饲料中苯巴比妥的测定

饲料中苯巴比妥的测定

国家标准 GB/T20363一2006 饲料中苯巴比妥的测定 Determinationofphenobarbitalinfeed 2006-09-01实施 2006-06-09发布 国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T20363一2006 饲料中苯巴比妥的测定 范围 本标准规定了以高效液相色谱(HPLc)仪和气相色谱-质谱(GC-Ms)仪测定饲料中苯巴比妥的方 法,规定GC-Ms法为伸裁法 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中苯巴比妥的测定 HPILC法的最低检出量为 5.0ng(取样5g时,最低检测限为0.10mg/kg),GC-MS达最低检出量为0.25ng(取样5g时,最低检 测限为0.02mg/kg) 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(neqIS3696 GB/T14699.1饲料采样 方法1:HPLC法 3.1原理 用三氧甲烧将饲料中的苯巴比妥溶出,经净化、萃取、浓缩后,用甲醉溶解,在HPLc仪上分离 测定 3.2试剂和材料 除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂 3.2.1水.,GB/T6682中二级 3.2.2三氧甲烧 3.2.3甲醇 3.2.4氢氧化销溶液[cNaOH约0.45molL]18长氢氧化钠溶于10o0ml水中 3.2.5磷酸:85%. 3.2.8HPI.c流动相.v水)(3.2.1)十v乙膀(用前过0.45pm谴膜)=筋十35,用前超声脱气 3.2.7苯巴比妥标准溶液 3.2.7. 储备液;准确称取100,00mg苯巴比妥标准品(含HON，不少于98.5%)于50ml容 量瓶中,用甲醉(a.2.3)溶解,并定容至刻度,该溶液为每毫升含紫巴比妥200g 储于冰箱中,有效 期半年 3.2.7.2工作液:用微量移液器移取储备液(3.2.7.1)500L用甲醇(3.2.3)定容于50mL容量瓶、 该溶液为每毫升含苯巴比妥20.00pg,储存于冰箱中备用 3.2.7.3标准系列:用移液器移取工作液(3.2.7.2)1.0、2.0,5.0、10.00、15.00mL于50mL容量瓶 以甲醉(3.2.3)稀释定容,该标准溶液系列中苯巴比妥的相应浓度为0.40,0.802.00、4.00、 6.004g/ml,储存于冰箱中备用 3. .3 仪器与设备 3.3.1实验室常用仪器设备 3.3.2分析天平:感量0.0001g
GB/T20363一2006 3.3.3实验用振荡器 3 .3.4具塞三角瓶;100mL 3.3.5分液漏斗:150mL 3.3.6旋转蒸发器;带100mL,200m梨形瓶 3.3.7高效液相色谱仪:具有C柱或类似的分析柱和紫外(UV)检测器或二极管阵列检测器 3.4试样的制备 按GB/T14699.1方法采样,选取饲料样品至少500g,四分法缩减至少100g,磨碎,通过0.42mm 孔筛,混匀,装人密闭容器中,保存备用 3.5分析步骤 3.5.1提取 称取适量试样(配合饲料5g,预混料和浓缩料2g),精确至0.0001g,置于100ml 具塞三角烧瓶 中,加人25mL三氧甲婉(3.2.2)充分振摇,于振荡器上提取30min,过滤,滤渣返回瓶内,再用25ml 三氯甲炕重复上述操作两次,合并滤液用三氯甲炕定容到100mL 3 .5.2净化及浓缩 移取50mL三氯甲婉提取液(3.5.1)置于200mL梨形烧瓶中,在旋转蒸发器(3.3.6)上于50C蒸 干溶剂,残渣加10mL氢氧化钠溶液(3.2.4),充分振荡后,用磷酸(3.2.5)酸化调pH23后,转人分液 漏斗中,每次用10mL三氯甲烧反提取共三次,弃去水相,将三次三氯甲烧提取液转人150mL.梨形烧 瓶中,于旋转蒸发器上,蒸干溶剂 3.5.3测定 3.5.3.1溶解 于净化、蒸干溶剂的残渣试样中准确加人1.00mL2.00mL(V)甲醉(3.2.3),充分振摇,超声,使 残渣溶解,过0.45um的滤膜,清液上机测定,用苯巴比妥标准系列(3.2.7.3)进行单点或多点校准 3.5.3.2HPLC测定参数设定 色谱柱:C柱,长250mm,内径3.9mm,粒度4Am,或类似的分析柱; 柱 温;室温; 流动相:V(乙睛)+Vv(水)=35十65(见3.2.6); 速l.0mL/min 流 检测器:UV检测器或二极管阵列检测器; 检测波长:210nm; 进样量;20l一50L 3.5.3.3定性,定量方法 定性方法;除用保留时间定性外,还可用二极管阵列检测器测定苯巴比妥紫外光区的特征光谱 试 样的特征光谱应与标准品的特征光谱一致(在相同的保留时间处). 定量方法;积分记录峰面积,用单点或多点校准法定量 3.6分析结果的表述 3.6.1试样中苯巴比妥的含量按式(1)计算 m100 ×V X= 5 l 式中 x -试样中苯巴比妥的含量,单位为毫克每千克(mg/kg) HPLC色谱峰的面积对应的苯巴比妥的质量,单位为微克(4g); m ， -所称取的试样质量(3.5.1),单位为克(g) V -溶解残渣的总体积,单位为毫升(mL).
GB/T20363一2006 3.6.2每个试样取两份试料进行平行测定,以其算术平均值为测定结果,保留三位有效数字 3.7重复性 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的20% 以大于这两个测定值的算术平均值的20%情况不超过5%为前提 方法2:GC-MS法(仲裁法 原理 用三氯甲婉将饲料中的苯巴比妥溶出,经净化、萃取、浓缩后,在GC-MS联用仪上分离、测定 4.2试剂和材料 4.2.1提取净化用试剂 同HPLC法中3.2.13.2.5 4.2.2苯巴比妥标准溶液 42.2.1备液20op/nl同Hc达中3.2.了.1. 4.2.2.2工作液;20.00pg/ml.同HPlLc法中3.2.了.2. 标准系列用微量移液器分别移取工作液(4.2.2.2)125,250,5001000,2500L 于10mL. 容量瓶中,用甲醇(3.2.3)稀释定容,该标准系列中苯巴比妥的相应浓度分别为,0.25,0.50,1.00,2.00、 /mL,贮于冰箱中备用 5.00 4g/ 4.3仪器、设备 4.3.1样品前处理设备同HPLcC法3.3.1~3.3.6 4.3.2Gc-MS联用仪;装有弱极性或非极性的交联毛细管柱的气相色谱仪和具电子轰击离子源及检 测器 试样制备 4 4. 同3.4 4.5分析步骤 4.5.1提取 同3.5.1 4.5.2净化及浓缩 同3.5.2. 4.5.3测定 4.5.3.1溶解 同3.5.3.1 4.5.3.2Gc-MS测定参数设定 色谱柱;弹性石英键合相毛细管色谱柱SE-54,长30m,直径0.25mm,壁厚0.25m:; 载 气:氨气(99.999%); 柱头压:l00kPa; 进样口温度:260C; 进样量ll.不分流" 柱温程序:120C保持1nmin,以20C/min的速度升至260C,于260C保持15min EI源电子轰击能:70eV 离子源温度:200C; 接口温度:250C; 质量扫描范围60AMU~250AMU 溶剂延迟 2 min;
GB/T20363一2006 特征质谱峰;m/2为89、117,204、232 4.5.3.3定性定量方法 定性方法;试样与标准品质谱特征峰对照可信度大于90% 定量方法;单点或多点色谱峰面积校准法定量 4.6分析结果的表述 4.6.1苯巴比妥的含量按式(2)计算 100 X-"义 V 2 50 mna 式中: x 试样中苯巴比妥的含量,单位为毫克每千克(mg/kg) -GC-Ms色谱峰的面积对应的苯巴比妥的质量,单位为微克(4g); na -所称取的试样质量(4.5.1),单位为克(g); m V 溶解残渣的总体积,单位为毫升(mL 4.6.2每个试样取两份试料进行平行测定,以其算术平均值为测定结果,保留三位有效数字 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的20%、 以大于这两个测定值的算术平均值的20%情况不超过5%为前提