牛胚胎

牛胚胎

国家标准 GB/T25881一2010 牛 胎 胚 Bowineembryo 2011-01-10发布 2011-06-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T25881一2010 前 言 本标准的附录A为规范性附录,附录B为资料性附录 本标准由农业部提出 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口 本标准起草单位:北京锦绣大地农业股份有限公司农业部种畜品质监督检验测试中心,北京科润 维德生物技术有限责任公司 本标准主要起草人;张红霞,郭丽丽、刘艳军、,吴亦芳、刘丑生、孙秀柱、张向利,肖静,安晶、孟昭霞、 郭敏,王月、刘佳新、徐敬趁,李继成,王刚、李海洋,沈录智、曹克高,刘颖
GB/T25881一2010 牛 胚 胎 范围 本标准规定了牛胚胎的生产要求.抽样.检测与判定以及包装、标识、贮存和运输等相关内容的技术 要求 本标准适用于奶牛,兼用牛、肉牛的胚胎产品 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T2828.12003计数抽样检验程序第1部分;按接收质量限(AQL)检索的逐批检验抽样 计划 GB/T2828.22008计数抽样检验程序第2部分按极限质量(LQ)检索的孤立批检验抽样 方案 GB/T2828.11一2008计数抽样检验程序第11部分;小总体声称质量水平的评定程序 GB4143一2008牛冷冻精液 GB/T5458液氮生物容器 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 3.1 超低温保存cryopreser SerVation 经特殊方法处理的胚胎放置于-196C(液氮)的超低温度中,使其新陈代谢暂时停止,从而将胚胎 进行长期保存 3.2 胚胎解冻embryothawing 将冷冻保存的胚胎按一定的程序和方法在空气和水浴中融化,并脱除或不脱除冷冻保护剂(如乙二 醇),使胚胎恢复正常的形态和新陈代谢的过程 3.3 胚胎体外培养initroembryoeulture 在模拟体内的环境和条件下,胚胎在体外继续发育的过程 3 胚胎移植embryotransfer 将体内或体外生产的胚胎移植到受体母畜生殖道内,使其继续发育成正常个体的一种繁殖技术 生产要求 种母牛 应具有种用价值,体质健康,无遗传病,无传染病
GB/T25881一2010 4.2种公牛和精液 种公牛应具有种用价值,体质健康,无遗传病,无传染病,其冷冻精液应符合GB4143一2008的 规定 4.3系谱资料 胚胎应具有完整的系谱资料 牛胚胎发育阶段划分及编码标准 牛胚胎发育阶段划分见表1 表1牛胚胎发育阶段划分 发育阶段 形态描述 早期桑樵胚(5d一6dy 在16细胞一32细胞之间,形似桑棋,体积占透明带内腔50%一60% 致密桑樵胚(6d7山) 在32细胞一64细胞之间,细胞团变小,界限不明显,体积占透明带内腔60%一70% 64细胞及以上,内细胞团的一部分出现发亮的囊胚腔,体积占透明带内腔70%~80%,难 早期囊胚(7d~8d 以分清内细胞团和滋养层 囊胚(7d~8d) 内细胞团和滋养层界限清晰,囊胚腔明显,细胞团体积充满透明带内腔 囊胚腔明显扩大,体积增大到原来的1.2倍l.5倍,与透明带之间无空隙,透明带变薄， 8d一9 扩张囊胚(6 相当于正常厚度的1/3 由于囊胚腔继续扩大,致使透明带破裂,细胞团脱出 孵化囊胚(9d~l1d 4.4.2胚胎发育阶段编码标准见附录A 4.5牛胚胎分级评定 牛胚胎分级评定标准见表2,胚胎分级图片参见附录B 表2牛胚胎分级评定标准 质量分级 评定标准 胚胎形态完整,轮廓清晰,呈球形,卵裂球大小均匀,结构紧凑,色调和透明度适中,胚胎 A级 细胞团呈均匀对称的球形,单个卵裂球(或绸胞)的大小,颜色,密度一致,胚胎的发育阶段 与预期的发育阶段一致 透明带光滑,不规则的细胞相对较少,变性绸胞不高于10% 轮席清晰,色调及细胞密度良好,胚胎细胞团的大小和形状以及细胞的颜色和密度存在 B级 -定的不规则,有小部分游离细胞,胚胎的发育阶段与预期的发育阶段基本一致,变性细胞 的比例为10%20% 胚胎细胞团的大小和形状以及细胞的颜色和密度存在严重的不规则 轮廓不清晰,色调 C级 发暗,结构较松散,游离的细胞或泡液较多,变性细胞的比例为30%40% 死亡或退化的胚胎,有碎片、轮廓不清晰、结构松散,变性细胞比例高于50% D级 胚胎质量要求 胚胎产品冷冻前后的质量均应达到B级(含B级)以上为合格 冷冻胚胎细管外观 细管无变形,无裂痕,两端封口严密,标识完整 抽样 5.1生产方抽样检验 生产方和使用方为质量保证概率把关,按照GB/T2828.2一2008中的第4章,采用极限质量 (LQ=31.5),模式A抽样方案检索一次抽样方案确定抽检牛胚胎的样本量
GB/T25881一2010 5.2质量监督抽样检验 质量监督抽样检验按照GB/T2828.11一2008中的第6章,该群体母牛胚胎为一核查总体,声称质 量水平采用QL=4,用第0检验水平抽样方案确定抽检母牛(胚胎)的样本量 5.3复检和仲裁检验 复检根据原抽样方案确定,仲裁需抽样按照5.2规定的方案和6.6的判定规则 检测与判定 6 细管外观 用目测法,其结果应符合4.7中的规定 新鲜胚胎 胚胎形态、质量分级评定结果应符合4.5中的规定 6.3冷冻胚胎 6.3.1冷冻胚胎解冻方法 6.3.1.1器材 恒温水浴锅、实体显微镜 6.3.1.2胚胎解冻液 含6%甘浦,0.1mol几蔗糖PBs胚胎解冻液; 含3%甘油,0.1mol/L蔗糖PS胚胎解冻液; 不含甘油,0.1nmol/L蔗糖PBs胚胎解冻液 PS保存液 6.3.1.3方法 6.3.1.3.1甘油冷冻胚胎解冻 将胚胎细管空气浴10s后置于35C一37C水浴中,浸浴至胚胎冷冻细管彻底溶化 将胚胎依次移人含6%甘油0.1mol/几蔗糖PBs胚胎解冻液,含3%甘油,0.1mol/几蔗糖胚胎 PBS解冻液,不含甘油,0.1mol/1蔗糖PBS胚胎解冻液中,各停留5min,最后用PIS保存液洗3次. 即可进行镜检 6.3.1.3.2乙二醇冷冻胚胎解冻 将胚胎细管空气浴10s后置于35C37C水浴中,浸浴至胚胎冷冻细管彻底溶化,用PBS保存 液洗3次,即可进行镜检 6.3.2冷冻胚胎质量评定 胚胎形态、质量分级评定结果应符合4.4及4.5中的规定 型式检验 检验项目及标准见4.14.7,是在生产方抽样检验,质量监督抽样检验和复检,仲裁检验时所选定 的检验 样品所检验项目中任何一项检验未达到本标准中技术要求的规定,则判为不合格 6.5检验项目及检验周期 每生产批人库、出站检验 6. 6 抽样检验对群体质量水平的判定 6.6.1生产抽样检验的判定 引用GB/T2828.1一2003第3章中Ae为接收数,Re为拒收数,d为不合格品数 对抽取样本检验,按GB/T2828.2-2008中5.2的规定,当dRe,则判不 可接收 6.6.2质量监督抽样的判定 对抽取样本检验,按GB/T2828.11一2008中6.10的规定,当dGB/T25881一2010 本符合要求,判定核查通过,当d>L,则抽检样本不符合要求,判核查总体不合格 包装、标识、贮存和运输 包装与标识 7. 1.1细管材料应无毒、耐低温,细管规格以0.25ml为宜 细管外观应符合4.7的规定 7.1.2细管应有明确的标记,注明品种、数量、发育阶段、质量级别父母品种及注册号、生产日期、生产 单位等,标志上的字迹清晰、完整、准确,并做好存放记录 胚胎发育阶段以编码表示,见附录A的 规定 7.2贮存与运输 7.2.1贮存冻胚和液氮的生物容器,均不可叠放 用液氮生物容器贮存时,细管应完全浸没到液氮中 液氮容器应符合GB/T5458中的规定 移动液氮生物容器时,应轻拿轻放,防止冲撞,震动和倾倒 7.2.2 7.2.3冻胚运输时,应有专人负责途中应及时检查和补充冷源(液氮) 运输过程中注意防挤压、防 冻、防雨淋、防睛.通风散热
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