GB/T34806-2017
化妆品中13种禁用着色剂的测定高效液相色谱法
Determinationof13kindsofprohibitedcolourantsincosmetics—Highperformanceliquidchromatography
- 中国标准分类号（CCS）Y42
- 国际标准分类号（ICS）71.100.70
- 实施日期2018-05-01
- 文件格式PDF
- 文本页数13页
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化妆品中13种禁用着色剂的测定高效液相色谱法
国家标准 GB/T34806一2017 化妆品中13种禁用着色剂的测定 高效液相色谱法 Determinationof13kindsofprohibitedcolourantsincosmeties Highperformaneeliquidchromatography 2017-11-01发布 2018-05-01实施 中华人民共利国国家质量监督检验检疙总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T34806一2017 引 言 本标准的被测物质是我国《化妆品安全技术规范》规定的禁用物质
禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质
《化妆品安全技术规范》规 定:若技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时,应进行安全性风险评估,确保在正常、合理及可 预见的使用条件下不得对人体健康产生危害
目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法
GB/34806一2017 化妆品中13种禁用着色剂的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了化妆品中13种禁用着色剂酸性黄36,酸性紫49,颜料红53、溶剂红49、碱性紫1,分 散黄3,、碱性紫3、颜料橙5、苏丹I、苏丹红、溶剂蓝35、苏丹红、碱性紫10)测定的高效液相色谱法 及其质谱确证方法
本标准适用于唇膏等蜡基类、指甲油类、粉类等化妆品中13种禁用着色剂的定量测定
本标准中13种禁用着色剂的检出限和定量限参见表A.1
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 方法提要 待测样品经四氢吠喃分散,然后加人含有醋酸铵的甲醇-水混合溶液,超声提取目标物,离心并过滤 后,用反相高效液相色谱分离,二极管阵列检测,标准曲线外标法定量
液相色谐法确定为阳性的样品 需经高效液相色谱串联质谱法(HPIC-MS/MS)进行确证
试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,所用水为GB/T6682中规定的一级水
4.1标准物质名称(英文名称),CI号,CAs号,分子式,分子结构式,相对分子质量纯度见表B.1， 4.2四氢吠喃
4.3甲醇
4.4甲醇-四氢喃(1十1)溶液:将四氢吠喃和甲醇(4.3)按照1十1(V+V)的比例混合
4.5甲醇;色谱纯,用于质谱确证时流动相的配制
4.6乙睛;色谱纯
4. 醋酸铵;色谱纯
4.8甲酸;色谱纯
4.9甲醇-醋酸铵水溶液;取醋酸铵0.77g,加人到100mL水中充分溶解,再加人甲醇(4.3)100mL,充 分混匀,制得醋酸铵浓度为50mmol/L的甲醉-醋酸铵水溶液
4.10标准储备溶液的配制称取颜料橙5,分散黄3各10mg(精确至0.1mg),分别用四氢吠喃和甲醉 溶解后,定容至50mL配制成浓度为0.2mg/mL的标准储备溶液
称取颜料红53和苏丹红各 10 mg(精确至0.1lmg),分别用二甲基亚碱和四氢吠喃溶解后,定容至10mL,配制成浓度为1mg/m 儿. 的标准储备溶液
称取其余8种标准物质(除颜料橙5,分散黄3、颜料红53,苏丹红、碱性紫10外)各
GB/T34806一2017 10mg(精确至0.1mg),分别用甲醉溶解后定容至10mL,配制成各目标物浓度为1mg/mL的标准储 备溶液
鉴于碱性紫10实为溶剂红49的盐酸盐,在同一色谱条件下与溶剂红49的出峰时间相同,方 法无法分辨是碱性紫10或溶剂红49,因此配制标准储备液时可根据标准物质情况任选一种配制
4.11标准溶液的配制:准确移取颜料橙5,分散黄3的标准储备液各1ml,其余标准储备液各200L 于同一10ml容量瓶中,用甲醉-四氢吠喃(1十1)定容至刻度,配制成204g/ml的混合标准溶液,再用 甲醉醇-四氢峡喃(1十1)逐级稀释配制5"g/mlL、24g/ml、lg/ml,0.5g/ml,0.2"g/ml的系列混合 标准溶液,用于标准曲线的绘制
5 仪器和设备 5.1高效液相色谱仪-二极管阵列检测器
5.2高效液相色谐串联四级杆质谱仪,配置ESI离子源确证时使用
5.3分析天平;感量0.1mg;0.01mg
5.4漩涡混合器 5.5超声波清洗器
5.6离心机转速不小于5000r/nmin,离心试管容量10mL
5.7移液枪或移液器
6 试样制备 称取待测化妆品样品约0.2g(精确至1mg)于离心管中,加人四氢味喃6mL,涡旋并超声10min 使样品分散并提取目标物(若遇唇膏样品无法分散的情况,可用80C水浴适当加热1min~2min即可 分散),继续向离心管中加人甲醇-醋酸铵水溶液(4.9)约4mL.,使提取溶液定容至10ml,涡旋混匀后 超声10min,然后于5000r/min离心10min
取澄清提取液，经0.45m微孔滤膜过滤后待测
测定步骤 7.1液相色谱分析参考条件 色谱柱:poroshell120ECC(2.7m,3.0mm×100mm)或相当者
流动相;流动相A10mmol/L醋酸铵溶液;流动相B乙腊
柱温:35C;流速:0.5mL/min
进样量:2丝L;检测波长:;416nm、514nm、590nm
梯度洗脱条件;见表1
表1液相色谱分析梯度洗脱条件 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 25 75 62 3 47 20 80 98 14 15 25 18
GB/34806一2017 7.2质谱确证参考条件 7.2.1液相色谱条件 ,3.0 色谱柱:;poroshell120EC-C(2.7m n×100mm)或相当者 mm 流速:0.5L/min
进样量:2L 流动相:流动相A水相溶液(负模式为10mmol/L醋酸铵溶液;正模式为0.033%甲酸溶液);流动 相B有机相溶液(负模式为乙睛-甲醉(6:4);正模式为乙晴. 梯度洗脱条件:见表2
表2液相色谱分离条件 ESI ESI 流动相B/% 流动相A/% 流动相B/% 时间/min 流动相A/% 时间/min 60 60 40 40 50 50 s0 50 15 85 85 8s 15 100 9,5 13 l 100 9,6 10.5 13 12 60 40 0 60 15 40 40 60 40 7.2.2 质谱参考条件 离子源:电喷雾电离源(ESI源)
检测方式;多反应监测(MRM 雾化气:氮气.172.37kPa(25psi). 干燥气;氮气流速:14L/min,温度;250C
碰撞气:氮气
碰撞电压:380V
毛细管电压:4000V
其他质谱参数见表3
表313种目标物的质谱分析参考参数 母离子 子离子 扫描模式 碰撞能量 序号 目标物名称 /二 / 80.0 40 酸性黄36 352.1 ESI 40 155.8 540.1 40 酸性紫49 710.2 EsI 169.8 50 346.8 18 375.0 EsI 颜料红53 204.0 24 399,1 50 溶剂红49 443.2 ESI 355.0 62
GB/T34806一2017 表3(续 母离子 子离子 序号 目标物名称 碰撞能量 扫描模式 m/ m/之 342.1 42 碱性紫1 358.3 ESI 58 326.l 91.7 分散黄3 268.2 ESI 20 133.9 356.1 4 碱性紫3 372.3 ESI 62 340.2 328.1 4 碱性紫3杂质 344.2 ESI 36 237.0 109.0 st 颜料橙5 337.0 ESI 16 166.9 232.0 15 苏丹I 249.1 ESI 0 156.0 121.1 16 10 苏丹红I 277.2 ESI 14 260.l 294.1 溶剂蓝35 351.2 ESI 36 251.0 361.0 20 苏丹红N 379.1 ESI 2 259.8 399.1 50 碱性紫10 443.2 ESI 355.0 62 7.3定性分析 将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱图与标准物质的液相色谱分离谱图 进行比较,若样品谱图中存在保留时间与某标准物质的保留时间一致的色谱峰,并且其扣除背景后的紫 外吸收图谱与该标准物质的紫外吸收图谱一致,则可初步认定样品中存在该物质
经液相色谱法确定 为阳性的样品,应经质谱分析进一步确证
13种禁用着色剂的标准物质液相色谱分离谱图和质谱确证 总离子流质谱图参见图C.1、图C.2和图C.3
注酸性黄36和酸性紫49的色谐峰保留时间基本一致,色谐峰分别出现在416nm和590n波长条件下的紫外 分离图谱中,在这两个波长条件下二者之间无干扰,若两种物质同时存在时,在定性分析时其紫外吸收图谱中 会同时出现二者的特征吸收(最大吸收分别在420nm和592nm附近
7.4定量测定 移取系列标准溶液(4.11),按照色谐条件(7.1)进行高效液相色谱分析,以系列标准溶液质量浓度 为横坐标,峰面积为纵坐标,制作标准曲线
酸性黄36和分散黄3(2种)根据416nm下的紫外吸收进 行定量计算,颜料红53、溶剂红49、颜料橙5、苏丹I、苏丹红I、苏丹红IN、碱性紫10(7种)根据514nmm 下的紫外吸收进行定量计算,酸性紫49,碱性紫1、碱性紫3,溶剂蓝35(5种)根据590nm下的紫外吸 收进行定量计算
注鉴于碱性紫10实为溶剂红49的盐酸盐,在本方法中与溶剂红49的出峰时间相同,方法无法分辨是碱性紫1o
GB/34806一2017 或溶剂红49
除非已知,否则为统一测试结果,建议选择溶剂红49作为标准物质,测试结果则报告以溶剂红49 计的含量
样品溶液中目标物的含量,用标准曲线外标法确定
化妆品样品中目标物的含量X按式(1)进行 计算
c×V X= ×10 n 式中 X -化妆品样品中目标物的含量,单位为毫克每克(mg/g) -从标准曲线中计算出的样品溶液中目标物的质量浓度,单位为微克每毫升(4g /ml); 按稀释倍数折算的被测样液总体积单位为毫升(mL); -称取样品的质量,单位为克(g
m 计算结果保留三位有效数字
若待测溶液中目标物的质量浓度超过校准曲线线性范围的上限,应对待测液进行适当稀释后重新 测定
平行试验 按照所建立的方法操作,对同一样品独立进行测定,获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过 算数平均值的10%
回收率和精密度 在104g/g5004g/g添加水平范围内的平均提取回收率为90%110%,相对标准偏差均小 于10%
GB/T34806一2017 附 录 A 资料性附录) 13种禁用着色剂的检出限和定量限 表A.1给出了13种禁用着色剂的检出限和定量限
表A.113种禁用着色剂的检出限和定量限 检出限 定量限 检出限 定量限 序号 化合物名称 序号 化合物名称 从g/g 4g/g 4g7/g 4g/g 酸性黄36 10 颜料橙5 颜料橙5 l0 酸性紫49 颜料红53 苏丹I 10 1 溶剂红49 溶剂蓝35 碱性紫1 12 苏丹红N 分散黄3 13 碱性紫10 碱性紫3
GB/T34806一2017 表B.1续 标准物质着色剂 相对分子 序号 名称(英 索引号 CAS号 分子式 结构式 纯度 质量 文名称 (CI号 分散黄3 DisperselCI118552832-40-8 269.30 C;HN,O. Yellow3) 碱性紫3 CI42555548-62-9 407.98 CHcCIN Basic Violet3 颜料橙5 338.27 CwHN,O Peme|cI12053468631 Orange5 HO Ho 苏丹I CHN.o CI12055842-07-9 248,28 SudanI >98% 苏丹红I 10 CI1214031l18-97-6 CHN,O 276.33 (Sudanl 溶剂蓝35 cI61554l7354-l4-2 350.45 CaHN,O Solvent Blue35 苏丹红N HC 12 SolventCI2610585-83-6 CHN,O 380.44 Red24 oH 碱性紫10 Rhod 13 CI4517081-88-9 CaHN.O.Cl 380.44 amIne B
GB/34806一2017 附录 C 资料性附录 13种禁用着色剂的标准物质液相色谱分离谱图和质谱确证总离子流质谱图 标准物质液相色谱分离谱图见图c.1
标准物质质谱确证总离子流图(负模式部分)见图c.2
标 准物质质谱确证总离子流图(正模式部分)见图C.3
吸光度/mAU 各波长叠加谱图 13 80 12 60 10 11 40 20 -0 i4时间/min 吸光度/mAU 40 波长=416mm 30 20 10 -10 10 时间/min 吸光度/mAU 4.13 12 40 波长=514nmm sD 20 心 -10. 时间/minm 吸光度/mAU 40 波长=590nm 30 20 10- -10- 时间/min 10 说明: -酸性黄36; 溶剂红49; -碱性紫3; 苏丹I; 12 苏丹红N; -酸性紫49; 碱性紫1; -碱性紫3杂质 0苏丹I; 13 碱性紫10
1 -颜料红53; 分散黄3; 一颜料橙5; 溶剂蓝35; 图C.1标准物质液相色谱分离谱图
GB/T34806一2017 吸光度 60000- 500001 40000 300003 20000 100001 时间/min 说明 -酸性紫49: 酸性黄36:; -颜料红53; 分散黄3; -颜料橙5; -苏丹红N
图c.2标准物质质谱确证总离子流图(负模式部分 吸光度 120000 100000 80000 60000 40000 20000 时间/min 说明: -碱性紫3杂质; 溶剂红49(或碱性紫10) -碱性紫1: -碱性紫3; -苏丹I; -苏丹l; 溶剂蓝35 图c.3标准物质质谱确证总离子流图(正模式部分 10
化妆品中13种禁用着色剂的测定高效液相色谱法GB/T34806-2017
在化妆品生产过程中，着色剂是常见的成分之一。着色剂能够使产品颜色更加漂亮，起到美容作用。但是，由于某些着色剂会引发敏感反应、致癌等问题，为了保障消费者的健康，我国对于化妆品中使用的着色剂进行了严格的管控。 根据GB/T 9711-2008《化妆品安全技术规范》，目前化妆品中禁用的着色剂共有13种。这些着色剂包括：酿酒红、2-硝基-4-氨基苯酚、3-硝基-2-萘酚、3,3'-二氨基联苯、3,3'-二甲基二苯并噻唑-5,5'-二酸、甲基黄、酚红、酞菁绿、铬酸盐系色素、苯基亚胺黄、苯酚甲醛树脂、苯酚氧乙酸树脂以及鱼翅蓝。 为了对这些禁用着色剂进行检测，国家相关机构制定了GB/T34806-2017《化妆品中13种禁用着色剂的测定 高效液相色谱法》标准。该标准通过高效液相色谱法（HPLC）对于这些被禁止使用的着色剂进行检测，以保障消费者的健康和安全。 高效液相色谱法是一种分离、定量有机物质的常见方法。它通过样品在固相材料上的分配过程完成分离，并利用流动相进行洗脱，最终得到所需要的组分。该方法具有操作简单、灵敏度高等优点，适用于复杂物质中多成分的定性和定量分析。 总之，对于化妆品中的禁用着色剂进行检测是非常必要的，可以有效地提高消费者对于化妆品的安全性认知。GB/T34806-2017标准的实施，可以为化妆品行业提供更加严格、科学、可靠的着色剂管控措施。相信在各方的共同努力下，我们能够打造更加安全、放心的化妆品市场。
