化妆品中二十一种磺胺的测定高效液相色谱法

化妆品中二十一种磺胺的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T24800.6一2009 化妆品中二十一种磺胺的测定 高效液相色谱法 Determinationof21slfonamidesincsmetiesby highperformanceliquidchromatographymethod 2009-11-30发布 2010-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T24800.6一2009 引 言 本标准中的被测物质是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质,不得作为化妆品生产原料即组分 添加到化妆品中 如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时,则化妆品成品应符合《化妆品 卫生规范》对化妆品的一般要求,即在正常及合理的可预见的使用条件下,不得对人体健康产生危害 目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法
GB/T24800.6一2009 化妆品中二十一种磺胺的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了化妆品中二十一种磺胺的高效液相色谱测定方法 本标准适用于化妆品中二十一种磺胺的测定 本标准的检出限和定量限;磺胺呱、磺胺、,磺胺醋酰、,磺胺二甲异嗜、磺胺嗜院、磺胺嚷幽、磺胺毗 、磺胺甲基嗜、磺胺二甲嗯陛、磺胺二甲密、磺胺间二甲氧密唉、磺胺唾嗯琳、磺胺硝苯的检出限为 0.2mg/kg,定量限为0,6mg/kg;磺胺甲嚷二幽、磺胺甲氧哒嗓,琥珀酰磺胺嚓陛、,磺胺氯哒嗓、磺胺甲 基异嗯幽、磺胺间甲氧密嚏、磺胺邻二甲氧密啶、磺胺二甲异嗯幽的检出限为0.4mg/kg,定量限为 1.2mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 原理 试样经溶剂提取,离心过滤后,用高效液相色谱测定,外标法定量.液相色谱-质谱确认 试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 甲醇;色谱纯 4.1 四氢吠喃;色谱纯 4.2 4.3氢氧化钠溶液(0.】molL)准确称取4g氢氧化纳于1L容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,混 匀后备用 44甲酸溶液(0.1%)准确量取1mL甲酸于1L容量瓶中,用水定容至刻度,混匀后备用 4.5甲醉水溶液;准确量取50mL甲醇和50mL水.混匀后备用 4.6 碱胺呱、碱胶、碱腋醋酰、,碱二甲异嘴陡、碱脑喘呢,碱胶嚷畦、,碱胶毗院,碱胺甲基喘院,碱脓二 甲嗯陛、磺胺二甲喀、磺胺甲嚷二陛、磺胺甲氧哒嗦、琥珀酰磺胺嚷陛、磺胺氯哒嗦、磺胺甲基异嗯陛、 磺胺间甲氧喀、磺胺邻二甲氧喀、磺胺二甲异嗯陛、磺胺间二甲氧喀、磺胺唾嗯琳、磺胺硝苯标准 品;纯度大于97% 4.7 一种磺胺的标准储备液:准确称取每种磺胺标准物质(4.6)各100mg,分别置于100mL棕色 容量瓶中,用甲醇水溶液(4.5)溶解并定容至刻度,摇匀,配制成浓度分别为10004g/ml的标准储备 液,于4C避光保存,可使用三个月 注硕胶咋嗯啾标准储备液配制时,可加人数滴氢氧化钠溶液(4.3)辅助溶解 4.8 二十一种碱胺的混合标准储备液;分别准确移取二十一种碱胶胺标准储备液各4ml于100ml.棕 色容量瓶中,用甲醇水溶液(4.5)定容至刻度,该溶液中二十一种碱胺的浓度均为40ug/mL
GB/T24800.6一2009 仪器和设备 5.1高效液相色谱(HPLC)仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器 5.2液相色谱-质谱/质谱(LC-Ms/MS)仪:配有电喷雾离子源(ES). 5.3分析天平;感量为0.0001g和0.001g 5.4离心机转速不低于50001 r/min 5.5超声波水浴 5.6具塞比色管:l0mL 5.7具塞塑料离心管;l0mL 5.8微孔滤膜:0.45Am,有机相 分析步骤 6.1样品处理 6.1.1膏霜、乳液,水剂、散粉、香波类样品 称取1g(精确至0.001g)试样于10mL具塞比色管中,加人5ml 甲醇,再加水至10mL,超声提 取20min 取部分溶液转移至10ml具塞塑料离心管中,以不低于5000r/min离心15min,上清液经 0.454m微孔滤膜过滤,滤液作为待测样液 注:如离心难以获得上清液可加适量氧化钠破乳 6.1.2唇膏类样品 称取1g(精确至0.001g)试样于10ml具塞比色管中,加人2mL四氢吠喃,超声提取10min,再 加水至10nmlL.,超声提取10min 取部分溶液转移至10nml具塞塑料离心管中,以不低于5000r/min 离心15min,上清液经0.45m微孔滤膜过滤,滤液作为待测样液 测定条件 高效液相色谐测定条件如下 色谱柱Symme n,250mmX4.6mm(内径) a uSm etryCI8 b 流动相:见表1 流速:1.0mL/min. D C 柱温:32 波长;268nm. 进样量;20L 注;方法中所使用的色谱柱仅供参考,同等性能的色谱柱均可使用 表1流动相 $ 骤 时间/min 甲酸溶液(0.1%/% 甲醉/% 92 0.00 7.00 84 16 13.00 78 22 25 18.00 75 25 27.00 75 55 29.00 45 95 40.00 42.00 92
GB/T24800.6一2009 6.3标准曲线的绘制 用甲醇水溶液(4.5)将二十一种磺胺混合标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.1g/mL 0.54g/mlL、14g/ml54g/ml、10g/ml,204g/ml的混合标准工作液,按6.2的测定条件浓度由 低到高进样测定,以峰面积浓度作图,得到标准曲线回归方程. 二十一种碱胺标准品色谱图参见附录A中的图A.1 测定 按6.2的测定条件对待测样液进行测定,用外标法定量 待测样液中碱胺的响应值应在标准曲线 的线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析 必要时,阳性样品需用液相色谱-质谱进行确认 试验(参见附录B) 6.5空白试验 除不称取样品外,均按上述测定条件和步骤进行 结果计算 结果按式(1)计算.计算结果保留两位小数(G计算结果应扣除空白值) 1000×c，×V W，= N 式中: w -试样中被测磺胺的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); -从标准工作曲线上查出的样液中被测磺胺的浓度,单位为微克每毫升(4g/mL): -样液最终定容体积,单位为升(L); 试样的质量,单位为克(g) 1 检出限和定量限 本标准的检出限和定量限;碱胺呱、碱胺、磺胺醋酰、碱胺二甲异嗜、磺胺嗜唁、磺胺嚷陛,磺胺毗 、磺胺甲基嗜,磺胺二甲嗯陛、磺胺二甲密、磺胺间二甲氧密、磺胺呤嗯琳、,磺胺硝苯的检出限为 0.2mg/kg,定量限为0.6mg/kg;磺胺甲嚷二陛、磺胺甲氧哒嗦、琥珀酰磺胺嚓陛、磺胺氯哒嗓、磺胺甲 基异嗯幽、碱胺间甲氧唁唁、碱胺邻二甲氧唁、磺胺二甲异嗯陛的检出限为0.4mg/kg,定量限为 1.2 mg/k 回收率 IN 40mg/kg浓度范围内,回收率在85%110%之间,相对标准偏差小 在漆加浓度0.?mg/" g 于10% 10 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%
GB/T24800.6?2009 ?A ?? ???? 20 19 21 1613 20 25 30 35 /min ?; ?; ? ?; ? -?±; ?; ? ??; ? ??; ?? 12 ?± ??; -???" 15 16 ??; -?? 18 ?; 19 ? 20 ??; 21 -? ?A.1????????
GB/T24800.6一2009 附 录 B 资料性附录 确认试验 B.1液相色谱条件 a)色谱柱SunFireCs,5xm,150mm×2.1mm(i.d.),或相当者 b) 流动相;见表B.1 e)流速;0.2mL/min 柱温:30c d e 进样量;20 表B.1流动相 步 骤 时间/min 甲酸溶液(0.1%/% 甲醇/% 0.00 92 16 5.00 84 78 8.00 22 25 75 14.00 25 24.00 75 45 55 26.00 35.00 95 36.00 92 B.2质谱条件 电离方式;电喷雾电离,正离子 a b 毛细管电压:3.5kV 萃取电压:1.0V D 射频透镜电压:0.0V 离子源温度:120C f 脱溶剂气:氮气,流速600L/hr,温度350C g)锥孔气:氮气,流速50L/hr h 碰撞气;缸气 i 扫描模式:多反应监测(MRM),定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞气能量见表B.2 表B.2磺胺的定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞气能量 碰撞气能量相对允许偏差 定性离子对定量离子对锥孔电压， 中文名称 英文名称 丰度 eV m/z m/2) 216/157 15 100 碱胺肌 sulfaguanidine 216/157 22 士20 216/109 23 52 173/156 l100 73/156 15 士20 碱胶 sulfanmilammide 173/91 18 551
GB/T24800.6?2009 B.2 ??????/?? ? n/2) m/2) eV % 215/156 100 10 ? sulfacetamide 215/156 15 ?25 215/92 22 49 279/124 20 100 279/124 ?? sulfisomidine 30 ?25 17 279/186 33 251/156 100 l ?? sulfadiazine 251/156 25 ?20 251/108 661 256/ I156 100 5 ?± sulfathiazolee 256/156 25 ?25 23 256/108 49 250/156 100 15 2 250156 ? ?25 sulfapyridine 17 31 250/184 265/156 17 100 ??? sulfanmerazine 265/156 21 ?20 l 5 265/172 268/156 100 17 ?? 268/156 26 ?25 sulfamoxole 7 268/113 49 279/186 18 100 ?? sulfamethazine 279/186 25 ?20 18 279/156 72 271/156 100 ? sulfamethizole 271/156 23 ?25 271/108 46 281/156 100 281/156 2 ?20 ?? sulfamethoxypyridazine 57 281/108 356/256 17 100 succinvlsulfatiazol 356/256 32 ?25 ?? 356/156 23 46 285/156 15 100 ?? sulfachloropyridazine 285/156 25 ?25 5 285/108 17 254/156 100 254/156 25 ??? sulfamethoxazole ?20 2 254/108 78 281/156 17 100 ?30 ?? sulfamonomethoxine 281/156 28 15 281/215 16 311/156 100 l sulfadoxine 311/156 ?? 30 ?25 30 311/108 4 268/156 13 100 268/156 23 ?20 ? sulfisoxazole 268/113 15 82 311/156 20 100 35 ? sulfadimethoxine 311/156 ?25 311/108 27 42 3o1/156 15 100 ? sulfaquinoxaline 301/156 25 ?20 25 301/108 52 13 336/156 100 336/156 25 ?25 ? sulfanitran 336/294 10 45
GB/T24800.6一2009 B.3定性判定 按照上述条件测定试样和标准工作溶液,如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致 变化范围在士2.5%之内);样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰 度一致,相对丰度偏差不超过表B.2的规定,则可判断样品中存在碱胺 二十一种磺胺的选择离子质量色谱图见图B.1 M20080325dfnnide_02 :MRaf2ces+ aBSiB 4.25e3 5O 0.000 2.50S.075020.0022.5O2.0027.s 5.00 30.00 32.50 M20080325sulfonamide02 2:MRMof2ChannelsES 173.2> .? .50 m0.00 2.01S.0073O2.0022.502.0027.030.0032.sO M20080325_slfonanmidle_02 4:MRMof2Ch S 6.80 8,55e4 7.s0 Y0.002.5O.007.3020.0o22.502.002.s030.0032.5D 2.50 5.00 M20080325_lonamide02 3;MRMof2ChnnelsES十 69 279.2>123.8 7.50 0.00 25015.00' 7.5020.0022.5025.0027.5030.0032.50 2.50 5.00 N20080325ulfonamide_02 5:IRMof2Chnels5S+ 251.1！ ， 7.50 0.00 T201.00 020.o0022.5025.0027.5030.032.50 2.50 5.00 \M20080325salfonanmidl_02 6:MRMof2ChannelsES+ 9.07 s0 20T.00.020.02.02.00030.03.0 10.00 5,00 20080325saltfonamid_02 7:MRof2ChamnelsES+ 50.IS06 99 5.04e4 2.50" .0o 7.5O 2.s01.007.3020.022.5025.0027.5030.032.50 10.00 20o80325_alfidk-_c 8;MRf2Gher nelsES十 26.2>i56 10.24 4.1le4 第w双双w翠w双w双别双 2O "0 券.00 9:MRMor2han PeH-+ N20080325sulonaide02 12.13 268.2>156 6.63es 这O702 游猫.0游筋 2.O 7.50 m0.00 32.sO Mw 0.00 MN20080325_salonamidle_02 10:MRMof2ChannelsES+ 12.59 2.90e4 0 S0 笠.7.Dw 250 2E0L0 20.0o MN20080325slionanmilke_02 12;MRof2cham ps- 27.21s6 .10e4 7020 这O发.7D 30W 250.00 2.50 0.00 32.50 M200e0325_linamnide_02 3:MRMof2Chant "品 3.50e4 翠发.70.w立都 3勃ww这D 15.00 50 120080325sultnumide_02 14:MRof2 as 156.1 3.29e3 27O0这3露. W筑w翠霉算w算"部 图B.1二十一种磺胺的选择离子质量色谱图
GB/T24800.6一2009 N200s0325sltonuide_02 15;MRMof2ChnnelEs+ 285.2 se 16.69 2.07e4 Tne "27.2丽 深0靠w"没蹦谓0w双D M20080325sulonamide02 16:MRof2Chan 18.06 254.2>156 2.35e4 7.5O 23O1.00 2.30 .02.s0" 32.60 2.50 5.00 10.00 17.50 20.00 30.00 M20080325sulfonamide02 17:MRMof2ChannelsES十 28I.1>l56 .95e .00 7.50" 10.002.s016.007B0 2.5O2.0027.s030.o032.O 2.50 20.00 M20080325slonamide02 18:MRMof2Oh ChannesES+ 19.44 3ll.2> 5 .00 7.50" 10.002.s05.00" 22.502.002.3030.0032.50 2.50 17.50 20.00 M20080325slfonamide_02 19;MRMof2Channels E 268.2> 32.50 2.O007300.002.30.007502.w22.50.002游7030.00 M20080325slfonamide_02 20:MRMof2 "S f 28.23 7.5O 2.505.0075020.0022.50 2.5O 2.50 5.00 10.00 25.00 27.50 30.00 21:MRo2ChunelsES M20080325_slfonide_02 D"TER 28.51 2.5O .00 ？.5O 0.DoT2O015.005O20.022.502.o02750 2.5 30.00 M20080325sulfonamide02 22:MRMof2ChanelsES+ S6T 30.44 6.16e3 1me .00 7.sO 2.s016.00 7.5020.0022.50 2.50 10.00 25.00 27.50 30.00 32.50 图B.1(续