蜂蜜中甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的测定方法液相色谱法

蜂蜜中甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的测定方法液相色谱法

国家标准 GB/T18932.26一2005 蜂蜜中甲硝哒陛、洛硝哒陛、二甲硝咪陛 残留量的测定方法 液相色谱法 Methodforthedeterminationofmmetronidazole，ronidazoleand dimmetridazoleresiduesinhoney Liquidchrommatographicmethod 2005-02-04发布 2005-08-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T18932.26一2005 蜂蜜中甲硝哒、洛硝哒陛、二甲硝咪陛 残留量的测定方法 液相色谱法 范围 GB/T18932的本部分规定了蜂蜜中甲硝哒陛、洛硝哒幽、二甲硝咪幽残留量的液相色谱测定 方法 本部分适用于蜂蜜中甲硝哒陛、洛硝哒陛、二甲硝咪陛残留量的测定 本部分的方法检出限甲硝哒陛、洛硝哒陛、二甲硝咪哗均为0.010mg/lkg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款 凡是注日期的引用文 件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本 部分 G;B/T6379测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性 GB/T63791986 5,neqISsO57251981 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992,neqISO3696;1987) 原理 试样中硝基咪陛类药物残留用乙酸乙酯提取,提取液蒸干后,用水溶解,经过OasisHLB固相萃取 柱和BAKERBONDCarboxylicAcid固相萃取柱净化,液相色谱仪紫外检测器测定,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 4.1甲醉;色谱纯 4.2乙睛:色谱纯 4.3乙酸乙酯;色谱纯 无水乙酸钠;分析纯 4.5冰乙酸;优级纯 4.6甲醇十水(5十95):量取5ml甲醇与95ml水混合 乙酸盐缓冲溶液.0.82g/儿L 称取0.82【无水乙酸钠,用800ml水溶解,用冰乙酸调节pH至 4.3,用水稀释至1L 4.8洗脱剂:甲醉十乙睛十乙酸盐缓冲溶液(40十6十54). OasisHLB固相萃取柱或相当者500mg,6mL 使用前分别用5mL甲醇和10ml水预处理， 保持柱体湿润 4.10BAKERBoNDCarboxylieAeid固相翠取柱或相当者;500mg,3ml 使用前用5ml乙酸乙雕 预处理,保持柱体湿润
GB/T18932.26一2005 4.11甲硝哒陛、洛硝哒陛、二甲硝咪陛标准物质:纯度>98% 4.12甲硝哒陛、洛硝哒陛、二甲硝咪幽标准储备溶液;1.0mg/ml 准确称取适量的甲硝哒陛、洛硝 哒幽,二甲硝咪幽标准物质,分别用甲醇配成1.0mg/mL的标准储备液 储备液可在温度低于4C冰 箱中保存二个月 4.13甲硝哒陛、洛硝哒陛、二甲硝咪陛混合标准工作溶液;根据需要吸取适量甲硝哒陛、洛硝哒陛、二 甲硝咪哗标准储备溶液,用流动相稀释成适当浓度的混合标准工作溶液,混合标准工作溶液应现用 现配 仪器 5.1液相色谱仪;配有紫外检测器 5.2分析天平:感量0.1mg和0.01g各一台 5.3液体混匀器 5.4固相萃取真空装置 5.5振荡器 5.6具塞玻聘离心管;0mL s 真空泵:真空度应达到80kPa 5.8离心机 5.9旋转蒸发器 5. .10样品管;5m 5. 11 pH计测量稍度士0.02. 5. 12梨形瓶:;200ml 试样的制备与保存 试样的制备 对无结晶的实验室样品,将其搅拌均匀 对有结晶的样品,在密闭情况下,置于不超过60C的水浴 中温热,振荡,待样品全部融化后搅匀,迅速冷却至室温 分出0.5kg作为试样 制备好的试样置于样 品瓶中,密封,并做上标记 2 6. 试样保存 将试样于常温下保存 测定步骤 提取 称取6g试样(精确到0.01g)置于50ml具塞玻璃离心管中,加人6ml.水,在液体混匀器上混 匀,加20mL乙酸乙酯,于振荡器上振荡20min,离心取上清液至梨形瓶中 再用20ml乙酸乙酯提 取一次,合并上清液,用旋转蒸发器于45C水浴上减压蒸发至干,用5m水溶解,待净化 7.2净化 将上述5mL水溶液移至OasisHLB柱中,以小于等于3mL/min的流速通过Oasis固相萃取柱 后,用5ml水洗涤梨形瓶,移至OasisHLB柱中洗柱,再用5ml甲醇十水(4.6)洗柱,弃去全部流出 液 在65kPa的负压下,减压抽干20min,将OasisHLB柱下接CarboxylieAcid固相萃取柱,用51 m 乙酸乙酯以小于等于3mL/min的流速洗脱OasisHLB柱并通过CarboxylicAcid固相萃取柱,弃去 osisB柱,分别用5ml乙酸乙酯和5ml乙腊洗涤CarbosylieAcid固相摹取柱,弃去全部流出 液 在65kPa的负压下,减压抽干5min,用2mL洗脱剂(4.8)洗脱,收集洗脱液于5mL样品管中,用
GB/T18932.26一2005 洗脱剂定容至2mL,供液相色谱仪测定 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 a色谱柱:DiamonsilC8,5m,250mm n×4.6mm(内径)或相当者; b流动相:乙腊十乙酸盐缓冲溶液(10十90); 流速:1.0mL/min; o d柱温;25C; 进样量:50AL; e f 检测波长:315 nm 7.3.2液相色谱测定 用甲硝哒陛、洛硝哒陛、二甲硝咪坐混合标准溶液分别进样,以峰面积为纵坐标,工作溶液浓度为横 坐标绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中甲硝哒陛洛硝哒陛、二甲硝咪哗 的响应值均应在仪器测定的线性范围内 甲硝哒陛、洛硝哒陛、二甲硝咪陛标准物质色谱图参见 图A.1.在上述色谱条件下,甲硝哒哗、洛硝哒哗、二甲硝咪陛的参考保留时间见表1 表1甲硝哒陛洛硝哒陛、二甲硝咪呸的参考保留时间 硝基眯陛类药物名称 保留时间 /min 12.7 甲硝哒哗 洛硝哒哗 15.0 二甲硝咪畔 21.2 本方法的添加回收率数据参见附录B 平行试验 按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定 7.5空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤同时完成空白试验 结果计算 结果按式(1)计算 1000 Y X=c 1000 式中: 试样中被测组分残留量,单位为毫克每千克(mg/kg). -从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度,单位为微克每毫升(ug/mL) 样品溶液最终定容体积,单位为毫升(mL); 样品溶液所代表最终试样的质量,单位为克(g) 7 注:计算结果应扣除空白值 精密度 本部分的精密度数据是按照GB/T6379的规定确定的,重复性和再现性的值以95%的可信度来 计算 9.1重复性 在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(r),蜂蜜中甲硝哒陛、洛硝 哒陛、二甲硝咪陛含量范围及重复性方程见表2.
GB/T18932.26一2005 表2含量范围及重复性和再现性方程 称 含量范围/mg/kg 重复性限r 再现性R 甲硝哒哗 0.0100.100 "=0.0303m十2.1673 R=0.0807m十l.0408 洛硝哒陛 广=0.0608m十1.8727 R=0.0620m十1.7190 0.0100.100 0.o100.100 r=0.0627m十1.4411l 二甲硝咪必 gR=0.7099lg从一0.437？" 注，"为两次测定结果的算术平均值 如果差值超过重复性限,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 9.2再现性 在再现性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R),蜂蜜中甲硝哒陛、洛 硝哒陛,二甲硝咪陛的含量范围及再现性方程见表2
GB/T18932.26?2005 ? A ?? ??? ?????????A.1 0.00100 0.00095 0.0009 D.00086 0.0008 D.00076 0.0006 .0006i I 0,0005 0.00050 0.0004 0,00040 0.0003 0.00030 0.00025 0.00020 0.00015 OI 0.00005 0.0000 -0.00005 -0.00010 2.00 4.00 6.00 8.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.00 1/min ?A.1????????
GB/T18932.26一2005 附录 资料性附录 回 收 率 本方法中甲硝哒陛、洛硝哒陛、二甲硝眯陛添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1 表B.1甲硝哒陛,洛硝哒陛、二甲硝咪陛添加浓度及其平均回收率的试验数据 药物名称 添加浓度/mg/kg) 平均回收率/(% 0.010 86.27 0.020 87.13 甲硝哒必 0.050 87.35 0.100 86.33 0,010 84.64 0.020 89.38 洛硝哒陛 0,050 82.87 0.100 87.99 0.010 85.96 0.020 84.86 二甲硝眯陛 0.050 90.70 0.100 88.61