农药登记毒理学试验方法第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法

农药登记毒理学试验方法第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法

国家标准 GB/T15670.2一2017 部分代替GB/T156701995 农药登记毒理学试验方法 第2部分急性经口毒性试验霍恩氏法 Ioxsieologiealtestmethodsforpestieidesregistration- Part2:Aeuteoraltoxicitytest一Horn'smethod 2017-07-12发布 2018-02-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T15670.2一2017 本部分由农业部提出并归口 本部分起草单位;农业部农药检定所 本部分主要起草人:贺锡雯、张丽英、曲莞莞、陶传江 本部分所代替标准的历次版本发布情况为 GB/T156701995
GB;/T15670.2一2017 农药登记毒理学试验方法 第2部分:急性经口毒性试验霍恩氏法 范围 GB/T15670的本部分规定了急性经口毒性试验霍恩氏法的基本原则、方法和要求 本部分适用于为农药登记而进行的急性经口毒性试验 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB18925实验动物环境及设胞 农药登记资料规定(农业部令[2007]第10号 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3. 急性经口毒性aeuteoraltosieity 次或在21h内多次经口给予实验动物受试物后,动物在短期内出现的健康损害效应 3.2 剂量dose 所给受试物的量,以实验动物单位体重所接受受试物的质量表示(mg/kg体重) 3.3 半数致死剂量mdianlethaldose LDO -次或在24h内多次给予实验动物受试物后,引起实验动物总体中半数死亡的毒物统计学剂量 以实验动物单位体重接受受试物的质量表示(mg/lkg体重) 3.4 剂量-反应关系dose-responserelationship 剂量与特定效应的发生率间的关系 试验目的 急性经口毒性试验是评估受试物毒性的第一步 通过短时间经口染毒初步了解受试物的毒性特征 和剂量-反应关系,为急性毒性分级、标签管理和其他毒理学试验剂量选择提供依据 5 试验概述 霍恩氏法(Horn'、method)亦称改良维氏法或简化概率单位法 采用几何级数的四个递次剂量
GB/T15670.2一2017 各个剂量组动物数相同,染毒后根据每组动物的死亡数,从计算表格中查找受试物的LD和95%可信 区间 剂量系列递增公比为: 1.00 /而;2.15x10' =0，士1,士2,士3等 4.64 1.00 或、0 ×10' =0,士l,士2,士3等 3.16 因递增公比/的剂量系列间距较大,精确度较差，一般多采用公比为/的剂量系列 本方法计 算方便,简单易行 缺点是LD估计值不够精确,可信区间范围较大 但可初步了解受试物的毒性 特点 6 试验方法 6.1受试物 受试物可配制成水溶液.油溶液或悬浮液 尽可能选用水或食用油(如玉米油)作溶剂,其他如段甲 基纤维素销.明胶和旋粉可将受试物配制成混悬液或糊剂 除水以外的菩剂,用前应了解其毒理学特 性,必要时设立溶剂对照组 不同浓度受试物现用现配 一次染毒容量不超过1mL/100g体重,水溶 液可达到2mL/100g体重 通过调整受试物溶液的浓度,使各剂量组经口染毒的容量一致 如一次染 毒容量太大,可在24h内分2次3次给予 6.2实验动物 6.2.1种属和性别 啃齿类动物中可选用sD大鼠或wistar大鼠 单一性别,通常采用雌性动物比较敏感),如有结 构相关化学物的毒理学、代谢和毒物动力学研究证明雄性大鼠更敏感,可选择后者 也可采用雌雄两种 性别 雌性动物应为未奸娠和未经产的 6.2.2年龄和体重 健康成年大鼠鼠龄在8周~10周内 动物体重变异不超过同性别动物平均体重的士20% 按随 机原则进行分组 6.3饲养环境和条件 实验动物的饲养环境和条件应符合GB14925的有关规定 喂饲常规动物饲料,饮水不限 试验 前动物应在饲养环境中检疫,适应至少3d 6.4试验步骤 6.4.1预试验 6.4.1.1可查阅有关资料和文献确定预试验剂量 如无法获得毒理学信息，一般采用10mg/kg体重 00mg/kg体重和1000mg/kg体重三个剂量,每个剂量经口染毒2只3只动物 染毒后24h内 0mg/kg体重和100mg/kg体重剂量组动物未出现死亡,而1000mg/kg体重剂量组动物全部死亡" 可终止试验 可确定正式试验的剂量系列为100mg/kg体重、215mg/kg体重、464mg/kg体重和 1000mg/kg体重
GB;/T15670.2一2017 6.4.1.2也可采用215mg/kg体重一个剂量，一次染毒5只动物(单一性别),如24h内动物出现严重 中毒反应,并有多个动物死亡,则推荐低于215mg/kg体重的剂量系列进人正式试验;如24h内染毒动 物未出现异常,可采用高于215mg/kg体重的剂量系列进人正式试验 6.4.2正式试验 6.4.2.1剂量系列可按预试验结果或根据相似结构化学物有关毒理学资料来确定 6.4.2.2将动物随机分为4组,每组5只 试验前,大鼠禁食过夜,饮水不限 染毒后继续禁食3h 4h,严密观察和详细记录动物出现的任何异常表现,每组动物的死亡数和死亡时间 所有染毒动物的 观察期为14d,必要时可延长观察期 6.4.2.3根据各组动物的死亡数(r,r广,r,r,)和所采用的剂量系列(D,D.,D.,D,),从附录A中表 A.1或表A.2中的对应位置查到受试物的ID.估计值和95%可信区间 6.4.3限量试验 如确认受试物毒性很低,可采用一次限量5000mg/kg体重，给10只动物(单一性别)染毒,观察 14d,如未引起动物死亡,可不再进行多个剂量的试验 6.5试验观察和检查 6.5.1临床观察 在染毒后24h(特别在染毒后30min内和第一个4h)以及14d的观察期内,每天定时观察并详细 记录每只动物的中毒反应 临床观察至少包括: 中枢神经系统和神经肌肉系统:体位异常、叫声异常、不安,呆滞,震颤,抽搐,麻痹、运动失调、 对外反应过敏或迟钝,异常行为如过度反复抓挠口周、梳理、转圈,甚至自残、倒退行走等; b 植物神经系统;瞳孔扩大或缩小,流诞和流泪; 呼吸系统:鼻孔流液、鼻鲤、鼻翼扇动、呼吸深缓、呼吸过速、蜂腰 泌尿生殖系统;会阴部污秽,有分泌物、阴道或乳房肿胀; e 皮肤和被毛;皮肤充血、紫绀、被毛蓬松或潮湿,污秽; 眼;眼球突出、结膜充血,溢血性分泌物,角膜浑浊; fD 消化系统;腹泻、厌食 g 记录出现震颤、抽搐、流涎、腹泻、嗜睡和昏迷的时间、严重程度,死亡时间或恢复时间 濒临死亡和 剧烈痛苦的动物以及试验结束尚存活的动物,应给予人道处死 6.5.2体重称量 分别在染毒前、染毒后(至少每周一次)和处死前称量并记录动物体重 6.5.3病理学检查 试验期间中毒死亡的和人道处死的动物应做大体解剖记录每只动物的大体病理改变 染毒后存 活时间大于或等于24h的动物,其器官显示有大体病理改变,则需进行组织病理学检查,以便获取有关 毒作用的信息 试验结果评价 LD值是受试物毒性分级和标签标识的依据 急性经口毒性分级按照《农药登记资料规定》中
GB/T15670.2一2017 3.3.2.8的相应标准判定 评价试验结果时,应考虑LD与观察到的毒性效应(包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致 死效应及其他毒性作用)的发生率和严重程度之间的关系 引用LD.值时要注明所用实验动物的种 属、性别,染毒途径和观察期限等 8 试验报告 试验报告至少应包括以下内容: a 试验名称,试验单位名称和联系方式、报告编号 b 试验委托单位和联系方式、样品受理日期和封样情况; 试验开始和结束日期试验项目负责人,试验单位技术负责人,签发日期; c d 试验摘要; 受试物名称、有效成分美国化学文摘登录号(CAs号)(如已知),代码(如有),纯度(或含量入、 剂型、生产日期批号,理化性质,配制所用溶剂和方法 实验动物的种属品系、级别、数量体重、性别,来源(供应商名称,实验动物质量合格证号,实 f 验动物生产许可证号),检疫、适应情况,实验动物饲养环境,包括温度、相对湿度、饲料、单笼饲 养或群养、实验动物设施许可证号 剂量和组别;包括选择剂量的原则或依据、动物分组方式,性别和动物数; g h)试验条件和方法;包括主要仪器设备、染毒途径、染毒方案、试验周期、观察指标和得到LD.的 方法等 试验结果:以文字描述和表格逐项进行汇总,包括临床中毒表现,中毒表现出现、持续和恢复时 间,染毒后出现死亡的时间,体重变化,与剂量的相关性以及大体解剖和组织病理学改变等,指 出结果的统计处理方法; 试验结论;给出明确结论,如LD,95%可信区间和毒性分级,必要时对有关问题进行讨论; lk)原始记录保存情况的说明
GB;/T15670.2一2017 附 录 A 规范性附录 霍恩氏法几何剂量的估计LD.值和95%可信区间表 表A.1适用于每组5只动物,剂量递增公比为/的估计LD,值和可信区间 A.1 1.00 2.15XIo'=0,士1,土2,士3,即10×=21.5,21.5×V=48.4,其余依此 4.64 类推 表A.1 D=0.464 D =1.00 D=2.15 D，=1.00 D. 4.64 ×10 ×10 ×10 D=2.15 D =4.64 D=10.o 或 D=10.0 D=4,64 D=21.5 LDa 可信区间 LD0 可信区间 lD0 可信区间 2.00 1.37一2.91 4.30 2.95一6.26 9.26 6,.36~13.5 1.71 .262.33 3.69 2.71~5.01 7.94 5.8410.8 1.47 6.81 3.16 2.00 1.233.24 4.30 2.65~6.98 9.26 5.7015.0 1.71 1.052.78 3.69 2,27~5,99 7.94 4.8912.9 0,951一2.27 2.054.88 6.81 4.41一10.5 .47 3.16 2.几1 1.26 0.9261.71 2.00~3.69 5.84 4.307.94 .71 1.012.91 3.69 2.176.28 4.67~13.5 7.94 0.8622.50 1.86~5.38 6.81 4.0013.5 .47 3.16 2.1 1.26 0,.775~2.05 1.694.4l 3.60~9,50 5,84 1.08 0.7411.57 1.603.99 5.01 3.44~7.30 .33 2n 1.26 0,7402.14 1.594.62 5.84 3.439,95 1.03 0,6651.75 1.43一3,78 5.01 3.08一8,14 .33 4.22 1.96 1.223.14 2.63~6.76 9.09 5.6614.6 1.622 1.072.43 2.31~5.24 4.98~11.3 7.50 3.48 2.87 1.33 .051.70 2.26~3.65 6.19 4.877.87 4.2 1.96 1.06~3.6o 2.29~7,75 4.94~16.7 9,09 3.8 1.622 0,866一3.01 1.87一6,49 7.5o 4.02~16.7 2.87 1.33 0,7372.4l 1.59~5.20 6.19 3.421l1.2 2.37 1.10 0,661~1.883 1.423.95 5.11 3.07~8,.51 1.62 0.8183.19 1.76~6.37 7.50 3.8014.8 3.48 22.87 1.33 0,658~2.70 1.425,82 6.19 3.05~12.5 1.10 0.5502.20 2.37 1.19~4.74 5.11 2.5510.2 1.10 0.5232.32 2.37 1.134.99 5.1m 2.43~10.8 1.90 1.00一3,.58 4.08 2.167,71 8.8o 4.66~16.6
GB/T15670.2一2017 表A.1(续) D=0.464 D =1.00 D=2.15 D.=2.15 D.=l.00 p =4.64 10 ×10 ×10' D=2.15 D =4.64 Dj=10.o 或 D=21.5 D=10.0 D=4.64 可信区间 可信区间 LDn LD0 可信区间 ID. 1.47 0.8062.67 3.16 1.74~5.76 6.81 3.74~12.4 1.14 0.6741.92 2.45 1.45~4.13 5.,28 3.138.89 1.90 0.8394.29 4.08 1.81一9.23 8.80 3.89~19.9 1.47 0.6163.50 1.337.53 6.81 2.86~16.2 3.16 2.45 0.466一2.77 1.00~5.98 2.16~12.9 1.l4 5.28 1.47 0.5733.76 3.16 1.248.10 6.81 2.66 2.45 1.14 o.406~3.18 0.8756,85 6.28 1.89 1.96 1.18一3.206 4.22 2.537.02 9.09 5.46 15. 1.62 1.272.05 3.48 2.744.42 7.50 5.909.53 1.96 0.978~3.92 4.22 2.118.44 9.09 4.54~18.2 1.62 00.8932.92 3.48 1.92一6.30 7.50 4.14~13.6 1.33 0.885~2.01 2.87 1.914.33 6,19 4.119,33 1.96 0.9304.12 4.22 2.008.88 9.09 4.31~19.1 1.62 0.7973.28 3.48 1.72~7.06 3.70~15.2 7.50 1.33 0.7152.49 2.87 1.54一5.36 6.19 3.32 1l.5 1.10 0.6861.77 1.483.80 3.198.19 2.37 5.1 2.87 6.19 1.33 0.676一2.63 1.46一5.67 3.1412.2 2.37 1.10 0.5992.02 1.294.36 5.11 2.78~9.39 1.90 0.9693.71 2.09~7.99 4.50- 4.08 8.80 1.47 1.022.11 3.16 2.20一4.54 6.81 4.749,78 1.90 0.7574.75 4.08 1.63~10,2 8.80 3.5122.0 1.47 0.6543.30 3.16 1.41l一7.1o 6.81 3.03~15.3 1.14 0.5812.22 2.45 1.254.79 5.28 2.70~10.3 1.90 0.706~5.09 4.08 1.52~11.0 8.8o 3.28~23.6 1.47 0.5643.82 3.16 1.218.24 6.81 2.62~17." 2.s 1.14 0.454~2.85 0.9776,13 2.11~13.2 5.,28 2.45 1.14 0.4233.05 0.9126.57 5.28 1.97 14.2 1.78 0.6624.78 1.43~10.3 8.25 3.0722.2 3.83 2.61 1.21 0.5832.52 1.26一5,42 5.62 2.71 3.83 1.78 0.4556.95 0.98015.0 2.1l32.3 8.25 2.91 1.21 0.3274.48 0,7059.66 5.62 1.52~20.8 1.78 0.4107.72 3.83 0.883l6.6 8.25 1.9035.8 1.21 0.266~5.52 2.61 0,.573~11.9 1.23~25.6 5.62 1.90 1.123.20 4.08 2.42一6.89 8.80 5.22~l4.8 1.90 0.7774.63 4.08 1.679,97 8.80 3.6021.5
GB;/T15670.2一2017 表A.1续 D=0.464 D =1.00 D=2.15 D,=2.15 D，=l.00 D.=4.64 1o ×1oy ×10' D =2.15 D =4.64 D;=10.o 或 D=21.5 D=10,0 D，=4.64 可信区间 LD0 可信区间 LD0 可信区间 lDn0 1.47 0.8062.67 3.16 1.745.76 6.81 3.74~12.4 1.90 0.6785.30 4.08 1.46~11.4 8,.80 3,1524.6 1.47 0.616一3.50 3.16 1.33~7.53 6.81 2.86~16.2 1.14 0,6022.15 1.304.62 5.28 2.799,96 22.45 3.16 0.573~3.706 1.24~8.10 6.81 2.66~17.4 1.47 2.45 1.14 0.5032.57 1.08~5.54 5.28 2.33~1l1.9 3.83 1.78 0,856~3.69 1.85~7.96 8.25 3.98~17.1 1.78 0.481一6.58 1.0414.2 8.25 2.23一30.5 .83 2.61 1.21 0,4513,25 0,9727.01 5,62 2.0915,1 1.78 0.390~8.11 3.83 0.840~17.5 8.25 1.81一37.6 1.21 0.3104.74 2.61 0.668~10.2 5.62 1.44~22.0 1.21 0,.279~5.26 0.602~11.3 5.62 1.30~24.4 2.61 注ri,r,"),，代表四个剂量组死亡动物数;D,D,D,D为儿何级数的四个递次剂量 A.2表A.2适用于每组5只动物,剂量递增公比为I的估计LD值和可信区间 1.0o ×10' '=0,士1,士2,士3,即10×V/I0=31.6,31.6×VT=100,其余依此 3.16 类推 表A.2 D=0.316 D=1.00 3.16 D. D. 1.00 r ×1o' ×10y D 3.16 D 10.0 或 D一3al. D 10.0 LD 可信区间 LD0 可信区间 2.82 1.604.95 8.91 5.0715.7 2.24 1.41~3.55 4.47~11.2 7.08 1.78 5.62 2.82 1.36~5,84 8.91 4.3018.5 2.24 1.084.64 7.08 3.42~14.7 1.78 0.9273.41 5.62 2.93l0.8 0,.8912.24 2.82~7.08 1.41 4.17 2.24 1.01一4.97 7.08 3.1915.7 1.78 0,8013.95 5,62 2.,5312.5 1.41 0.6822.93 4.47 2.16~9.25
GB/T15670.2一2017 表A.2(续) D=0.316 D=1,00 D 3.16 D. 1.00 r" ×1oy ×1oy D 3.16 D. 10.0 或 D J.6l 10.0 D r？ 可信区间 LD. LD0 可信区间 1.12 0.6381.97 3.55 2.026.24 1.41 0,6363,14 4.47 2.019,92 1.12 0.5422.32 3.55 1.717.35 2.74 1.35~5.56 8.66 4.2617.6 1.11一3.80 3.5112.0 2.05 6.49 1.54 1.072.21 4.87 3.406.98 2714 8.66 1.10~6,82 3.48~21.6 2.05 0,.8065.23 6.49 2.5516.5 1.54 4.87 0,6323,75 2.00~11.9 1.15 0.5372.48 3.65 1.707.85 2.05 0.7405.70 6,49 2.3418.0 1.514 0,5344.4 1.6914. 4.87 1.15 0.4083.27 3.65 1.2910.3 .15 0,3783.53 3.65 1.20~11.2 2.61 1.01一6.,77 8.25 3.18一21.4 1.78 0.7234.37 2.2913.8 5.62 1.21 0.5542.65 3.83 1.758.39 2.6i 0.7688.87 2.43~28. 8.25 0,4846.53 1.5320." 1.78 5,62 1.21 0.3184.62 3.83 1.00~14.6 1.78 0,4347.28 5,62 1.37~23,0 1.21 0,.2595.67 3.83 0.81917.9 274 1.275.88 8.66 4.0318.6 2.05 4.539.31 6.49 l,432.94 2.714 0.9687.75 8.66 3.06~24.5 2.05 0,8435.00 2.67~15.8 6.49 1.54 0.8332.85 4.87 2.63~9.01 274 0.8968.37 8.66 2.8326.5 2.05 0.,7115.93 6.49 2.2518.7 1.54 0.6043.92 1.9112.4 4.87 1.15 0,5682.35 3.65 1.807.42 1.54 0.5554.27 4.87 1.76~13.5 0,4632.88 3.65 1.479,10 1.15 2.61 0.9537.15 8.25 3.01一22.6 1.78 1.033.06 5.62 3.279.68
GB;/T15670.2一2017 表A.2(续 D=0.316 D=1.00 3.16 D. D. 1.00 ×1o ×10 D 3.16 D 10.0 或 D=10.0 D=31.6 LD 可信区间 LD0 可信区间 2.61 0.658~10.4 8.25 2.0832.7 1.78 0,5285,98 5,62 1.67~18.9 1.21 0.4423.32 3.83 1.40~10.5 2.61 0.594~1l1.5 8.25 1.8836.3 0.423~7.48 1.34一23.6 1.78 5.62 1.21 0.3054.80 3.83 0.966~15.2 0.,2765.33 0.871~16.8 1.21 3.83 7.50 2.37 0.53910.4 1.7033.0 心 1.33 0,4463.99 1.41~12.6 750 2.37 0.30718.3 0.970一58.0 4.2 1.33 0.1879,49 0.59230.0 石3 0.,26221.4 0.830~67.8 2.37 、 1.33 0.13713.0 0.43341.0 c 2.61 1.19~5,71 3.77~18. 8.25 2.61 0.6849.95 2.16~31.5 1.78 0.7234.37 2.2913.8 5.62 8.25 2.61 0.558~12.2 1.76一38.6 5.62 1.78 0.484~6.53 1.5320.7 3.83 0,4673,14 1.48~9.94 1.21 1.78 0.4347.28 5.62 1.37~23.0 1.21 0,3564.12 3.83 1.13~13.0 2.37 0.7937.10 7.50 2.5122.4 7.50 2.37 0.33316.9 1.05~53.4 1.33 0.3035,.87 0.958~18.6 4.22 2.37 0.244~23.1 7.50 0.77173.0 0,172~10.3 4.22 1.33 0.54532.6 1.33 0.14812.1 4.22 0.46738.1 注r,rr,厂 代表四个剂量组死亡动物数;D,D.,D,D为几何级数的四个递次剂量

农药登记毒理学试验方法第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法GB/T15670.2-2017

农药登记毒理学试验方法第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法GB/T15670.2-2017是我国针对农药毒理学进行的一项标准化试验方法，该方法主要评估农药对人体的急性经口毒性。

霍恩氏法是一种常用的急性经口毒性试验方法，其主要原理是将一定剂量的农药通过动物口腔给予，观察动物在一定时间内的生理状况变化，以此来评估农药的毒性。在试验中，通常使用小鼠、大鼠、兔子等不同动物进行试验。

在试验过程中，需要根据试验要求制定合理的试验计划和程序，以确保试验结果的准确性和可靠性。同时，在试验中需要对动物进行详细的观察记录，包括试验前后的体重、食欲、毒性反应等方面的变化，从而评估农药的急性经口毒性。

在实际应用中，农药登记毒理学试验方法第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法GB/T15670.2-2017已被广泛采用。该方法具有操作简单、数据易于处理、试验周期较短等优点，是一种有效的评估农药毒性的方法。

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