动物源性食品中头孢匹林、头孢噻呋残留量检测方法-液相色谱-质谱/质谱法

动物源性食品中头孢匹林、头孢噻呋残留量检测方法-液相色谱-质谱/质谱法

国家标准 GB/T21314一2007 动物源性食品中头饱匹林、头抱嚏佚 残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 Determinationofcephapirinandceftiofurresidues infoodstuffsofanimalorigin LC-MS/MSmethod 2007-10-29发布 2008-04-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T21314一2007 前 言 本标准附录A、附录B,附录C为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位:辽宁出人境检验检疫局、检验检疫科学研究院 本标准主要起草人:李一尘,林维宣、唐英章、田苗,彭涛、于灵、隋凯、杨春光、王宏伟 本标准为首次发布
GB/T21314一2007 动物源性食品中头抱匹林、头袍唾味 残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 范围 本标准规定了动物源性食品中头抱匹林、头抱嚷味残留量液相色谱-质谱/质谱测定和确证方法 本标准适用于动物肌肉、肝脏、肾脏、,鸡蛋和牛奶中头弛匹林(cephapirin),头袍嚷吠cefiofur)残 留量的检测 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682一1992分析实验室用水规格和试验方法(neqIsO3696;1987) 原理 样品中头抱匹林,头抱嚓吠残留物用乙晴-水溶液提取,提取液经浓缩后,用缓冲溶液溶解,固相萃 取小柱净化,洗脱液经氮气吹干后,用液相色谱-质谱/质谱测定,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682一1992规定的一级水 乙睛;高效液相色谱级 甲醇;高效液相色谱级 43 甲酸;高效液相色谱级 4 . 氯化钠 4.5氢氧化纳 4.6磷酸二氢钾 磷酸氢二钾 4.80.1nmol几氢氧化纳称取4只氢氧化钠,并用水稀释至1000mL. 4.9乙睛十水(15十2,体积比). 4.10乙睛十水(30十70,体积比) 4.11 0.05 nmol儿磷酸盐缓冲溶液(pH=8.5).称取8.7【磷酸氢二钾,超纯水溶解,稀释至 000ml,用磷酸二氢钾调节pH值至8.5士0.1 4 120.025 mol/几磷酸盐缓冲溶液(pHl=7.0)称取3.4【磷酸二氢钾，超纯水溶解，稀释至 1000mL用氢氧化钠调节pH值至7.0士0.1 4.130.01mol/儿L乙酸铵溶液(pH=4.5);称取0.77g乙酸铵,超纯水溶解,稀释至1000ml,用甲酸 调节pH值至4.5士0.1 4.14头抱匹林,头抱嚷映标准品;纯度均大于等于95% 4.15头袍匹林、头抱嚓峡标准储备溶液:分别称取适量标准品(4.14),分别用乙睛水溶液(4.10)溶解
GB/T21314一2007 定容至100nL,浴液浓度为1004g/nmlL.,置于一18C冰箱避光保存,保存期5d 4.16头抱匹林,头抱嚷吠混合标准中间液;分别吸取适量标准储备液(4.15)于100ml容量瓶中,用 磷酸盐缓冲溶液(4.12)定容至刻度,配成混合标准中间液 混合标准中间液中头袍匹林,头袍嘿的浓 度分别为100ng/mlL、5000ng/ml 置于一4C冰箱避光保存,保存期5d 4.17混合标准工作液;精密量取混合标准中间溶液(4.16)适量,用空白样品基质配制成不同浓度系 列的混合标准工作溶液(用时现配 4.18固相萃取C柱:500mg,6ml 使用前用甲醇和水预处理,即先用2ml甲醇淋洗小柱,然后用 1ml水淋洗小柱 仪器 5.1液相色谱-质谱/质谱仪配有电喷雾离子源 5.2旋转蒸发器 5.3固相翠取装置 . 离心机 5.5均质器 5. 旋涡混合器 5.了 pH计 5.8氮吹仪 试样制备与保存 取代表性样品,用组织捣碎机充分捣碎,装人洁净容器中,密封,并标明标记,于-18C以下冷冻 存放 检测步骤 7.1提取 7 1.1肝脏、肾脏肌肉组织,鸡蛋样品 称取约5只试样(精确到0.01g)于50ml离心管中,加人15mL乙睛水溶液(4.9),均质30s， 4000r/min离心5min,上清液转移至50ml离心管中;另取一离心管,加人10mL乙腊水溶液(4.9). 洗涤均质器刀头,用玻棒捣碎离心管中的沉淀,加人上述洗涤均质器刀头溶液,在旋涡混合器上振荡 1min,4000r/min离心5min,上清液合并至50mL离心管中,重复用10mL乙晴水溶液(4.9)洗涤刀 头并提取一次,上清液合并至50mL离心管中,用乙睛水溶液(4.9)定容至40mL 准确移取20mL人 100mL.鸡心瓶 7.1.2牛奶样品 称取10样品精确到0.01g)于50ml离心管中,加人20mL乙睛(4.9),均质提取30s， 40o0r/min离心5min,上请液转移至50mL离心管中,另取一离心管,加人10mL乙睛水溶液(4.9). 洗涤均质器刀头,用玻棒捣碎离心管中的沉淀,加人上述洗涤均质器刀头溶液,在旋涡混合器上振荡 】min.4000r/min离心5min,上清液合并至50mL离心管中,重复用10ml乙腊水溶液(4.9)洗涤刀 头并提取一次,上清液合并至50mL离心管中,用乙睛水溶液(4.9)定容至50mL 准确移取25mL人 100mL鸡心瓶 将鸡心瓶于旋转蒸发器上(37C水浴)蒸发除去乙腊(易起沫样品可加人4mL饱和氯化钠溶液)》 7.2净化 立即向已除去乙睛的鸡心瓶中加人25mL磷酸盐缓冲溶液(4.11),涡旋混匀1min,用0.1mol/儿L 氢氧化钠调节pH值为8.5,以1mL/ min的速度通过经过预处理的固相萃取柱,先用2mL磷酸盐缓冲
GB/T21314一2007 溶液(4.11)淋洗2次,再用1mL，超纯水淋洗 用3mL乙睛洗脱速度控制在1mL/min) 将洗脱液 于 45C下氮气吹干,用0.025mol/L磷酸盐缓冲溶液(4.12)定容至1mlL,过0.454m滤膜后,立即用 液相色谱-质谱/质谱仪测定 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 7.3.1.1 色谱柱:cOSMOSILC柱,250mm×4.6mm(内径),粒度5Am. 7.3.1.2流动相:A组分是0.01mol/L乙酸铵溶液(甲酸调pH至4.5);B组分是乙睛 梯度洗脱程 序见表1 表1梯度洗脱程序 步 骤 时间/min 流速/ml/min 组分A/% 组分B/% 0,00 1.0 98.0 2.0 3.00 98.0 2.0 90.0 10.0 5.00 l.0 15.00 1.0 30.o 70,0 20.00 1.0 98.0 2.0 7.3.1.3流速:1.0mL/min 7.3.1.4进样量:100AL 7.3. 2 质谱条件 7.3.2.1离子源;电喷雾离子源 7.3.2.2扫描方式:正离子扫描 7.3.2.3检测方式;多反应监测 7.3.2.4雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气;使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测 要求,参考条件见附录A 7.3.3液相色谱-质谱/质谱测定 根据试样中被测物的含量情况,选取响应值相近的标准工作液一起进行色谱分析 标准工作液和 待测液中头袍匹林,头袍嚷吠的响应值均应在仪器线性响应范围内 对标准工作液和样液等体积进行 测定 在上述色谱条件下头抱匹林和头抱嚷吠的参考保留时间分别约为12.2min,、,13.0min 标准溶 液的选择性离子流图见图B,1 7.3.4定性测定 按照上述条件测定样品和建立标准工作曲线,如果样品中化合物质量色谱峰的保留时间与标准溶 液相比在士2.5%的允许偏差之内;待测化合物的定性离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于3 (S/N>3),定量离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于10(s/N>10);定性离子对的相对丰度 与浓度相当的标准溶液相比,相对丰度偏差不超过表2的规定,则可判断样品中存在相应的目标化 合物 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%50% >l0%20% 10% 允许的相对偏差 士20% 士25% 士30% 士50% 定量测定 按外标法使用标准工作曲线进行定量测定 7.3.6空白试验 除不加试样外,均按上述操作步骤进行
GB/T21314一2007 结果计算与表述 用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中头抱匹林,头抱嚷吠的残留量,计算结果需扣除空白值 cxx1000 (1 X一 m×l000 式中: -试样中头抱匹林,头抱嚓肤残留量.单位为微克每干克(g区/Ake) 从标准曲线上得到的头抱匹林,头抱嚷吠溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); V 样液最终定容体积,单位为毫升(mL); 最终样液代表的试样质量,单位为克(g) mn 测定低限与回收率 9.1测定低限(L0Q 头抱匹林为14g/kg,头抱嚷吠为50ug/kg 9.2回收率 见表C.1
GB/T21314一2007 附 录A 资料性附录 质谱/质谱测定参考质谱条件" 质谱/质谱测定参考质谱条件 心 a)电喷雾电压(IS)5500 雾化气压力(GS1):0.414MPa(60Psi); b) e)气帘气压力(cUR):0.207MPa(30Psi); d)辅助气压力(GS2);0.621MPa(90Psi); e)离子源温度(TEM):700C; 头袍匹林,头袍嚓吠的定性离子对,定量离子对、去簇电压(DP),碰撞气能量(CE)及碰撞室出 口电压(CXP)见表A.1 表A.1 头抱匹林,头抱嚷肤的定性离子对定量离子对,去簇电压、碰撞气能量和碰撞室出口电压 碰撞气 碰撞室出口 定性 定量 去簇电压 离子对 称 离子对 DP) 能量(CE) 电压(CXP)/ m/z mm/z 424.3/292.l 33 l0 55 头袍匹林 424.3/292.l 19 10 424.3/152.0 523.9/241.2 25 15 60 头袍嚷吠 523.9/241.2 523.9/210.1 30 15 1所列参数是在API4000质谱仪完成的,此处列出的实验用仪器型号仅是为了提供参考,并不涉及商业目的,鼓励 标准使用者尝试不同型号的仪器
GB/T21314一2007 附 录 B 资料性附录 头抱匹林,头抱嚏肤标准品的定量离子对重构离子色谱图 12.25 姆 B55 5 6？ 1o1112131415161718 min 13.04 1.00e51 9.0045 8.00e4 70wo .0Oe o' .00ef 4.00e4 3.00e4 2.00e4 .00e4 0.0 3 T45678 9 12 Im, 图B.1头抱匹林,头抱嚷肤标准品的定量离子对重构离子色谱图
GB/T21314一2007 c 附 录 资料性附录 添加回收率 表c.1头袍匹林,头抱嚏吠添加回收率 回收率/% 添加浓度 待测物质 g/kg 猪肉 猪肝 猪肾 鸡蛋 牛奶 86.192.7 69.278.5 69.290.6 75.391.l1 73.390,0 头袍匹林 10 62.280.6 62.871.6 70.591.0 72.588.1 79，493.5 100 66,578.7" 71.686.5 77.188,6 72.5~90.2 68.l864 78.3~85.2 74.682.3 68.785.9 75.2~91.3 72.590.8 50 头抱嚓吠 500 72.487.0 66.881.7 65.2~93.1 65,7~90,9 76.185." 2000 70.983. 73.888.2 68.8~80.7 78.086.8 73.0~92.