油菜籽中芥酸及硫苷的测定分光光度法

油菜籽中芥酸及硫苷的测定分光光度法

国家标准 GB/T23890一2009 油菜籽中芥酸及硫苷的测定分光光度法 Rapiddeterminationoferueicaeidandglucosinolateinrapeseed一Photommetry 2009-05-26发布 2009-10-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T23890一2009 油菜籽中芥酸及硫苷的测定分光光度法 范围 本标准规定了油菜籽中芥酸,硫苷含量测定的分光光度法 本标准适用于双低油菜种子和商品籽中芥酸、硫苷含量的快速检测 本方法的最低检出限;芥酸为0.5%,硫苷为10Amol/g 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB5491粮食、油料检验托样、分样法 (GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 3.1 芥酸eruecieaeid 油菜籽油中所含顺A-二十二碳一烯酸,以所占脂肪酸组成的百分率表示 3.2 硫苷glucosinolate 油菜籽中所含硫代葡苟糖苷,简称硫苷,以每克饼粕或每克油菜籽中所含硫苷总量的微摩尔数 表示 原理 芥酸测定原理 油菜籽油中芥酸含量不同,在聚乙二醇辛基苯基酥乙醇溶液中形成的浊度不同,根据浊度与芥酸含 量的相关关系测定芥酸含量 硫苷测定原理 油菜籽中硫苷与米曲霉硫代水解酶反应生成硫苷降解产物,和邻联甲苯胺乙醇溶液反应生成有特 征吸收峰的有色产物,采用光度法测定硫苷含量 试剂 除非另有规定,使用试剂均为分析纯试剂 5.1水,GB/T6682,二级 55 超纯水,GB/T6682，一级 5.3聚乙二醇辛基苯基酥(CHaO)乙醇溶液:l0mg/ml 称取10.0g聚乙二醇辛基苯基雕用无 水乙醇溶解并定容至1000mL 5.4硫酸二氢钾KH,PO,)溶液:0.1mol/儿 称取1.36g磷酸二氢钾用蒸僧水溶解并定容至 100ml
GB/T23890一2009 5.5pH为6.0的buffer溶液:0.5mg/mL米曲霉硫甫水解酶和0.1mol/L的K,HPO于纯水中定 容,在pH计上用稀H,PO调节pH值为6.0,冰箱中冷藏备用 5.60.62g/mL的邻联甲苯胺;称取0.62g邻联甲苯胺充分溶解于无水乙醇中,定容至1L 贮藏 于棕色瓶中,冰箱中冷藏,于一周内使用 5.7油菜籽硫苷测试板';使用96孔板,试剂为pH为6.0的buffer溶液和0.62mg/ml的邻联甲苯 胺溶液 仪器设备 6.1微孔板光度计:参见附录A 6.2脂肪制备器;参见附录B 6.3微型粉碎机 6.4恒温箱 6.5天平;量程0~200g,感量10mg 6.6可调微量移液器;200L 6.7微量移液器:1000L 取样 按照GB5491执行 取样时,应清除样品外来杂质 样品含水量大于13%时,需风干或50C烘干 至水分小于13% 分析步骤 8.1芥酸测定 预先将石英比色杯和20mL超纯水置于32C士0.5C恒温箱(6.4)中预热恒温 8.1.2取5g一8g油菜籽(第7章)倒人脂肪制备器,制取油样,用取油管收集,静置备用 8.1.3称取0.30g油样于50mL具塞三角瓶中,用移液管加人25mL聚乙二醇辛基苯基酥乙醇溶液 (5.3),旋紧塞子,用力振摇,充分混匀后,放人32C士0.5C恒温箱(6.4)中保温15nmin. 8.1.4在恒温箱内,用微量移液器(6.7)将1000L恒温至32C的超纯水(5.2)加人三角瓶,边滴加 边摇动三角瓶,旋紧塞子后摇匀,随即倒人比色杯,用微孔板光度计(6.1)进行芥酸测定,测定值即为油 菜籽芥酸含量 8.2硫苷测定 8 .2.1取油菜籽样品约3g5g(第7章),用微型粉碎机或研钵磨碎,细度40目 8. .2.2称取0.50g粉碎样品,置于5mL具塞试管,用移液管加人3ml水(5.1),塞紧塞子,充分混匀 后室温下放置8nmin 8.2.3 用脱脂棉过滤,或离心机(so0r/min)离心5min.,取上清液50L加人到硫苷测试板孔(G.7) 内,静置8min,用微量移液器(6.6)加人150L磷酸二氢钾溶液(5.4)后再静置2min. 8.2.4微孔板光度计测定硫苷,作空白调零后测定值即为每克饼粕或每克油菜籽中所含硫苷总量的微 摩尔数(Amol/g) 同一样品进行两次重复测定,测定结果取算术平均值 袖菜籽碱苷测试板是由农业部油料及制品质量监督检验测试中心提供的产品的商品名称 给出这一信息是为 1 了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可 如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效 产品
GB/T23890一2009 精密度 9.1芥酸 芥酸含量大于5%时,两次平行测定结果绝对相差不大于1.0%;芥酸含量小于5%时,两次平行测 定结果绝对相差不大于0.5% 9.2硫苷 饼粕中硫苷含量两次平行测定结果绝对相差不大于8.0amol/g 油菜籽中硫苷含量两次平行测定结果绝对相差不大于4.0Amol/g
GB/T23890一2009 附 录A 资料性附录 微孔板光度计 微孔板光度计参数如下: 光源;卤钨灯;测量范围:0.001一3.500Abs;精确度;士1%或士0.001Abs; 重复性;一0.5%一0.5%;稳定性;<0.005Abs;线性度:一1%一1%;波长:450nm士10nm 微孔板光度计原理如图A.1所示 探测器， 放大器， 显示 A/D 单片机 变换器 打印 8 探测器 放大器 ROM RAM 键盘 时钟 电源 注:下标A为硫武测定系统，下标B为芥酸测定系统 图A.1微孔板光度计原理图
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