饲料中氨苄青霉素的测定高效液相色谱法

饲料中氨苄青霉素的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T23385一2009 饲料中氨芒青霉素的测定 高效液相色谱法 Determinationofampieillininfeed一 Highperformaneeliquidchromatography 2009-03-26发布 2009-07-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23385一2009 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/Tc76)提出并归口 本标准起草单位:黑龙江省兽药饲料监察所 本标准主要起草人:金慧然、叶建敏、范锡龙、郭文欣陶娅、江森、李春辉
GB/T23385一2009 饲料中氨茉青霉素的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了用高效液相色谱(HPLC)法测定饲料中氨节青霉素的含量 本标准适用于配合饲料,浓缩饲料和添加剂预混合饲料中氨节青霉素含量的测定 本标准检出限为1.0mg/kg,定量限为5.0mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T66822008,ISO3696;1987,MOD) GB/T14699.1饲料采样(GB/T14699.1一2005,ISO6497:2002,IDT) GB/T20195动物饲料试样的制备(GB/T20195一2006,ISO6498:1998,I[T 原理 用磷酸盐缓冲液提取试样中的氨节青霉素,高效液相色谱仪反相色谱系统分离,紫外检测器或二极 管矩阵检测器在波长220nm处进行定性、定量测定 试剂和溶液 除非另有规定,在分析中仅使用确认为分析纯试剂和符合GB/T6682规定的一级水 乙晴;色谱纯 4.1 4.2磷酸二氢钾溶液,c(KH,PO.)=0.02mol/L准确称取2.72g磷酸二氢钾于1000mL容量瓶中 加水溶解稀释至刻度 二氢钾溶液(4.2)+乙睛(4.1) 提取液;磷酸 =19十l 二氢钾浴液(4.2)和80mL乙脖(4.1),混合均匀,通过0.451 HPLC流动相:取920ml磷酸二 2m的 容剂微孔过谴腿过糖.使用前用赶声谈脱气 氨节青霉素标准旷贮备液;准确称取氨节青霉素标准品(含量不少于86.5%)50mg(精确至Q.0w0olg) 4.5 于50mL容量瓶中,用超纯水溶解并定容至刻度,摇匀 其溶液浓度为1.0mg/mL贮于4C一日C冰 箱中,有效期2d 氨节青霉素标准工作液;准确移取氨节青霉素标准贮备液(4.5)适量,用水稀释成浓度分别为 4.6 1.0 /mL、100.0 4g/mL,5.04g/mL10.O4g/ml25.04g/ml,50.0g/ g/ml,现用现配 仪器和设备 分析天平;感量为0.00001g和0.0001g各1台 5.2高效液相色谱仪;配紫外检测器或二极管矩阵检测器 5.3超声波清洗机 4 5. 振荡器
GB/T23385一2009 5.5离心机 5.6涡旋混合器 微孔滤膜:0.45am. 试样制备 6.1按GB/T14699.1采样 6.2选取有代表性样品至少500g,按GB/T20195进行样品制备,粉碎,全部通过孔径为0.45 的 mm 孔筛,充分混匀,装人密闭容器中,避光保存,备用 分析步骤 试样溶液的制备 称取饲料样品5g,精确至0.0001g,置于100ml三角瓶中,准确加人25ml提取液(4.3),于振 荡器上振荡提取5min,把溶液转人离心管中以5000!/min离心10min.取上清液过0.45A的微孔 滤膜,供高效液相色谱仪测定 7.2 色谱条件 色谱柱:Ca柱(柱长为250mm内径为4.6mm,粒度为5wm)或类似分析桂 柱温;室温 检测器;紫外检测器或二极管矩阵检测器,检测波长220 nm 流动相;磷酸二氢钾溶液(4.2)+乙睛(4.1)=92+8. 流速:l.0mL/min 进样量;20Al. 7.3HPLC测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器参数 向高效液相色谱仪中注人氨节青霉素标准工作液(4.6) 及试液(7.l),得到色谱峰面积响应值,用标准系列进行单点或多点校准 结果的计算与表述 试料中氨节青霉素的含量X以质量分数表示,单位为毫克每千克(mg/ke),按式(1)计算 X= 是xn,x; 式中: 试样提取液测得的色谱峰面积; -氨节青霉素标准工作液测得的色谱峰面积 -标准工作液中氨卡青霉素含量,单位为微克每毫升(g/mL); -加到试样中的提取液体积,单位为毫升ml); 试样质量,单位为克(g). 平行测定结果用算术平均值表示,保留三位有效数字 重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%
GB/T23385一2009 附 录A 资料性附录 氨节青霉素标准样品色谱图 图A.1给出了氨节青霉素高效液相色谱图 mA 10.640 120 1003 80 60 40 20 10 12 min 图A.1氨节青霉素高效液相色谱条件下标准样品色谱图