郁金香黄色疱斑病菌检疫鉴定方法

郁金香黄色疱斑病菌检疫鉴定方法

国家标准 GB/T28106一2011 郁金香黄色瘪斑病菌检疫鉴定方法 DetectioandidentificationofCurtobaeterium2 fIaccumfacienspw.oortiCollins&Jones 2011-12-30发布 2012-06-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T28106一2011 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口 本标准起草单位;天津出人境检验检疫局 本标准主要起草人:郭京泽、魏亚东、张裕君、刘跃庭、刘鹏、罗加凤、廖芳,王金成
GB/T28106一2011 郁金香黄色疤斑病菌检疫鉴定方法 范围 本标准规定了郁金香黄色庖斑病菌的检疫鉴定方法 本标准适用于栽培及其他用途的郁金香球茎,郁金香植株上郁金香黄色瘪斑病菌的检疫和鉴定 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 食品卫生微生物学检验 GB/T4789.282003 染色法、培养基和试剂 sN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 郁金香黄色瘪斑病菌基本信息 中文名;郁金香黄色疤斑病菌 学名:Cwrtoacleriumlaccumlacienspvy.oorli 8 异名:Corynebacteriumlaccum/acienspv.oortiSaltink& MaasGe eesteranus1969)Dye Kemp1977, .Coryeucteriulacumhaeiensubsp oori(Salink&MaasGesteranus1969) Carlson&.Vidaver1982,Cor rynebacteriumoortiSaaltink&.MaasGeesteranus1969 病害英文名;tulipbaeterialcanker ,tulipyellowpustule. 属原核生物界Proearyotes,厚壁菌门Firmieutes,厚壁细菌纲Firmibacteria,短小杆菌属Curtobae ter7771 该病菌随带病球茎调运远距离传播 带病球茎通过无性繁育将该病菌传播给子球 植株间通过带 菌病叶扩散传播 郁金香黄色疤斑病菌其他信息参见附录A 方法原理 从病部样品中分离病菌并纯化,然后通过革兰氏染色、生理生化测定进行该病原细菌的鉴定 郁金 香黄色庖斑病菌的寄主范围、病害症状特征、生物学特性、生理生化特性(参见附录A和附录B)是该病 菌的检疫鉴定依据 仪器,设备 生物显微镜、超净工作台、高压灭菌锅、恒温培养箱、八道移液器,BOL.OG细菌自动鉴定系统 试剂和培养基 无水乙醇、微量发酵管,革兰氏染色液
GB/28106一2011 523培养基;蛋白陈8g,酵母粉4g,硫酸镁MgSO7H,O)0.3g,蔗糖(CHOm)10g,磷酸氢 二钾(K,HPO)2g,琼脂18g,水(H.O)1000ml 调整pH值至7.0~7.1,121C湿热灭菌201 mln BUG培养基 对照菌株 已知标准菌株作阳性对照菌 选用本属不同种的菌株作为阴性对照菌 检测鉴定 8.1现场检测 按照SN/T2122的规定进行检疫并抽取样品 若发现郁金香病株矮化,叶片出现银灰色斑，上下表皮开裂,茎杆内部变黄,球茎最外层鳞片上出现 白色斑,在球茎储藏后期病斑隆起变黄(参见A.3),应取样带回实验室做病菌分离鉴定 8.2病原菌分离 取带病样品,用脱脂棉蘸取75%乙醇擦拭表面,晾干或用灭菌水冲洗3次 切取病健交界部位组 织置于灭菌的精养m中加少量灭菌生理盐水.,用玻棒雕碎,用接种环能取慧液在;23培养基平板上进行 划线分离 每个样品接种不少于3个平板 接种后的平板置于30C培养箱中培养24h一72h,检查出 现的菌落情况 8.3分离菌的纯化 观察523培养基平板上产生的菌落,有黄色、有光泽、圆形,边缘整齐,直径1nmm1.5mm的菌落 为可疑菌落 挑取单个可疑菌落,在523培养基平板上划线,接种后的平板置于30C培养箱中培养24h一72h 般连续转接2次3次可得到纯化的分离菌 8 革兰氏染色 按GB/T4789.282003中2.2规定的方法进行 8.5生理生化测定 从郁金香上分离纯化的细菌经过革兰民染色测定后,若分离菌为革兰民染色阳性菌,则结合实验条 件任选下列一种方法对分离菌进行生理生化测定 -应用B1oL.OG;细菌自动鉴定系统对分离菌进行生理生化测定 按照BIoL.oG细菌自动鉴定 系统规定的操作方法进行,鉴定结果为Curtobacteriumlaccumfaciens,则判定该分离菌的 BOL(OG鉴定结果为阳性; 应用微量发酵管对分离菌进行生理生化测定 测定结果与表B.1结果一致,则生理生化测定 结果为阳性 否则生理生化测定结果为阴性 结果评定 从郁金香上进行细菌分离纯化,若分离菌经过革兰氏染色为阴性菌,则判定检测结果为样品不带郁 金香黄色庖斑病菌
GB/T28106一2011 从郁金香上进行细菌分离纯化,分离菌经过革兰氏染色为阳性菌,BIOLOG鉴定结果为阳性,或用 微量发酵管进行生理生化测定其结果为阳性,则判定检验样品带有郁金香黄色瘤斑病菌 否则判定检 验样品不带郁金香黄色疤斑病菌 10 菌株和样品的保存 分离并鉴定为郁金香黄色庖斑病菌的菌株应转接到523培养基试管斜面上,经登记和经手人签字 后置于4C低温冰箱中保存,定期转接,以防止病菌死亡;必要时冻干后长期保存 检出郁金香黄色庖斑病菌的样品至少保存6个月;保存期满后,需经灭菌处理
GB/28106一2011 附 录A 资料性附录 郁金香黄色瘪斑病菌其他信息 A.1分布 丹麦、荷兰,罗马尼亚,英国,日本、韩国,在我国台湾和杭州有报道 A.2寄主范围 郁金香(Tulipgesneriana A.3危害症状 郁金香黄色庖斑病菌能系统性侵染郁金香,引起郁金香维管束病害,造成郁金香植株叶斑和郁金香 球茎黄色瘤斑 感染郁金香黄色庖斑病菌的郁金香病株严重时可出现矮化症状,叶片出现银灰色斑,上 下表皮开裂,茎杆内部变黄,郁金香球茎最外层鳞片上出现白色斑,在球茎储藏后期病斑隆起变黄 在 春季温度低时易于发病 A.4生物学特性 菌体杆状,大小0.44m~0.6m)×(o.6m 1~3.0m);周生鞭毛,革兰氏染色阳性,最适生长温 度为25C30C 能水解酪蛋白,能利用乳酸、苹果酸、葡萄糖酸、醋酸盐,不能利用阿拉伯糖、山梨 糖、蔗糖,丙酸、甲酸盐
GB/T28106一2011 附 录 B 规范性附录 郁金香黄色瘪斑病菌的生理生化特性 表B.1郁金香黄色瘪斑病菌的生理生化特性 Curtohacerium C，acecfacie1s 项目 C.albiddumC.ci/reumC.luteumC.lanarunC.usillumn flacc4facies pV.butae .or 酪蛋白水解 树胶醛糖产酸 W W W 山梨糖产酸 十w 十W 蔗糖产酸 乳酸同化 ND 苹果酸同化 葡萄糖酸同化 醋酸盐利用 注:十;90%以上菌株为阳性;一;90%以上菌株为阴性;d:l1%89%菌株为阳性;w;弱反应;ND;未测定

郁金香黄色疱斑病菌检疫鉴定方法GB/T28106-2011

郁金香是一种常见的园艺观赏植物，其花朵优美，深受人们喜爱。然而，郁金香黄色疱斑病菌是郁金香的重要病害之一，能够导致郁金香叶片出现黄褐色小斑点，严重时会导致叶片干枯、死亡。为了防止该病菌的传播，对进口和出口郁金香进行检疫是必要的。

根据GB/T28106-2011标准，下面介绍郁金香黄色疱斑病菌的检疫鉴定方法：

样品采集与处理

从进口或出口的郁金香中随机采集5-10片叶子作为样品。将叶片放入干燥无菌袋中，运输至实验室。

病原体分离与培养

取样品叶片，用无菌剪刀将其切碎并加入无菌水中，振荡均匀。用无菌吸管将混合液移植到含有10%马铃薯葡萄糖琼脂和适量青霉素、链霉素的平板上，于25℃下培养2~3天。

鉴定

病原菌单株分离后，进行形态学鉴定，观察其营养生长特征和形态特征，并进行生理生化试验和分子生物学检测，确定其物种类型。

以上就是郁金香黄色疱斑病菌的检疫鉴定方法，希望对大家有所帮助。

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2022/10/27 22:49:31 现行