GB/T15670.4-2017
农药登记毒理学试验方法第4部分：急性经口毒性试验概率单位法
Toxicologicaltestmethodsforpesticidesregistration—Part4:Acuteoraltoxicitytest—MillerandTaninter'smethod
- 中国标准分类号（CCS）B17
- 国际标准分类号（ICS）65.100
- 实施日期2018-02-01
- 文件格式PDF
- 文本页数9页
- 文件大小572.62KB
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农药登记毒理学试验方法第4部分：急性经口毒性试验概率单位法
国家标准 GB/T15670.4一2017 部分代替GB/T156701995 农药登记毒理学试验方法 第4部分:急性经口毒性试验 概率单位法 Toxieologiealtestmethodsforpestieidesregistratio- Part4:Aeuteoraltoxicitytest一MillerandTaninter'smethod 2017-07-12发布 2018-02-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T15670.4一2017 本部分起草单位;农业部农药检定所
本部分主要起草人;贺锡雯,张丽英,曲瞥赘、陶传江
本部分所代替标准的历次版本发布情况为 GB/T156701995
GB;/T15670.4一2017 农药登记毒理学试验方法 第4部分:急性经口毒性试验 概率单位法 范围 GB/T15670的本部分规定了急性经口毒性试验概率单位法的基本原则、方法和要求
本部分适用于为农药登记而进行的急性经口毒性试验
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB14925实验动物环境及设施 农药登记资料规定(农业部令[2007]第10号 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 急性经口毒性 acute0ralt oxieity -次或在24h内多次经口给予实验动物受试物后,动物在短期内出现的健康损害效应 3.2 剂量dose 所给受试物的量,以实验动物单位体重所接受受试物的质量表示(mg/kg体重)
3.3 半数致死剂量medianlethaldose LD -次或在24h内多次给予实验动物受试物后,引起实验动物总体中半数死亡的毒物统计学剂量.
以实验动物单位体重接受受试物的质量表示(mg/k体重. 3,4 剂量-反应关系dose-responserelationship 剂量与特定效应的发生率间的关系
试验目的 忽性经口毒性试验是评借农药毒性的第一步,通过短时间经口染毒初步了解受试物的毒性特征 剂量-反应关系,为急性毒性分级、标签管理和其他毒理学试验剂量选择提供依据
GB/T15670.4一2017 5 试验概述 概率单位法(MillerandTaninter'、methodt)亦称目测法或对数概率单位绘图法
以灌饲法经口 给各试验组动物不同剂量的受试物
染毒剂量的选择可通过预试验确定
染毒后观察动物的毒性反应 和死亡情况
试验期间死亡动物要进行尸检,试验结束时仍存活的动物应人道处死并进行大体解剖
6 试验方法 6.1受试物 受试物可配制成水溶液、油溶液或悬浮液
尽可能选用水或食用油(如玉米油)作溶剂,其他如叛甲 基纤维素钠、明胶和淀粉可将受试物配制成混悬液或糊剂
除水以外的溶剂,用前应了解其毒理学特 性,必要时设立溶剂对照组
不同浓度受试物现用现配
一次染毒容量不超过1nmL/100体重,水溶 液可达到2mL/100g体重
通过调整受试物溶液的浓度,使各剂量组经口染毒的容量一致
如果一次 染毒容量太大,也可在24h内分2次~3次给予
6.2实验动物 6.2.1种属和性别 啃齿类动物中可选用sD大鼠或Wistar大鼠
两种性别,雌性动物应是未妊娠和未经产的
6.2.2年龄和体重 健康成年大鼠鼠龄在8周一10周内,体重变异不超过同性别动物平均体重的士30%
按随机原则 进行分组
6.3分组和剂量水平 要有足够不同剂量的试验组,至少3个剂量(通常设4个5个剂量),每组动物10只,雌雄各半 各剂量的组间距应使各试验组产生不同程度的毒性反应和死亡率,一般以0.65一0.85为宜
所得数据 应能绘出剂量-反应曲线并能测出LDm
剂量选择可采用较大组距和较少动物进行预试验
如果受试 物毒性很低,也可采用一次限量5000mg/kg体重染毒
6.4饲养环境和条件 饲养环境和条件应符合GB14925的有关规定
喂饲常规动物饲料,饮水量不限
试验前动物应 在饲养环境中至少检疫、适应3d
6.5试验步骤 6.5.1试验前的准备 试验前,大鼠禁食过夜,不限制饮水
若采用代谢率高的其他动物,禁食时间可以适当缩短
6.5.2预试验 可查阅有关资料和文献确定预试验剂量
如无法获得毒理学信息,一般采用10mg/kg体重 100 mg/kg体重和1000mg/kg体重三个剂量,每个剂量经口染毒2只3只动物
染毒后24h内 0mg/kg体重和100mg/kg体重剂量组动物未出现死亡,而1000mg/kg体重剂量组动物全部死亡"
GB;/T15670.4一2017 终止试验
可确定正式试验的剂量系列在100mg/kg体重和10001 mg/kg体重之间 6.5.3正式试验 6.5.3.1试验前,称量动物体重,随机分为4个5个组,各组动物数不一定要求相等,但不少于10只
6.5.3.2在预试验中得到的两个剂量之间设计4个5个等比剂量
尽管本方法不要求剂量组间呈等 比关系,但等比剂量可使各点距离相等,有利于作图
6.5.3.3以灌胃方式给各组动物一次染毒不同剂量的受试物,若容积太大,也可在24h内分2次3次 染毒给予
染毒后继续禁食3h一4h 6.5.4限量试验 如确认受试物毒性很低,可采用一次限量5000mg/kg体重,给10只动物雌雕雄各半)染毒,观察 14d,如未引起动物死亡,可不再进行多个剂量的正式试验
6.6试验观察和检查 6.6.1临床观察 在染毒后24h(特别在染毒后30min内和第一个4h)以及14d的观察期内,每天定时观察并详细 记录每只动物的中毒反应
临床观察至少包括 中枢神经系统和神经肌肉系统;体位异常、叫声异常、不安、呆滞,震颤,抽搐、麻痹,运动失调、 对外反应过敏或迟钝,异常行为如过度反复抓挠口周、梳理、转圈,甚至自残、倒退行走等; 植物神经系统;瞳孔扩大或缩小,流涎和流泪; b 呼吸系统;鼻孔流液、鼻翼扇动,呼吸深缓,呼吸过速、蜂腰 d 泌尿生殖系统;会阴部污秽,有分泌物阴道或乳房肿胀; e 皮肤和被毛;皮肤充血、紫绀、被毛蓬松或潮湿、污秽; 眼;眼球突出、结膜充血、溢血性分泌物,角膜浑浊; 消化系统;腹泻、厌食
8 记录出现震颤、抽搐、流涎、腹泻嗜睡和昏迷的时间、严重程度,死亡时间或恢复时间
濒临死亡和 剧烈痛苦的动物以及试验结束尚存活的动物,最终应给予人道处死
6.6.2体重称量 应分别在染毒前,染毒后(至少每周一次)和处死前称量并记录动物体重
6.6.3病理学检查 在试验期内中毒死亡的和人道处死的动物应做大体解剖,记录每只动物的大体病理改变
染毒后 存活时间大于或等于24h的动物其器官显示有大体病理改变,则需进行组织病理学检查,以便获取有 关毒作用的信息
试验结果和评价 7.1结果计算 7.1.1将各组按剂量及动物死亡百分率在对数概率纸上作图
除死亡百分率为0%和100%者外,也可 将剂量转变成对数,根据百分率查反应率-概率单位表见附录A)得到其相应的概率单位,在方格算术 纸上作图
c
GB/T15670.4一2017 7.1.2由于0%和100%死亡率在理论上不存在,为了作图的需要,按附录B将0%和100%换算成概率 单位近似值
7.1.3根据剂量对数及概率单位在方格算术纸上作点连线,纵坐标(y)为概率单位,横坐标(.c)为剂量 对数
在概率单位5处作一水平线与直线相交,再由相交点向横坐标作一垂直线,在横坐标上的交点即 为剂量对数值,再求反对数致死量LD.值
7.1.4标准误按式(1)计算 sSE=2s/v2N" 式中 SE 标准误; 2s LD与ID之差,LD及LD的剂量均可从所作直线上找到; N -概率单位3.5一6.5之间(反应百分率为6.793.7之间)各组动物数之和
7.1.5LD计算方法除上述对数概率单位绘图法外,还可采用寇氏法(Karber'smethod),改良寇氏 法、维尔氏法(Weil'smethod)和Bliss氏法(Bliss'smethod)
Bliss氏法被认为是最精确的方法,试验 设计不要求每组动物数相同,剂量组距相等,现已有Biss氏法计算软件,按电脑提示操作即可
7.2结果评价 LD值是受试物毒性分级和标签标识的依据
急性经口毒性级别按照《农药登记资料规定》中3.3.2.8 的相应标准判定
评价试验结果时,应考虑LD与观察到的毒性效应(包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致 死效应及其他毒性作用)的发生率和严重程度之间的关系
引用LD.值时一定要注明所用实验动物的 种属、性别、染毒途径和观察期限等
8 试验报告 试验报告至少应包括以下内容 试验名称、试验单位名称和联系方式,报告编号 a b 试验委托单位和联系方式.样品受理日期和封样情况 试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期; e 试验摘要; d 受试物名称、有效成分美国化学文摘登录号(CAs号)(如已知)代码(如有),纯度(或含量 剂型、生产日期(批号、理化性质、配制所用溶剂和方法 实验动物的种属品系、,级别、数量、体重、性别,来源(供应商名称,实验动物质量合格证号,实 f) 验动物生产许可证号),检疫、适应情况,实验动物饲养环境,包括温度,相对湿度、饲料、单笼饲 养或群养、实验动物设施许可证号 剂量和组别;包括选择剂量的原则或依据,动物分组方式,性别和动物数; 试验条件和方法;包括主要仪器设备、染毒途径、染毒方案、试验周期、观察指标和计算ID.的 h) 方法等 试验结果;以文字描述和表格逐项进行汇总,包括临床中毒表现,中毒表现出现、持续和恢复时 间,染毒后出现死亡的时间,体重变化,与剂量的相关性以及大体解剖和组织病理学改变等,指 出结果的统计处理方法; 试验结论:给出明确结论,如LDa、95%可信区间和毒性分级,必要时对有关问题进行讨论 k 原始记录保存情况的说明
GB;/T15670.4一2017 附 录 A 规范性附录 反应率-概率单位表 表A.1反应率-概率单位表 反应率 2.67 2.95 3.12 3.25 3.36 3,45 3.52 3.60 3.66 10 3.72 3.77 3.83 3.87 3.92 3,96 4,01 4.05 4,09 4.12 20 4.16 4.19 4.23 4.26 4.29 4.33 4,36 4.39 4.42 4,45 4.48 44.50 4.53 4.56 4.59 4.62 4.67 4.70 4.72 30 4.64 4.75 4.7？ 4.8o 4.82 4.85 4.87 4.90 4.93 4.95 4.98 40 50 5.00 5.03 5.05 5.08 5.10 5.13 5.15 5.18 5.20 5.23 60 5.25 5.28 5.31 5.33 5.36 5.39 5.40 5.44 5.47 5.50 5.55 70 5.52 5.58 5.61 5.64 5.67 5.7 5.74 5.77 5.81 80 5.84 5.88 5.92 5.95 5.99 6.04 6.08 6.13 6.18 6.23 90 6.28 6.34 6,41 6,48 6,56 6,65 6,75 6.88 7.05 7.33
GB/T15670.4一2017 录 附 B 规范性附录) 反应率0%及100%的概率单位的近似值 表B.1反应率0%及100%的概率单位的近似值 反应率 反应率 每组动物数 每组动物数 0% 100% 0% 100% 12 3.85 6,15 2.97 7.03 13 3.62 6,38 2.93 7.07 3.47 6.53 14 2.90 7.10 15 3,.36 6.64 2.87 7.13 16 3.27 6.73 2.85 7.15 3.20 6.80 17 2.82 7.18 18 3.13 6.87 2.80 7.20 3.09 6.91 19 2.78 7.2 10 3.04 6,96 20 2.76 7.24 3.00 7.00
农药登记毒理学试验方法第4部分：急性经口毒性试验概率单位法GB/T15670.4-2017
农药是防治农作物病虫害和杂草的一种化学制剂，但其不当使用会对环境和人类健康造成影响。因此，为了保障公众健康和安全，农药必须进行严格的检测和评价。农药登记毒理学试验方法第4部分：急性经口毒性试验概率单位法GB/T15670.4-2017就是其中的一项重要试验。
定义
急性经口毒性试验是指通过口服农药后对动物进行观察和记录，以确定其对人类健康的危害程度的试验。概率单位法是根据试验动物的死亡情况，通过计算其死亡率来评估农药毒性的方法。
试验原理
急性经口毒性试验概率单位法主要包括以下步骤：
- 选取试验动物：通常使用小白鼠、大鼠或兔子等动物作为试验对象。
- 制备试验药液：按一定剂量将待测农药与适当的溶剂混合制成试验药液。
- 给予试验动物农药：将试验药液灌入试验动物体内，观察和记录其反应情况。
- 观察和记录结果：观察试验动物的行为、外观等变化，并记录其死亡时间和数量。
- 计算LD50值：根据死亡动物数量和总体数目，通过概率单位法来计算农药的LD50值。LD50表示半数动物死亡所需的农药剂量。
实验步骤
按照GB/T15670.4-2017标准规定，进行急性经口毒性试验的具体步骤如下：
- 选取不同年龄、性别和品系的小白鼠作为试验动物。
- 准备试验药液：将农药粉末称取一定量，加入适量的溶剂中，并充分搅拌均匀制备成试验药液。
- 给予试验动物农药：按照规定的剂量将试验药液灌入试验动物体内。
- 观察和记录结果：每天观察试验动物的行为、外观等变化，记录死亡动物的时间和数量。
- 计算LD50值：根据试验结果，通过概率单位法计算LD50值，以评估农药的毒性。LD50值越小，说明农药的毒性越大。
综上所述，农药登记毒理学试验方法第4部分：急性经口毒性试验概率单位法GB/T15670.4-2017是评价农药毒性和安全性的重要手段之一。通过该试验，可以对农药进行科学、客观的评价，保障公众健康和环境安全。
