梨黑斑病菌检疫鉴定方法

梨黑斑病菌检疫鉴定方法

国家标准 GB/T28072一2011 梨黑斑病菌检疫鉴定方法 DetettionamdidentfieationofAernariagaisenK.Nagano 2011-12-30发布 2012-06-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T28072一2011 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口 本标准起草单位;检验检疫科学研究院、河北出人境检验检疫局 本标准主要起草人:严进,宋福、赵文胜,吴品珊、王朝华陈克、黄英、陈岩、张秋娥
GB/T28072一2011 梨黑斑病菌检疫鉴定方法 范围 本标准确立了梨黑斑病菌检疫检测和鉴定方法 本标准适用于对来自梨黑斑病发生国家和地区的梨果实和梨属繁殖材料的检疫,以及国内疑似梨 黑斑病的果实、叶片和枝条的检疫鉴定 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 梨黑斑病菌基本信息 梨黑斑链格袍(AlernariagaisenK.Nagano)属真菌界Fungi,有丝分裂弛子真菌Mitosporie fungi， 梨黑斑病菌其他信息参见附录A 方法原理 对梨黑斑病菌的鉴定可根据该真菌的寄主范围、传播途径、造成的植株症状(参见附录B),病原形 态(参见附录c和附录D)以及是否对梨叶片致病等进行鉴定 主要仪器设备 5.1仪器设备 体视显微镜、生物显微镜(具油镜和测微尺),普通天平(感量0.1g),超净工作台、生物培养箱,高压 灭菌器 5.2试验用具 手持放大镜、培养皿、三角瓶(500mL),试管(直径12mm),烧杯(1000mL),手术刀、手术剪、锻 子、载玻片、盖玻片、量筒、吸管、酒精灯 检疫与鉴定 6 现场检疫 6.1.1取样 按照SN/T2122规定的方法执行
GB/28072一2011 田间取样方法;在果实生长期,仔细检查果园中果树,采集有典型梨黑斑病症状的果实、叶片和 嫩梢 6.1.2症状观察 果实症状 6. 1.2. 1 幼果发病初期,果面出现黑色小斑点,逐渐扩大呈圆形,病斑稍凹陷;成熟果实受害时,初期症状与 幼果相似,但发病快,病斑大,不规则,黑褐色 数个病斑可融合成大块病斑,果面变黑褐色 6.1.2.2叶片症状 嫩叶容易受害 叶片病斑初期为圆形或不规则形.后扩大呈同心环纹状,暗褐色,有时数个病斑融 合成不规则形大块病斑,并出现淡紫色环纹 湿度高时,病斑上产生黑色霉层 6.1.2.3新梢症状 产生黑色小斑点,发展成长椭圆形,暗褐色,凹陷,病健交接处产生裂缝 湿度高时,病斑表面有霉 状物 实验室检测与鉴定 6.2.1分离培养 采用马铃薯-胡萝卜培养基(PCA)(马铃薯20g,胡萝卜20g,琼脂15g、蒸水1000mL),用于病 原菌的分离、鉴定和菌种保存 果实:在病斑周围的病健交界处用70%酒精擦洗消毒,用解剖刀去除表皮,取少许果肉腐烂部分放 在PCA培养基上,置于25C培养箱中,12h光照,12h黑暗条件下培养3d5d 叶片和新梢取病健交界部位边长约0.5cm组织,用0.5%NaCI0表面消毒3min,用无菌水冲洗 3遍,置于PCA平板(直径9cm)培养基上,每皿放置3片4片,于25C培养箱内培养,黑暗和光照各 12h交替 3d5d后用显微镜检查 6.2.2形态鉴定 6.2.2.1产抱表型观察 将出现链格弛菌的培养皿置于实体显微镜下,在50×下观察,用极细解剖针(00号)挑取具有典型 A.gaise产袍结构的单根抱子链上的袍子转接于PCA培养基平板上 将该培养基平板置于20C~ 25C的平台上,两支40w冷白光(4200k)灯管.8h照射和16h黑暗交替进行培养,灯管距离培养物约 40em,培养物面向上,培养7d后将培养m置于实体显微镜下(培养物面向上)观察产抱表型 6.2.2.2分生抱子形态测量 从菌落中挑取少量培养物,以水作浮载剂,制成玻片,在显微镜下观察 详细记录并测量分生袍子 大小,包括长、宽、喙长、横隔膜数,纵(斜)隔膜数,袍子颜色,袍子表面有无突起等 每个菌株测量30个 抱子 6.2.3致病性测定 将已初步鉴定的菌株进行叶片接种试验,取沙梨(Pyruspyrijolia)的嫩叶,每个菌株接种5片叶 在叶片的正反两面用针刺造成伤口,将配好的弛子悬浮液600000个袍子/mL)均匀涂在叶片的正反两
GB/T28072一2011 面,以无菌水为对照 将接种的叶片置于25C士0.5C的条件下培养5d,期间12h光照和12h黑暗交替,观察并记录发 病情况 结果判定 产抱表型 分生袍子链直立,不分枝或基本不分枝,多数袍子链含5个9个袍子 7.2分生抱子形态 分生抱子短卵形或长卵形,抱身(12.2wm一35.0m)x(5.8n n14.5丛m),平均21.6mX 10.3gm,喙呈短柱状或锥状.(2.O4m一8.了m)x(2.34m一4.6Am),平均4.lpmx3.7， pm,袍子的 横隔膜数为1一4,纵斜隔膜数为0一3 与近似种形态参见附录c和附录D. Aernariagaisen 7.3致病性测定 叶片病斑初期为圆形或不规则形,后扩大成同心环纹状,暗褐色,有时数个病斑融合成不规则形大 块病斑,并出现淡紫色环纹 湿度高时,病斑上产生黑色霉层 7.4结论 如鉴定结果与7.1、7.2、7.3相符合,即可确定分离物为梨黑斑链格袍AlernariagaisenK Nagano. 样品保存 将分离后纯化获得的梨黑斑链格抱Aernariagaisen菌种转人PCA斜面,置于常温条件下保存 至少12个月,以备复验,谈判和仲裁
GB/28072一2011 附 录A 资料性附录 梨黑斑病菌AMernariagaisen分布和寄主 A.1分布 欧洲;法国、意大利 亚洲;(辽宁、吉林、青海,新疆、山东,河北、江苏,浙江.,河南、广东、广西,山西、台湾、日本、 韩国 北美洲;美国(加里福尼亚、马里兰,密执安) A.2寄主 梨黑斑链格抱的寄主只有梨属PyrusL
GB/T28072一2011 附 录 B 资料性附录 梨黑斑病症状 病果后期症状; -病果初期症状 -病叶及病部放大 图片来自华中农业大学植物科技学院《农业植物病理学》网络课件htt p/di" hzau.edu.cn http: 图B.1 梨黑斑病症状 图B.2储藏期果实症状
GB/28072一2011 附 录 C 资料性附录 表c.1梨黑斑病菌Alernariagaisen与近似种区别 学名 产抱表型 分生抱子形态 对梨叶致病性 抱身(12.2m一35.04m)×9.8Am一185um) 分生袍子链直立 平均21.64mX15.3Mm 不分枝或基本不分 A.gaisen 假喙呈短柱状或锥状，2.0Am874m× 对梨叶致病 枝，多数袍子链含 2.34m4.6" bpm),平均4.lmX3.." 7mm 5个9个他子 横隔膜数为1一4,纵斜隔膜数为03 袍身(1l1.3丛m31.0Am)×5.2Am15.04m. 平均21.5mx10.3wm 分生袍子链分枝 对梨叶不致病 A.allernala 假喙呈短柱状或锥状，1.8Am7.9mX 繁复,致密 2.3m一4.54m),平均4.0pmX3.7pm 横隔膜数为1一4,纵斜隔膜数为0一8 分生抱子较长,倒棍棒形,卵形或长椭圆形,袍身 分生袍子链长,每 (23.2丝mm47.1m)×6.6继m14.7am),平均 链 10个15(20 29,3Mm×10,5Mm 对梨叶不致病 A.teissi4 个袍子，分枝很少 假喙(4.lm~12.5am)×(2.3Am4.7am),平 或无 均6.7 1×3.6丝m 74m 横隔膜数为1一6,纵斜隔膜数为0一4 分生袍子倒棍棒形,卵形、长或短椭圆形，袍身 14.4am51.0am×5.6am16.3am),平均 分生袍子链分枝27.了nx11.4m 对梨叶不致病 A.infectoria 松散,次生袍子桠长 假喙(6.1am23.5Am)×(2.2Am4.7m),平 均l0. n×3.5 .24m 5m 横隔膜数为2一7,纵斜隔膜数为05
GB/T28072一2011 附 录 D 资料性附录 梨黑斑病菌Allernariagaisen和近似种形态示意图 图D.1梨黑斑链格袍Alternaria 图D.2链格抱Alternariaallernata .8aisen" ernariatenuissima 图D.3细极链格抱Alle 图D.4侵染链格抱AllernariainJe ecioria 注:以上图片由美国农业部农业研究所RodneyG.Roberts先生提供

梨黑斑病菌检疫鉴定方法GB/T28072-2011

引言

梨黑斑病是梨树上的一种重要病害，严重危害农业生产和经济发展。为了遏制病害的传播，对于梨黑斑病菌进行检疫鉴定显得尤为重要。GB/T28072-2011标准规定了梨黑斑病菌检疫鉴定的具体方法和步骤，本文将对其进行详细介绍。

检疫样品的采集

GB/T28072-2011标准规定，采集梨黑斑病菌检疫样品应在植株发病期采集。采样时应选取典型症状表现的植株，每个样品至少应包括5个植株。采集后的样品需要送到专业实验室进行鉴定。

样品处理

在实验室中，需要将样品进行处理，以获取可靠的检测结果。首先，需要将样品中的病原体提取出来，然后通过特定的方法进行检测。从样品中提取病原体的方法有多种，如直接涂片法、半选择性分离法等，具体方法可以根据实际情况进行选择。

鉴定方法

GB/T28072-2011标准规定了多种鉴定方法，包括生物学鉴定法、分子生物学鉴定法等。其中，生物学鉴定法主要是通过形态学、生理生化等方面进行鉴定；而分子生物学鉴定法则是通过扩增样品中的DNA或RNA序列来进行鉴定。这些方法都具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。

结语

梨黑斑病是一种严重危害梨树的病害，检疫鉴定方法的制订和实施对于防控病害的传播非常重要。GB/T28072-2011标准规定了多种鉴定方法，可以根据实际情况选择适合的方法进行检测。在日常生产中，应加强对梨黑斑病的检测和防治工作，以保障农业生产和经济发展的稳定性。

梨黑斑病菌检疫鉴定方法的相关资料

和梨黑斑病菌检疫鉴定方法类似的标准