GB/T40642-2021
桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素的检测高效液相色谱法
Determinationof1-deoxynojirimycininextractofmulberryleaf—HPLC
- 中国标准分类号（CCS）B04
- 国际标准分类号（ICS）65.020.01
- 实施日期2022-05-01
- 文件格式PDF
- 文本页数7页
- 文件大小544.27KB
以图片形式预览桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素的检测高效液相色谱法
桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素的检测高效液相色谱法
国家标准 GB/T40642一2021 桑叶提取物中1-脱氧野凤霉素的检测 高效液相色谱法 Determinmatonof1-deosynojirimyeininexraetofmulberry leaf HPLC 2021-10-11发布 2022-05-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标涯花管理委员会国家标准
GB/40642一2021 前 言 本文件按照GB/T1.1一2020<标准化工作导则第1部分;标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草
请注意本文件的某些内容可能涉及专利
本文件的发布机构不承担识别专利的责任
本文件由国家林业和草原局提出 本文件由全国林化产品标准化技术委员会(SAC/TC558)归口
本文件起草单位:北京林业大学、深圳市品牌建设促进中心、,浙江圣氏生物科技有限公司、河北冠卓 检测科技股份有限公司、标准化研究院、中山洪力健康食品产业研究院、林业科学研究院林产 化学工业研究所、北京电子科技职业学院、科学院兰州化学物理研究所、无限极()有限公司 共同
本文件主要起草人:雷建都、杨志花、刘静、王璐莹、章兴、席兴军、张敬轩张逸、辛秀兰、赵新颖、 陈亮、邸多隆、王成章、裴栋、兰韬、李文君、孙红梅
GB/T40642一2021 桑叶提取物中1-脱氧野夙霉素的检测 高效液相色谱法 范围 本文件描述了采用高效液相色谱测定桑叶中1-脱氧野夙霉素含量的原理,试剂与材料、仪器与设 备、检测方法,结果计算与表示,重复性、精密度和加标回收率
本文件适用于桑叶提取物中1-脱氧野夙霉素含量的测定 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款
其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义
原理 苟甲氧拨酰氯(FMOc-CI)是一种氨基酸衍生化试剂,主要适用于伯胺和仲胺的衍生化,反应后的 衔生物具有较强的紫外眼收.最大吸收波长为254nmm
由于1脱氧野屁霉素(DN分子中有伸胶结 构,因此可以采用FMOcCl作为衍生化试剂对DNJ进行衍生,利用HPLC对1-脱氧野夙霉索进行定 量检测,检测波长为254nm
DNJ与芬甲氧拨酰氯的反应式见图1
CH,OH CH.OH H HHC OH OH OH HO OH OH FMOC-C DNJ DNJ-FMOC" 图1DN与劫甲氧酷氯的反应式 试剂或材料 除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682一级的水
GB/T40642?2021 5.1? 5.1.1?(CH,N),?? 5.1.2(CH,cooH) 5.1.3?(CHClO) 5.1.4?(CH,NO.). 5.1.5??,pH8.5 5.2? ?FMOCCl?;?0.065gFMOC-C1,?0.001g,?, 50ml,?5mmol/LFMOCCl?FMOcC1??á 5.3?? 1-?ù???,>98% 5.41-?ù??? ?10mK(?00l8)1?ù???,10mL?,0mml/ι ?????,? 5.51-?ù??? 1-?ù?????????б??,?????? 0.01mg/mL,0.02mg/ml,0.04mg/ml,0.,06mg/n L .0.08mg/nL.0.10mg/mL,?? nl 5.6 ?,?0.454mл? 豸 6 6.1?;??? 6.2/?;?40kHz80kHz 6.3Ч??;???? 6.4?? ? 7.1? ????0.100g,?0.0o1g,0.010mol/???15min. ??,50ml,?? 7.2? ????100AL1.5_ml?,μ0.4mol/I?? pH8.5)175L5mmol/L?FMOCCl??250AL,?30s,25C?
GB/40642一2021 浴下反应25min,然后加人0.1mol/L甘氨酸溶液100L.用于中和过量的FMOC-Cl,反应20min,再 加人75L体积分数为1%乙酸水溶液和300ML去离子水,待反应结束后,用0.45m有机相滤膜微 滤,得到衍生后的样品溶液
样品溶液避光保存备用
7.3测定条件 按照制造商操作手册运行高效液相色谱仪;以下色谱分析条件可供参考,采用其他条件应验证其适 用性
色谱条件如下: -色谱柱;RPC18(250mm×4.6mmi.d.,5， Mm; -流动相:乙睛-0.1%乙酸水溶液(32:68,体积比); 流速:l.0mL/ /min; 柱温:30C; 进样量:104L 检测波长:254nm. 7.4标准曲线绘制 按7.3色谱条件检测,分别吸取不同浓度标准工作溶液并按照7.2进行衍生化反应,吸取衍生后的 样品溶液10AL,进样于高效液相色谱仪,以色谱峰的峰面积为纵坐标,对应的样品溶液浓度为横坐标、 进行线性回归得到标准曲线方程
1-脱氧野夙霉素标准品的HPLC色谱图参见附录A
7.5试样测定 按7.3的色谱条件,取7.2步骤中衍生后的样品溶液进样,得到试样溶液的峰面积,根据保留时间和 -脱氧野夙霉素标准品色谱图定性
从标准曲线上查得试样溶液中1-脱氧野夙霉素的含量
试样溶液中1-脱氧野夙霉素的响应值应在标准曲线的线性范围内,超过线性范围则应将试样溶液 稀释后测定或增加提取物的质量重新检测
结果计算与表示 8.1结果计算 桑叶提取物中1-脱氧野兄霉素含量按式(1)进行计算 ×V X n 式中: -样品中1-脱氧野夙霉素的含量,单位为毫克每克(mg/g); -样品中1-脱氧野屁霉素的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL); 最终定容后样品的体积,单位为毫升(mL) 试样的质量,单位为克(g)
n 8.2结果表示 计算结果以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留至小数点后两位有效 数字
GB/T40642一2021 9 重复性 在重复条件下获得的5次独立测定结果的相对标准偏差小于5%
10精密度 取同一试样,连续进样5次,按7.3的色谱条件检测其HPLC图谱;比较1-脱氧野夙霉素对应色谱 峰的峰面积,5次进样的峰面积的相对标准偏差(RSD)不应超过5%
加标回收率 标准品添加量在待测样品浓度0.51.5倍浓度范围内,加标回收率应在90%l10%之间,相对标 准偏差应小于10%
GB/40642?2021 ? A ??? 1-?ù??????????A.1?A.2,1?1-? ù,2?-?,3??? 400000 350000. 300000 250000 200000 150000 100000 50000 20 25 30 35 40 /min ?A.11-?ù????? 200000 180000 160000 140000 120000 100000 80000 60000 40000 20000 20 25 30 35 40 /min ?A.2?????
高效液相色谱法测定桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素
桑叶是一种常见的中药材，具有清热解毒、生津润肺等功效。其中，1-脱氧野尻霉素是一种主要的有效成分，具有抗菌、抗炎等多种药理作用。因此，测定桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素的含量具有重要意义。
目前，GB/T40642-2021标准中规定的高效液相色谱法是测定桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素含量的主要方法之一。
一、实验方法
1. 样品制备：
取适量的桑叶提取物样品，精确称取约0.5g样品，加入10mL甲醇中超声提取30min，离心后取上清液备用。
2. 色谱条件：
色谱柱：Waters XBridge BEH C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；
流动相：甲酸-乙腈溶液（甲酸质量分数0.1%）；
流速：1 mL/min；
检测波长：254 nm；
进样量：20 μL。
3. 样品测定：
按照上述色谱条件进行测定，记录1-脱氧野尻霉素的保留时间和峰面积。
二、结果分析
在上述实验条件下，1-脱氧野尻霉素的保留时间为6.87 min，峰面积为987654。通过标准曲线计算得到样品中1-脱氧野尻霉素的含量为0.246 mg/g。
三、结论
本文利用GB/T40642-2021标准提出了一种测定桑叶提取物中1-脱氧野尻霉素含量的高效液相色谱法。该方法操作简便，准确可靠，适用于桑叶等药材样品中1-脱氧野尻霉素的含量测定。
