水产饲料安全性评价残留和蓄积试验规程

水产饲料安全性评价残留和蓄积试验规程

国家标准 GB/T23388一2009 水产饲料安全性评价 残留和蓄积试验规程 Prineipleofaquafteedsaftetyevaluation一Residueamdcumulatontest 2009-03-26发布 2009-07-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23388一2009 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC'/TC76)提出并归口 本标准起草单位;农业科学院饲料研究所、国家水产饲料安全评价基地 本标准主要起草人:刘海燕、薛敏、吴秀峰、郑银桦
GB/T23388一2009 水产饲料安全性评价 残留和蓄积试验规程 范围 本标准规定了水产饲料安全性评价残留和蓄积试验规程的基本技术要求 本标准适用于水产动物使用的配合饲料,单一饲料及饲料添加剂的安全性评价,不包括饲料药物添 加剂 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法 GB11607渔业水质标准 GB13078饲料卫生标准 GB/T22487水产饲料安全性评价急性毒性试验规程 GB/T22488水产饲料安全性评价亚急性毒性试验规程 GB/T23186水产饲料安全性评价慢性毒性试验规程 NY5072无公害食品渔用配合饲料安全限量 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 3.1 靶器官 targeorgan 试验动物出现由受试物引起的明显毒性作用的任何器官 3.2 残留residue 动物接触受试物后,残存于动物体内的受试物及其在性质上和数量上有毒理学意义的代谢(或降 解、转化)产物 3.3 蓄积cumulation 低于一次中毒剂量的受试物,反复与动物接触一段时间后致使机体出现的中毒反应 在本规程巾 是指动物反复多次从饲料中摄取、吸收、排出受试物的过程 当摄人大于排出时,受试物及其代谢产物 就可能在机体内逐渐增加并蓄积,即蓄积生效;当摄人等于排出时,受试物及其代谢产物积累达到平衡 当摄人小于排出时,受试物及其代谢产物在动物体内减少并清除 蓄积系数bioaceumulatiofaetor BCF 动物从饲料中吸收受试物并在靶器官中积累毒物浓度达到动态平衡,生物体内的毒物浓度与饲料
GB/T23388一2009 中该毒物浓度的比值 BCF c 式中: 稳态平衡时毒物浓度(高峰浓度); c 饲料中该毒物浓度 C 3. 5 吸收相absorptionduration 从开始摄人到受试物和(或)有毒代谢物在试验动物蓄积靶器官中蓄积生效的时间过程 3.6 平衡相eonterbalaneeduraton 受试物和(或)有毒代谢物在试验动物蓄积靶器官中蓄积达到稳态平衡浓度(高峰浓度),并持续一 定时间 消除相eliminatondurationm 停喂期中,受试物和(或)有毒代谢物在试验动物蓄积靶器官中从稳态平衡浓度(高峰浓度)逐步消 除至国际及国内相关标准规定的最高残留限量(maximumresidulelevel,MRLs)所需要的时间 如受 试物和(或)有毒代谢物尚无相关MRLs值,则以消除至高峰浓度的1/10~1/20所需要的时间为准 3.8 时间-浓度曲线time-oncentrationceurve C-t 受试物在试验动物体内是不断地吸收、分布、转化和排泄的,受试物和(或)有毒代谢物在试验动物 蓄积粑器官中可能存在残留和蓄积作用 其浓度随着时间的推移也不断发生着变化,这种变化以蓄积 浓度(C)为纵坐标,以时间(t)为横坐标绘出曲线图,称为时间-浓度曲线 包括吸收相、平衡相和消 除相 3.9 剂量-浓度曲线dose-coneentrationcurve C-d 受试物和(或)有毒代谢物在试验动物蓄积靶器官中蓄积浓度随着饲喂剂量变化的规律,以蓄积浓 度(C)为纵坐标,以剂量为横坐标绘出曲线图,称为剂量-浓度曲线 3.10 半衰期halrlife 通常是指消除半衰期 即指受试物在试验动物蓄积靶器官中从高峰浓度下降一半所需的时间 3.11 流水养殖系统 fow-throughsystem 来自系统外的养殖用水连续或间歇地流经养殖容器的养殖系统 原理 若受试物和(或)有毒代谢物包括中间代谢产物、降解产物和其他结合物)在水产动物机体中产生 残留或蓄积,并对水产动物、环境和人类食用安全造成潜在毒性,则应对试验水产动物肌肉、代谢器官 肝脏和肾脏)和其他蓄积靶器官中来源于受试物的有毒有害成分的残留物进行检测,揭示受试物和
GB/T23388一2009 或)有毒代谢物在试验水产动物中的代谢和消解规律,为受试物的安全限量及停喂期的确定提供参考 依据 试验动物 选择依据GB/T22487所筛选的对受试物敏感的水产动物作为试验动物,试验动物选用种属来源 明确、健康、规格整齐的同批苗种 原则要同GB/T22488和GB/T23186一致 正式试验前应有2周 的驯养期,驯养期内如果动物死亡率高于l0%,则淘汰该批苗种 驯养期结束后应淘汰由于驯养造成 的质量差异的个体,保留健康活泼的水产动物继续作为试验动物 剂量与分组 剂量设计参考的原则 6.1.1原则上高剂量组的动物在饲喂受试物期间应当出现明显中毒反应,低剂量组不出现中毒反应 在此二剂量间再设2个及2个以上剂量组,以期获得比较明确的剂量-反应关系 对能或不能求出经口 或注射LD的受试物分别进行规定 6.1.2能求出经口或注射LD,的受试物以经口服或注射LD,的10%25%作为残留和蓄积毒性试 验的最高剂鼠组,此ID百分比的选择主要参考In,剂量反应曲线的斜率 然后在此剂量下设几个剂 量组,最低剂量组至少是试验水产动物可能摄人量的3倍 6.1.3对于不能求出经口或注射LD.的受试物:残留和蓄积毒性试验应尽可能涵盖试验水产动物可 能摄人量100倍的剂量组 对于试验水产动物摄人量较大的受试物,高剂量可以按在饲料中的最大掺 人量进行设计 6.2分组 至少应设4个剂量组和一个对照组 受试物如果为配合饲料,首先明确目标毒性物质,直接饲喂 不设剂量组,需要另外设计对照组 每组不少于6个重复,每个重复的试验水产动物个体数量需依据吸 收相、平衡相及消除相的预试验结果估算,但不能少于50个个体 操作步骤 7.1受试物的处理 将受试物粉碎至所要求的粒度(全部通过筛孔0.28mm分样筛或更高细度),粒度的测定方法符合 GB/T5917.1 根据受试物试验剂量的设计,把受试物添加到试验水产动物的配合饲料中,液体受试物 按照试验剂量直接添加到其他原料的混合物中 充分混合,适当加工,制成营养组成、适口性、水稳定 性、粒径等特性都符合试验目的和试验水产动物要求的试验饲料,减少受试物以外的因素对试验动物的 影响 受试配合饲料直接饲喂 对某一种受试物进行评价时,要考虑到饲料配方中是否存在其他拮抗 或协同作用的成分 在确定配方前分析相关原料常规营养成分,并分析其卫生指标,结果应符合 GB13078和NY5072标准 7. 2 受试物的给予 7.2.1途径 用含有受试物的试验饲料或受试饲料喂养试验水产动物(应注意受试物在饲料中的稳定性) 当受 试物添加到饲料中时,需将受试物剂量按每100g试验水产动物体重的摄人量折算为饲料的量 mg/kg) 7.2. 试验动物空腹处理 试验水产动物在开始、中间取样及结束前应空腹24h 试验周期 根据受试物在试验水产动物机体内吸收相、平衡相和消除相的时间确定 规定试验周期最长不超
GB/T23388一2009 过24周 受试物和(或)有毒代谢物在试验水产动物蓄积靶器官残留或蓄积量达到稳态平衡浓度(3次采样 点浓度差异不显著)后,开始停喂期,即所有剂量组试验水产动物均投喂空白对照饲料,直至消除相结 束 停喂期最长不超过4周 7.4试验条件 试验系统 为防止交叉污染,残留或蓄积性毒性试验要求使用流水养殖系统,养殖容器材料应无毒无害 废水 排放要符合国家有关环保规定 7.4.2养殖条件 试验期间要保持养殖系统水温、流量、光照条件及养殖密度等条件处于试验水产动物最适生长要求 范围 7.4.3水质条件 养殖过程中的水质应参照GBl1607的要求 试验管理 正式试验开始时,应退速将试验水产动物捞出、称重,此操作要快速而轻微尽量减少对水产动物的 刺激 试验水产动物要定时定量或表观饱食投喂,详细记录投喂量及残饵量,测定铜料的游失率以准确计 算试验水产动物的摄食量 每个取样点及试验结束时进行称重、取样 7.5取样 7.5.1取样原则 对试验水产动物肌肉组织、代谢器官(血液、肝脏或肝胰腺和肾脏)和其他蓄积粑器官(如皮肤,脑和 生殖器官等)中来源于受试物的残留物进行检测,取样前需对试验水产动物进行麻醉处理,麻醉剂的使 用参见附录A 7.5.2肌肉组织的取样 鱼去鳞、去皮,沿背鳍取肌肉;虾去头,去壳,取肌肉部分;蟹、鳌等去壳,取肌肉 将样品于一18 C 以下冷冻保存备测 7.5.3代谢器官的取样 解剖试验水产动物,取肝脏或肝胰腺及肾脏等器官组织 样品于一18C以下冷冻保存备测 7.5.4其他蓄积靶器官的取样 经确认的其他蓄积靶器官,如皮肤、脑和生殖器官等组织,样品于一18C以下冷冻保存备测 7.5.5取样点 在给予受试物前应对受试水产动物取样,以此作为空白样品 为获得一个完整的浓度-时间曲线 取样点的设计应兼顾受试物及其有毒代谢物试验水产动物蓄积靶器官中的吸收相、平衡相(高峰浓度附 近)和消除相 一般在吸收相内至少需要设置2个3个取样点,对于吸收快的受试物,应尽量避免第 一个点是高峰浓度;在高峰浓度附近至少需要设置3个取样点;消除相内需要设置3个4个取样点 每个重复在每个取样点的动物数量至少5个以上 为保证最佳取样点,建议在正式试验前,选择10个试验水产动物个体进行预试验,然后根据预试验 的结果,审核并修正原设计的取样点 残留分析 8 检测方法 采用针对受试物和(或)有毒代谢物确立的定性定量检测方法
GB/T23388一2009 8.2检测指标 检测组织中的受试物和(或)有毒代谢物的残留量,包括受试物中间代谢产物、降解产物或其他结合 物的残留量,必要时确定受试物有效组分可能的代谢产物和代谢、消解规律 确定时间-浓度曲线和剂 量-浓度曲线,并计算蓄积系数和半衰期 数据处理 试验设计时即应选择适当的统计学方法,所有观察到的结果都应进行统计学分析和评价 完整、准 确地描述对照组与各剂量组试验水产动物间各项指标的差异 10 试验报告 结合生长、摄食及组织中的残留和蓄积结果,给出试验期内摄食一定量受试物后的主要的蓄积靶器 官、蓄积过程及其代谢规律,包括时间-浓度曲线、剂量-浓度曲线、蓄积系数和半衰期 获得受试物和 (或)有毒代谢物在试验水产动物机体中的代谢和消解规律 为受试物的安全限量及停喂期的确定提供 判定依据 24周受试物和(或)有毒代谢物在试验水产动物机体中残留和蓄积量仍未达到平衡相,或停喂4周 仍未达到最高残留限量(MRLs)的受试物,判定为不安全
GB/T23388一2009 附 录A 资料性附录 残留和蓄积试验常用麻醉剂及使用剂量 残留和蓄积试验常用麻醉剂及使用剂量见表A.1 表A.1残留和蓄积试验中常用麻醉剂及使用剂量表 名称和化学式 别 名 性 状 使用浓度 作用时间 三卡因 鱼保安 白色微细结晶粉木 trieainemethanesulphonate 25mg/300mg/L 1nmin~3minm MS222 易溶于水 Finquel CoHsNO.S 无色至淡黄色液体， 在空气中变棕色 丁香盼 有强烈的丁香气味 AQU1s 25 40slmin euqgenol mg/L~100mg/L 极易溶于水,溶于 2-甲氧-4丙烯基盼 乙醇、乙醒、三氯甲烧 和精油 三氯叔丁醉 白色微细结晶粉末， chloroeutanol 100mg/L1200mg/L 20s1min 易溶于有机浴剂 CH,CO0,5H.o