GB/T15670.24-2017
农药登记毒理学试验方法第24部分：两代繁殖毒性试验
Toxicologicaltestmethodsforpesticidesregistration—Part24:Two-generationreproductiontoxicitystudy
- 中国标准分类号（CCS）B17
- 国际标准分类号（ICS）65.100
- 实施日期2018-02-01
- 文件格式PDF
- 文本页数8页
- 文件大小632.98KB
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农药登记毒理学试验方法第24部分：两代繁殖毒性试验
国家标准 GB/T15670.24一2017 部分代替GB/T15670一1995 农药登记毒理学试验方法 第24部分:两代繁殖毒性试验 Ioxsieologiealtestmethodsforpestieidesregistration Part24:Twogenerationreprduetiontoxieitystudy 2017-07-12发布 2018-02-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T15670.24一2017 修改了观察指标的内容(见6.4.4,1995年版的16.11). 本部分由农业部提出并归口
本部分起草单位:农业部农药检定所
本部分主要起草人;李宁,张丽英、陶传江
本部分所代替标准的历次版本发布情况为 GB/T156701995
GB/T15670.24一2017 农药登记毒理学试验方法 第24部分:两代繁殖毒性试验 范围 GB/T15670的本部分规定了两代繁殖毒性试验的基本原则、方法和要求
本部分适用于为农药登记而进行的两代繁殖毒性试验
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
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GB14925实验动物环境及设施 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
3. 繁殖毒性reproduetietosieity 受试物引起的亲代雌性或雄性繁殖功能损伤或生殖能力下降
3.2 发育毒性developmentaltoxicity 接触受试物的妊娠动物的子代在出生前、围产期和出生后所表现出的机体缺陷或功能障碍
试验目的 用于检测受试物对雌性和雄性动物繁殖功能的影响,如性腺功能、发情周期、交配行为、妊娠、分娩、 哺乳和断乳以及子代的生长发育等
并可提供有关受试物发育毒性的信息,如出生缺陷、死亡和畸 形等
试验概述 S 将雌雄动物各分成几个剂量组,为评价受试物对精子生成的影响,染毒期限为亲代雄性动物(P)至 少覆盖一个完整的精子形成周期(小鼠约56d,大鼠约70d)
亲代雌性(P)动物至少为两个完整的发 情周期
此后,交配动物(P)均给予受试物,雌性亲代妊娠期持续给予受试物直至F1代断奶
F1代断 奶后持续给予受试物,从子代F1的青春期、成熟期、交配,子代F2的出生直至F2代断奶以评价受试 物的两代繁殖毒性效应
GB/T15670.24一2017 6 试验方法 6.1受试物配制 灌胃给予时,根据不同受试物的特性选择合适的溶剂或介质,通常首选溶剂为水
不溶于水的受试 物可使用食用油如橄榄油、玉米油等),不溶于水或油的受试物可使用叛甲基纤维素钠、淀粉等配成混 掺人饲料给予时,要将受试物与饲料或水混匀并保证受试物配制的稳定性,应进行稳定性、含量 悬液
和均一性的测定
受试物惨人何料或水时,应不影响倒料背养质量和水的平衡 -般在饲料中的掺人量 不超过饲料浓度的5%
6.2实验动物 6.2.1种属和周龄 首选大鼠和小鼠
不可使用繁殖率低和/或发育缺陷发生率高的品系
常用雌雄动物为初断乳 4周5周,试验开始时动物体重差异不应超过同性别平均体重的土20%
所用动物应注明种类,品系、 性别、体重和周龄
6.2.2动物性别和数量 雕性和雄性动物通常按1:1或2:1比例合笼交配,每个剂量组和对照组至少能获得20只孕鼠 以评价受试物对两代动物繁殖过程的影响,包括对亲代动物繁殖能力、怀孕、妊娠行为和哺育过程的影 响,对子代F1从出生到成熟期以及对子代2从出生到断乳期生长发育的影响 6.2.3饲养条件 实验动物饲养条件应符合GB14925的有关规定
实验期间自由饮水和摄食,妊娠动物应单笼 饲养
6.3剂量及分组 试验至少设三个剂量组和一个对照组
高剂量组应使亲代动物出现明显的毒性反应,但不引起动 物的死亡
如果发生不期望的死亡,亲代动物(P)死亡率应小于10%
中间剂量可引起轻微的毒性反 应,低剂量不引起亲代和子代任何毒性反应
当掺人饲料染毒时,如果食物摄人量和利用率降低,则需 考虑设配对饲养对照组
如果受试物毒性较低,预期在1000mg/kg体重剂量不可能对繁殖产生任何毒性影响或在高剂量 的预试验中有母体毒性但未观察到发育毒性时,则可不必设定三个剂量
对照组为溶剂对照组或介质 对照组,除不给予受试物外,其余处理均与剂量组相同
6.4操作步骤 6.4.1染毒途径和时间 根据受试物的特性或试验目的,可将受试物混人饲料、灌胃或饮水给予
首选掺人饲料给予,如果 灌胃染毒,每日灌胃一次,时间地点应相同,并定期按体重调整灌胃量,以维持染毒剂量不变
灌胃量 般不超过10mL/kg体重,各组灌胃体积一致
动物染毒时间,以大鼠为例,初断乳4周5周的雌雄大鼠染毒8周后进行交配,交配期最长持续 2周,雌性动物妊娠、哺乳期继续染毒至仔鼠断乳为止,雄性动物染毒至交配结束为止
染毒时间见 表1
GB/T15670.24一2017 表1大鼠两代繁殖毒性试验程序表 试验周期 子二代(F2) 亲代(P -代(Fl 3周末 出生 !周一6周 母乳喂养 基础饲料喂养 7周 8周15周 染毒 16周~17周 交配(染毒 17周末 处死雄鼠 8周一20周 妊娠染毒 20周末 出生 21周一23周 哺乳(染毒》 母乳喂养(每窝留雕雄各4只 24周 处死 基础饲料喂养 25周32周 染毒 33周34周 交配(染毒 34周末 交配结束,处死雄鼠 35周37周 妊娠(染毒 37周末 出生 38周一40周 母乳喂养(每窝留雌雄各4只) 40周末 断乳后全处死 6.4.2交配程序 6.4.2.1 亲代交配 雌鼠应与同一剂量组的雄鼠按1:1或2:1的比例进行同笼交配,直至怀孕或2周交配期结束
每天查看雌鼠阴道有无精子或阴栓
将查到阴栓或精子的当天计为雕鼠妊娠的第0天
如交配失败 可以将不孕的雕鼠与同组中已证明有生育能力的雄鼠重新交配
预计已怀孕的雕鼠应分开放人繁殖笼 中,孕鼠临产时应提供筑巢的垫料
6.4.2.2F1代交配 大鼠F1代出生后至少应长到13周(小鼠为11周)才能进行交配,交配时,从F1代每窝中随机选 择雌性,与同剂量组中不同窝的雄性动物以1:1或2:1的比例进行交叉配对繁殖F2代,未被选做交 配的F1代在断乳后处死
6.4.3每窝仔鼠数量的标准化 每窝仔鼠于出生后第4天调整至相同数量，一般每窝8只,雌、雄各4只,雌或雄不足4只,则总数 留取8只
原窝中多余的仔鼠应随机抽出,而不应按体重选择
F2代按同样的方法进行调整
每窝的 幼仔数小于8只时,则全部留取
GB/T15670.24一2017 6.4.4观察指标 6.4.4.1 临床观察 每日观察动物,包括行为改变、难产或滞产等所有的中毒表现
6.4.4.2体重和摄食量 在交配前和交配期,每周测量食物消耗量,在妊娠期每天测量食物消耗量,母鼠应在受孕的第0天 第7天、,第14天和第21天称重
产仔后哺乳期,食物消耗量和仔鼠称重应同一天测量,仔鼠称重应于 出生第0天,第4天,第7天、第14天和第21天进行,出生第0天和第4天以窝称重
如通过饮水给予 受试物,则每周测量饮水量
亲代应在染毒的第一天称重,以后每周称重一次
6.4.4.3精子检查 交配结束时,处死所有亲代和F1代,取睾丸和附睾并称重,每种器官要保存1个,以备组织病理学 检查
采集亲代附睾的精子进行检查,在显微镜下观察精子的活动性、形状及数量,可只检查对照组和 高剂量组的亲代和子代雄鼠的精子形状,每个动物至少检查200个精子
6.4.4.4子代观察 分娩后第1天应尽快对仔鼠进行观察,记录每窝出生数.活产数、死产数以及幼仔外观有无异常和 畸形
6.4.4.5大体解剖观察 在试验期间死亡或试验结束处死的所有亲代和成年子代F1动物均应进行大体检查,肉眼观察有 无组织和形态上的改变,要特别注意生殖系统器官的改变
对死亡或濒临死亡的仔鼠也应检查,查看是 否有外观或器官形态的缺陷
并对子宫、卵巢、睾丸、附睾、前列腺、脑、肝、肾、脾和已知的靶器官等进行 称重
6.4.4.6组织病理学检查 保留上述所有亲代和子代动物的子宫,卵巢、阴道、睾丸、附睾、精囊,前列腺、脑垂体和靶器官(如果 已知其靶器官)等标本,先对高剂量组和对照组的动物标本以及剖检中发现的异常动物标本进行组织病 理学观察,如果高剂量组没有发现有意义的改变,则不需要进行其他剂量组标本的组织病理学检查
6.44.7其他检查 必要时,根据受试物的性质及所观察的毒性反应,增加神经系统和神经行为等敏感检测指标
试验结果和评价 7.1繁殖指数 交配成功率,受孕率、活产率、出生存活率、生存率、哺育存活率等分别见式(1)式(6). 交配成功动物数 交配成功率一 100% 用于交配的雌性动物数 怀孕动物数 受孕率一 ×100% 用于交配的雕性动物数
GB/T15670.24一2017 分娩有活体幼仔的动物数 活产率 ×100% 怀孕动物数 出生时活的任鼠数 出生存活率 100% 出生时仔鼠总数 出生后第4天仔鼠存活数 生存率 100% X 出生时活的仔鼠数 21天断乳时任鼠存活数 哺育存活率一 ×100% 出生后第4天仔鼠存活数 7.2数据处理 数据用表格表示,表中应列出每组实验动物数、能生育的雄性动物数和受孕的雌性动物数、各种毒 性反应及繁殖指数(交配成功率、受孕率、活产率、出生存活率、生存率和哺育存活率)等
对所有数据用 适当的统计方法进行分析
7.3结果评价 对试验组和对照组所有观察指标包括体重、摄食量、大体解剖和组织病理学检查结果、各繁殖指数 进行统计学分析,观察有无显著性差异和剂量-反应关系以确定受试物的繁殖毒性,同时根据某一指标 的差异进一步评价繁殖毒性的损害作用特点
报告内容 试验报告至少应包含以下信息 试验名称,试验单位名称和联系方式、报告编号; aa 试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期和封样情况 b 试验开始和结束日期,试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期; c 试验摘要 d 受试物名称,有效成分美国化学文摘登录号(CAs号)(如已知)、代码(如有)、纯度(或含量 剂型、生产日期(批号)、理化性质、配制所用溶剂和方法; 实验动物种属,品系、级别、数量、性别、体重、周龄、来源(供应商名称,实验动物质量合格证号、 实验动物生产许可证号),检疫、适应情况,实验动物饲养环境,包括温度、相对湿度、饲料,单笼 饲养或群饲,实验动物设施使用许可证号 剂量和组别;包括选择剂量的原则或依据,剂量和组别、动物分组方式和每组每种性别动物数; g 试验条件和方法;包括主要仪器设备、染毒途径、染毒方案、试验周期、观察指标等; h 试验结果:体重(亲代体重、子代体重)和摄食量、繁殖指数(交配成功率,受孕率,活产率、出生 存活率、生存率和哺育存活率、脏器重量和组织病理学检查结果、任何有关繁殖和子代及其后 期生长发育的毒性信息、精子检查信息等; 结论;受试物对亲代及其后代作用的未观察到有害作用剂量水平(NOAEL)和观察到有害作 用最低剂量水平(LOAEL),明确受试物有无繁殖毒性 kk 原始记录保存情况的说明
农药登记毒理学试验方法第24部分：两代繁殖毒性试验GB/T15670.24-2017
化学农药在农业生产中得到了广泛应用。为了保证农产品质量和安全，各国都制定了相关法规和标准，要求对农药进行毒理学试验。农药登记毒理学试验方法第24部分：两代繁殖毒性试验GB/T15670.24-2017是中国制定的一项农药毒理学试验标准，旨在评价农药是否对生殖系统具有潜在毒性影响。
两代繁殖毒性试验是通过观察试验动物两代繁殖过程中的发育异常情况来评价化学物质对生殖系统的影响。这种试验方法能够反映化学物质对动物生殖系统的潜在毒性影响，以及对下一代的影响。
GB/T15670.24-2017标准规定了两代繁殖毒性试验的具体操作方法和技术要求。其中包括试验前的准备工作、试验设计、试验操作流程、试验结果判定标准等内容。试验过程中需要对试验动物进行饲养、处理、观察和记录等工作，并对实验数据进行统计和分析。
该标准的实施可以评估农药的生殖毒性，为农药的安全使用提供科学依据。同时，该标准也可以作为其他化学物质的生殖毒性试验参考。
总之，农药登记毒理学试验方法第24部分：两代繁殖毒性试验GB/T15670.24-2017是一项重要的农药毒理学试验标准，可以评价农药是否对生殖系统具有潜在毒性影响。各相关企业和机构应该严格遵守该标准，加强农药生产和使用中的安全管理，以保护公众的健康和环境的安全。
