次生代谢产物，具有多种生理活性。其中，胰蛋白酶抑制因子是一类重要的代谢产物，通常用于治疗胃肠道疾病。GB/T40368-2021《植物代谢产物胰蛋白酶抑制因子测定酶联免疫吸附法》旨在规范测定这一代谢产物的方法，保障药品质量。

二、测定方法

GB/T40368-2021标准中规定了一种测定植物代谢产物胰蛋白酶抑制因子的酶联免疫吸附法。该方法具有操作简单、灵敏度高等优点，已被广泛应用于相关领域。

1. 原理

该方法利用酶联免疫吸附法原理，在微量板上固相化特异性抗体，通过样品与抗体准确结合，再加入辣根过氧化物酶标记的次生抗体，并与样品中胰蛋白酶抑制因子发生特异性反应，形成复合物。复合物在底物作用下呈现出显色反应，通过检测OD值计算样品中胰蛋白酶抑制因子的含量。

2. 操作步骤

（1）将标准品和待测样品分别加至微孔板中，加入特异性抗体固定于微孔板上；

（2）洗涤微孔板，去除非特异性结合物质；

（3）加入辣根过氧化物酶标记的次生抗体，与样品中胰蛋白酶抑制因子结合形成复合物；

（4）再次洗涤微孔板；

（5）加入底物，反应一定时间后，通过检测OD值计算样品中胰蛋白酶抑制因子的含量。

三、结果判定

根据GB/T40368-2021标准规定，对于待测样品和标准品，其OD450nm值与浓度之间呈线性关系。通过比较待测样品的OD450nm值和标准品曲线上相应浓度点的OD450nm值，可以得出待测样品中胰蛋白酶抑制因子的含量。同时，对于测定结果的可靠性和准确性，还需要考虑一些质控因素，如阳性对照品、阴性对照品等。

四、总结

GB/T40368-2021标准中涉及的植物代谢产物胰蛋白酶抑制因子测定酶联免疫吸附法是一种重要的检测方法，具有操作简单、灵敏度高等优点。在实际应用中，我们需要根据自身需求选择合适的测定方法，并严格按照标准操作，以保障药品质量和患者安全。

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