饲料中蓖麻碱的测定高效液相色谱法

饲料中蓖麻碱的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T23883一2009 饲料中蓖麻碱的测定 高效液相色谱法 Determinationofricinineinfeeds- Highperformaneeliquidchromatography 2009-05-26发布 2009-10-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23883一2009 饲料中蓖麻碱的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定饲料中莲麻碱(化学名为3氮基-4甲氧基-N甲基2毗唁 分子式为CH,N.O,摩尔质量为164.16g/mol)的方法 本标准适用于菌麻粕、配合饲料和浓缩饲料中蓖麻碱的测定 本法的检测限为5nmg/k 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 G;B/T20195动物饲料试样的制备 原理 用甲醉提取试样中蓖麻喊,经圆相摹取净化,高效液相色谱分离,紫外检测,外标法定量 试剂和溶液 除特殊注明外,本标准所用试剂均为分析纯,水符合GB/T6682二级用水规定 4.1无水甲醇 4. 2 乙睛 色谱纯 4.31%体积分数)氨水溶液 移取1.0mL浓氨水溶液于100.0ml容量瓶中,用水定容至刻度 4.430%体积分数)的甲醇溶液 移取30mL甲醇于100.0ml容量瓶中,用水定容至刻度 4.5蓖麻碱标准品 纯度大于99% 4.6菌麻碱标准溶液 4.6.1菌麻碱标准储备液;称取菌麻碱标准晶适量,用甲醇溶解,配制成浓度为1.00mg/mL标准储备 液,于一18C条件下储存 有效期为6个月 4.6.2蓖麻碱标准工作液I:用甲醇逐次稀释蓖麻碱标准储备液至最终浓度分别为5.0g/ml 104g/mL、20g/mL,30ug/m和404g/mL的标准工作液 有效期为30d 4.6.3菌麻碱标准工作液l;用30%甲醇(4.4)逐次稀释储备液至最终浓度分别为0.5g/mL、 2.04g/ml5.04g/mlL104g/m和204g/mL的标准工作液 有效期为30d. 仪器与设备 5.1分析天平:感量为0.0001g
GB/T23883一2009 5.2离心机:转速大于30001 r/min 5.3恒温水浴 5.4涡旋振荡器 5.5 定量滤纸 5. 6 固相萃取小柱;亲水亲油平衡型聚合物填料,30mg,lmL,或性能相当者 5.7固相萃取装置 5.8氮吹仪 5.9高效液相色谱仪;配有紫外检测器 试样制备 按照GB/T20195的规定制备试样,粉碎过孔径0.45mm目筛,充分混匀,装瓶,备用 测定步骤 提取 准确称取笔麻粕试样0.5g(精确至0.0001因)或饲料试样5g(精确至0.0o1因)于50mL带螺口离 心管中,加20mlL甲醇,拧紧盖子,于75C水浴中提取4h(约每30min取出于涡旋振荡器上振荡 30s) 取出于离心机上以3000r/min离心10min,将上层清液通过带有定量滤纸的50mL漏斗过滤 于50mL容量瓶中,残渣再分别用20mL和10mL甲醇按上述方法提取10min,离心,合并提取液,最 后用无水甲醇定容至刻度 对于菌麻粕柏试样,取上述提取液过0.45pm滤膜,可直接上机测定;饲料试样提取液则需作进一步 净化处理 7.2净化 移取提取液(7.1)2.00ml于10ml试管中,于氮气吹干仪上吹干,加人2.00ml氨水溶液(4.3). 于涡旋振荡器上振荡30s 将固相萃取柱(5.6)置于固相萃取装置上,依次用1.0mL甲醇和1.0ml水活化;加载1.00mL该 试样溶液,控制流速不超过1.0ml/min;用1.0ml水淋洗小柱,抽干1lmin;最后用1.00ml30%的甲 醉(4.4)洗脱,加压,完全收集洗脱液到进样瓶中 7.3测定 色谱条件 7.3.1 色谱柱:C填料,长150mm,内径3.9mm,粒度5pm,或相当者 流动相;乙晴十水=10十90 流速:l.0ml/min 进样体积:20AL 检测波长;308nm. 7.3.2定量方法 使用蓖麻碱标准工作液I(4.6.2),以峰面积对浓度的工作曲线,对蓖麻粕样品进行外标法定量;同 样使用麻碱标准工作液I(4.6.3),以峰面积对浓度的工作曲线,对饲料样品进行外标法定量 蓖麻 碱标准品的色谐图参见附录A 结果计算 试样中麻碱质量分数w(mg/kg)按式(1)计算
GB/T23883一2009 c×V (1 w= 7 式中: -为根据工作准曲线计算的上机试样溶液蕙麻碱浓度,单位为微克每毫升(4g/ml) 为提取溶液体积,单位为毫升(mL) 为试样质量,单位为克(g) 2m 测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字 重复性 在重复性条件下,完成两次平行测定结果的相对偏差不大于10%
GB/T23883一2009 附录 A 资料性附录 蓖麻碱标准品的色谱图 蓖麻碱标准品的色谱图如图A.1所示 AU5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0 工 2.00 6.00 8.00 10.00 1/min 图A.1蓖麻碱标准品的色谱图