中国对虾亲虾

中国对虾亲虾

国家标准 GB/T15101.1一2008 代替GB/T15101.1一1994 对虾亲虾 Chineseshrimp一Parentshrimp 2008-04-09发布 2008-06-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T15101.1一2008 前 言 GB/T15101《对虾》分为两个部分 -GB/T15101.1一2008对虾亲虾; GB/T15101.2一2008对虾苗种 本部分为GB/T15101的第1部分 本部分代替GB/T15101.1一1994《对虾养殖亲虾》,主要变化如下: 原标准名称《对虾养殖亲虾》改为(《对虾亲虾》; -增加了关于运输的要求; 增加了关于检疫的要求; 增加了抽样原则、组批、抽样方法的内容 增加了资料性附录“对虾性腺发育”(见附录A); -增加了规范性附录“白斑病病毒的检疫”(见附录B) 本部分的附录B为规范性附录,附录A为资料性附录 本部分由农业部提出 本部分由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口 本部分起草单位;水产科学研究院黄海水产研究所 本部分主要起草人;张岩,陈四清,于东祥,李鲁品 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 -GB/T15101.1一199！
GB/T15101.1一2008 对虾亲虾 范围 GB/T15101的本部分规定了对虾(Fenneropenaewsehinensis)亲虾的来源,质量要求、检验方 法、检验规则和运输要求 本部分适用于对虾亲虾的培育、销售和使用 规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T15101的本部分的引用而成为本部分的条款 凡是注日期的引用文 件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本 部分 NY5052无公害食品海水养殖用水水质 术语和定义 下列术语和定义适用于GB/T15101的本部分 3 亲虾parent shrimp 对虾人工苗种繁育期间所使用的已交尾的对虾的雌虾 质量要求 4.1亲虾来源 从自然海区捕获的或从人工养殖池塘中选育的对虾亲虾 发生过病毒病的虾池的剩余虾不得用作亲虾 4.1.3鼓励使用原、良种场提供的优质亲虾 4.2外观 4.2.1形态特征 虾体完整,体色鲜明正常,体质健壮,头胸甲、,腹节、附肢及尾扇完好无伤,额角完整无折断,无其他 外伤,无畸形,符合对虾形态分类特征 4.2.2体色 色泽鲜艳,呈自然的虾青色 4.2.3体表 体表光洁,无附着物 4.2.4活力 对外界刺激反应灵敏,手抓挣扎有力,游动正常,不游动时正向旬匈水底,不侧卧 4.2.5病症 无褐斑、黑蟋、红腿、烂眼、软壳、白斑、白黑斑等病症 4.3规格 4.3.1体长 人工养殖亲虾不小于14cm;自然海区捕获的亲虾不小于17 cm
GB/T15101.1一2008 4.3.2体重 人工养殖亲虾不小于28g;自然海区捕获的亲虾不小于58g 4.4交尾及性腺发育 纳精囊饱满微凸,内有乳白色的精荚;卵巢发育良好,轮廓清晰,呈灰绿或墨绿色,颜色与发育阶段 相符,亲虾卵巢发育分期情况参见附录A 4.5检疫 亲虾在人池前应进行白斑病的检疫,带病毒的虾不得用作亲虾 检验方法 5.1外观 用肉眼按照4.2的要求进行检查 5.2规格 体长 5.2.1 当虾体自然伸展时,用直尺(精度1mm)测量从眼艇基部至尾节未端的长度 5.2.2体重 用湿纱布将亲虾体表水分吸干后,用天平(感量为0.lg称重 5.3检疫 白斑病病毒的检疫见附录B 检验规则 抽样原则 抽样按照6.2,6.3的规定进行,外观、规格、体重的检验采取抽样和目测结合的方法 组批 海捕亲虾以同一来源、同一时间捕获的为同一检验批 人工养殖对虾以同一养殖池的为同一检 验批 6.3抽样方法 同一检验批的亲虾应随机取样,批量在1000尾以下(含1000尾)的,取样数为批量的2%,最小取 样数为10尾;批量在1000尾以上,5000尾以下(含5000尾)的,取样数为批量的1%;批量在5000尾 以上的,取样数为批量的0.5% o 检验结果的判定 所有抽检亲虾应符合第4章的要求,不符合要求的亲虾即判定为批不合格 亲虾的运输 7.1亲虾应尽量做到随捕随运,尽量缩短运输前的暂养时间 7.2亲虾的运输方式可采用帆布桶运输、塑料袋充氧运输(塑料袋中加人10L海水置3尾5尾亲 虾,充人氧气至15L20L扎紧即可运输)或活水船、活水车运输,运输过程中可保持充气或中途换水 应保持水中溶解氧含量在5mg/I以上 7.3应根据距离、密度、水体大小等确定亲虾运输密度，一般为50尾/m'一80尾/m 7.4亲虾运输用水应符合NY5052的要求 亲虾运输过程中应防晒、防雨淋,天冷运输应注意保温
GB/T15101.1一2008 附 录A 资料性附录 对虾性腺发育 对虾的性腺发育大体可分为六期 第I期 雌虾在交配前性腺纤细,透明无色,外观看不到性腺,卵细胞很小,其内物质稀薄,核大圆形 第期 交配过后,解剖可见性腺呈半透明,白浊或带淡灰色 体积稍有增大,呈粗线条状,但卵细胞尚未有 卵黄粒,核大,核仁数量多,散布于核内,外观仍看不到卵巢的形状和色泽 第皿期 外观可以看到,性腺呈淡绿色,体积明显增大,卵巢内的卵细胞出现有卵粒 第期 卵巢基本达到最大体积,充满虾体的头胸部及体腔,呈深绿色或灰绿色 卵细胞的周围出现短棒状 的周边体 卵黄颗粒大,核仁分裂成小点状,数量增多,散布于核的周围 滤泡细胞变薄 营养物质被 卵细胞所吸收 第V期 卵巢达到最大的丰满度,呈褐绿色 卵巢背面棕色斑点增多,表面龟裂突起 卵粒清晰 卵细胞内 核膜消失,核仁溶解,周边体明显增长,呈辐射状排列于卵的周围 滤泡膜被吸收而不再存在 第期 已产过卵 卵巢萎缩,外观为土黄色,看不清卵巢的轮廓
GB/T15101.1一2008 附 录 B 规范性附录 白斑病病毒的检疫 B.1DNA的提取 a 活体或冰冻的成虾卿或胃游泳足或步足也可以)样品约5mg~100mg,活体或冰冻幼体、仔 虾及幼虾个体样品约5mg100mg去掉幼虾眼,将所取所有样品剪碎后混合均匀,取 昏mg一100mg放人灭菌1.5mL微型离心管中,加人抽提缓冲液500L.用研磨棒充分研磨 37C温浴1h b)加人2.5AL20mg/ml蛋白酶K,至终浓度100"g/mL,混匀后置于50C水浴3h,不时旋动 将溶液冷却至室温,分别用等体积平衡酚、酚-三氯甲烧-异戊醉、三氯甲烧-异戊醇(24;l),颠 倒混合10nmin,抽提,于1 000r/min离心1nmin3min分离两相,保留水相 06 水相移至一新灭菌微型离心管中,加人100L10mol/L乙酸铵,混匀后,再加人两倍体积预 冷无水乙醇(一20C)混匀,一20C放置2h 10000r/min离心10min,弃上清液 用70%乙醇洗涤沉淀2次,每次10000r/min离心5 小心倾去上清液,最后沉淀于室温 min， 晾干 f 沉淀晾干后加人100L灭菌双蒸水或100LTE缓冲液溶解DNA并保存于一20C B.2第一步PCR操作 引物序列Fl:5'-ACT-ACT-AAC-TTC-AGC-CTA-TCT-AG3'，RI:5'-TAA-TGC-GGGTGT AAT-GTT-CTT-ACGA-3',反应体系见表B.1 按以下程序进行扩增;90C预热2nmin,离心1s侧 2s,然后94C4min,55c1min、72C2min,1个循环;94C1min,55C1min,72C2min,39个循环; 72C延伸5min 4C保温 表B.1白斑病病毒检疫第一步CR反应体系 剂 用 量 终 度 试 浓 GB/T15101.1一2008 表B.2白斑病病毒检疫第二步PCR反应体系 剂 用 度 试 量 终浓 XPCR缓冲液(无Mg 1×PCR缓冲液 10X 2.5l MMgCl.(25mmol/L) 5儿 1.5mmol/ dNTP(10mmol/L) 00pmal儿 0.5l 10mol/1引物F2 2.5 l4mol/1 0amol/L引物R2 2.5AL lAmol/L 10Amol/引物F3 2.5Al Amol/L lmol/L 10Amol/1引物R3 2.5pl 灭菌双猴水 7.9Al 0. .02U/l TNA菜谷商GUA 0.l4l 第一步PCR反应产物 2.5L 预混物总体积 25AL B.4扩增产物的电泳 采用1.5%的琼脂糖凝胶,点样量为10L第二步PCR反应产物与2AL6×载样缓冲液,在另外的 泳道分别加人5L 1kbDNA分子质量标准的载样混合物和阳性对照、阴性对照、空白对照,在 1v/em一5Vv/cmm的电压下电泳约1h,当载样缓冲液中澳厨蓝指示剂的色带迁移至琼脂糖凝胶的 1/22/3处时停止电泳,将凝胶置于紫外观察仪上观察或照相 注1:阳性对照为已知受WSSV对虾白斑病病毒感染且PCR结果显示明显阳性结果的wSSVDNA模板， 一20C保存 注2:阴性对照为已知未受WSSV感染且PCR结果显示阴性结果的对虾组织DNA模板，一20C保存 注3，空白对照以无菌双蒸水为模板 B.5结果判定 阳性对照在941bp处会有一条特定条带出现;阳性样品在941bp和848bp处会有特定条带出现 阴性对照和阴性样品只在848bp处有条带;无菌水为模板设立的空白对照不出现任何条带 阳性对照 在941bp处无特定条带出现或阴性对照在941bp处有条带出现都表明PCR失败,应在排除故障和清 除污染后,重新取样检测