禽蛋中胆固醇含量的测定酶法

禽蛋中胆固醇含量的测定酶法

国家标准 GB/T37077一2018 禽蛋中胆固醇含量的测定酶法 Determinationofecholesterolineggs一Enzymatiemethod 2018-12-28发布 2019-07-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/37077一2018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由农业农村部提出 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC274)归口 本标准起草单位:农业农村部家禽品质监督检验测试中心(扬州、农业科学院家禽研究所 本标准主要起草人:高玉时、葛庆联、马丽娜、唐修君、陈大伟、刘菌茵、张静、张小燕、蒲俊华、 唐梦君、樊艳凤、顾荣
GB/37077一2018 禽蛋中胆固醇含量的测定酶法 范围 本标准规定了酶法测定禽蛋中胆固醇含量的方法 本标准适用于鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鸽蛋、鹌鹑蛋等鲜禽蛋 本标准方法检出限为1mg/100g,定量限为3mg/100g 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注目期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 原理 胆固醇酯在胆固醉酯酶作用下水解为游离胆固醇和脂肪酸,胆固醇在胆固醇氧化酶作用下,生成 4-胆笛烯酮和H.o.,H.o在4-氨基安替比林及苯酚参与下,经过氧化物酶作用,生成红色醒亚胶 在波长505nm处测定样品吸光度,醒亚胶吸光度与样品中胆固醉含量成正比 根据其吸光度与标准 曲线比较或由标准曲线回归方程计算样品中胆固醇含量 试剂或材料 除非另有说明,本标准所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水 4.1甲醇(CH.OH. 4.2乙醒(cC,H,O). 4.3无水乙醇(CH,O). 44氢氧化钾(KOH) 44.5 氯化钠(NaCI 4.6 胆固醇酯酶(EC3.1.1.13):来源于微生物(如假单胞菌属、念珠菌属),葡萄糖氧化酶与尿酸酶含量 小于0.01%,不含过氧化氢酶,比活性约100kU/g酶蛋白(25C,胆固醉油酸酯为底物) 4.7胆固醇氧化酶(EC1.1.1.6):来源于微生物如诺卡氏菌,球抱链霉菌),葡萄糖氧化酶与尿酸酶含 量小于0.01%,不含过氧化氢酶,比活性约45kU/g酶蛋白(37,胆固醇为底物). 4.8过氧化物酶(EC1.l1.1.9);来源于辣根,纯度值(Reinheitszahl比值,A8mm/A7nm)约为3.0,比活 性1000kU/g酶蛋白[25,2,2'-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢嚷陛琳-6-碱酸)ABTS)为底物] 4.9胆固醉(CgHO,CAs号;57-88-5);纯度>99% 4.10氢氧化钾溶液(600g/L);称取600g氢氧化钾,加水溶解并定容至1000mL,摇匀 4.11氧化钠溶液(50g/L):称取50g氯化钠,加水溶解并定容至1000ml,摇匀 4.12磷酸氢二钠溶液(0.3mol/L);称取107.4g磷酸氢二钠(NaHPO12H.O),加水溶解并定容 至1000mL,摇匀
GB/T37077一2018 4.13磷酸二氢钠溶液(0.3mol/L);称取46.8g磷酸二氢钠(NaH,PO2H,O),加水溶解并定容至 10001 mL,摇匀 4.14磷酸盐缓冲溶液(0.3mol/L):量取89.6mL磷酸氢二钠溶液(4.12)和10.5m磷酸二氢钠溶液 4.13),混匀,必要时用盐酸溶液或氨水溶液调节pH值至7.7士0.02 4.15显色剂:取80U/L~100U/L的胆固醇酯酶,40U/L一60U/L的胆固醇氧化酶、1000U/L 500U/L的过氧化物酶、172.0mg胆酸钠(CHNaO)、10.2mg4-氨基安替比林(CHN,O) 33.0mg苯盼(CH,OH,300.0g聚乙二醇辛基苯基腿(TritonX-100)置于100mL 的容量瓶中,用 0.3mol/L磷酸盐缓冲溶液(4.14)稀释至刻度 临用时配制 4.16胆固醉标准储备液(2.0mg/mL);准确称取200.0mg胆固醇,加无水乙醇溶解并定容至100ml 摇匀 置于4C冰箱中,有效期6个月 4.17胆固醇标准系列工作液;分别吸取胆固醇标准储备液(4,.16)0.0mL,2.0mL、4.0ml,6.0ml 8.0ml、,10.0ml,用无水乙醇定容至10nmL,该标准系列工作液的浓度分别为0.0mg/ml 0.4mg/mL,0.8mg/mL、1.2mg/mL、1.6mg/mL,2.0mg/mL 现用现配 5 仪器设备 5.1天平;感量为0.1mg 5.2匀浆机 5.3电热恒温水浴锅 5.4涡旋混匀器 5.5 旋转蒸发仪 5.6分光光度计 6 样品 6.1全蛋样品 取2个一3个样品,鸽蛋等小蛋可适当增加样品数量,去壳,将全蛋于匀浆机充分混匀,储于请洁容 器中,作为全蛋样品 6.2蛋黄样品 取2个3个样品,鸽蛋等小蛋可适当增加样品数量,去壳和蛋清,用滤纸吸干蛋黄表面的蛋清,将 蛋黄于匀浆机充分混匀,储于清洁容器中,作为蛋黄样品 试验步骤 7.1胆固醇标准曲线的制作 分别取60AL胆固醇标准系列工作液(4.17)和3.0ml显色剂(4.15),混匀后置于37水浴中反 应15min,取出冷却至室温 在波长505nm处,测定吸光度 以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标制作 标准曲线 7.2皂化 称取2.00g全蛋样品或1.00g蛋黄样品,精确到0.lmg,于50mL烧杯中,加人10ml.氢氧化钾溶
GB/37077一2018 液(4.10)和20mL甲醇,摇匀,65C水浴保温1h 每隔20min 130nmin振摇一次使皂化完全 7.3提取 皂化完毕取出烧杯,冷却至室温,加水20mL,转移至125ml分液漏斗中,用乙隧萃取三次,每次 5ml,振摇,静置分层后,收集三次乙腿萃取液于另一125ml分液漏斗中,加人3ml氯化钠溶液 4.1l),水洗乙醛层至中性 7.4浓缩 将水洗后的乙醒萃取液转移至100ml鸡心瓶中,50笔水浴旋转蒸发浓缩至近干,用无水乙醇溶解 并定容至10mL,作为待分析样液 7.5样品测定 取60AL待分析样液和3.,0ml显色剂,混匀后置于37水浴中反应15min,取出冷却至室温 在波长505nm处,测定吸光度 不同样品的前处理需要同时做空白试验 试验数据处理 样品中胆固醇含量以质量分数X计,数值以毫克每100克(mg/100g)表示,按式(1)计算 p×V×100 X m 式中: 由标准曲线查得或回归方程计算待分析样液中胆固醇浓度的准确数值,单位为毫克每毫升 mg/mL); 待分析样液定容体积的数值(通常为10mL),单位为毫升(mL); 样品质量的数值,单位为克(g) m 计算结果表示到小数点后一位 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%

禽蛋中胆固醇含量的测定酶法GB/T37077-2018详解

禽蛋是人们日常生活中常见的食品之一，它富含蛋白质、维生素等营养成分，对人体有很好的补充作用。然而，禽蛋中的胆固醇含量却是制约其食用量的一个重要因素。

为了保障人们的健康，国家标准化管理委员会发布了《禽蛋中胆固醇含量的测定 酶法》（GB/T37077-2018）标准，明确了禽蛋中胆固醇含量的测定方法和技术要求，以便于监管部门对禽蛋产品的质量进行检验和监测。

该标准主要采用酶法测定禽蛋中的胆固醇含量，具有操作简单、精度高等优点。具体测定方法包括样品处理、试剂配制、反应过程、计算结果等步骤。其中，样品处理是指将禽蛋中的胆固醇提取出来，并进行适当的稀释；试剂配制是指按照一定比例将试剂配制好，以备后续使用；反应过程是指将配制好的试剂加入到禽蛋样品中，经过一定时间的反应后，使用分光光度计测定吸光度值；计算结果是指根据吸光度值计算出禽蛋中的胆固醇含量。

该标准要求禽蛋中胆固醇含量的测定结果应具有较高的精确性和可重复性，并且需要对实验室环境、设备条件等因素进行控制和调整，以保证测定结果的准确性。同时，标准还规定了禽蛋样品的选择、保存和运输等方面的技术要求，以避免样品污染或变质导致测定结果失真。

总之，禽蛋中胆固醇含量的测定酶法GB/T37077-2018标准在食品安全领域中起着至关重要的作用。该标准的制定和执行能够提高禽蛋产品的质量和安全性，保障人们的健康。我们也应当增强食品安全意识，选择优质、安全的禽蛋产品，促进健康生活。

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