GB/T31270.21-2014
化学农药环境安全评价试验准则第21部分：大型甲壳类生物毒性试验
Guidelinesonenvironmentalsafetyassessmentforchemicalpesticides―Part21:Macro-crustaceantoxicitytest
- 中国标准分类号（CCS）B13
- 国际标准分类号（ICS）65.100
- 实施日期2015-03-11
- 文件格式PDF
- 文本页数10页
- 文件大小356.12KB
以图片形式预览化学农药环境安全评价试验准则第21部分：大型甲壳类生物毒性试验
化学农药环境安全评价试验准则第21部分：大型甲壳类生物毒性试验
国家标准 GB/T31270.21一2014 化学农药环境安全评价试验准则 第 21部分:大型甲壳类生物毒性试验 Guidelinesonenyirommentalsafety asessmentforchemiealpestieides Part21:Maererustaceantoxieitytest 2014-10-10发布 2015-03-11实施 国家质量监督检监检疫总局 发布 国家标准花管理委员会国家标准
GB/I31270.21一2014 前 言 GB/T31270(化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分 -第1部分:土壤降解试验; 第2部分;水解试验; 第3部分:光解试验; 第4部分;土壤吸附/解吸试验 第5部分 :土壤淋溶试验; 第6部分:挥发性试验; 第 7部分;生物富集试验; 部分;水-沉积物系统降解试验; 第 鸟类急性毒性试验; 第 10部分:蜜蜂急性毒性试验 部分:家蚕急性毒性试验; 部分:鱼类急性毒性试验; 第 部分;蚤类急性活动抑制试验 部分:藻类生长抑制试验; 15部分;蚯蚓急性毒性试验; 第 16部分;土壤微生物毒性试验; 第 部分天敌赤眼蜂急性毒性试验， 第 17 第 18部分;天敌两栖类急性毒性试验; 第19部分:非靶标植物影响试验， 第20部分;家畜短期饲喂毒性试验 第21部分;大型甲壳类生物毒性试验 本部分是GB/T31270的第21部分 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
请注意本文件的某些内容可能涉及专利
本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任
本部分由农业部提出并归口 本部分起草单位;农业部农药检定所、环境保护部南京环境科学研究所
本部分主要起草人;姜锦林,张燕、续卫利,田丰,刘勇,查金苗,刘茜
GB/I31270.21一2014 化学农药环境安全评价试验准则 第21部分:大型甲壳类生物毒性试验 范围 GB/T31270的本部分规定了化学农药对大型甲壳类生物(虾,蟹)毒性试验的材料、条件,操作,质 量控制、数据处理,试验报告等的基本要求
本部分适用于为化学农药登记而进行的大型甲壳类生物毒性试验,其他类型的农药可参照使用
本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药
术语和定义 下列术语和定义适用于本文件
2.1 半致死浓度medianlethalconcentrationm 在急性毒性试验中,引起50%供试生物死亡时的供试物浓度,用LCa表示
注，单位为mga
i /L 2.2 最大可接受毒物浓度maximumacceptabletosieantconcentration;MAIc 全生命周期或部分生命周期的慢性毒性实验得出的对受试生物不造成有害效应的毒物最大浓度或 最大允许毒物浓度,这一数值介于最大无影响浓度(NoEc)和最低有影响浓度(LoEC)之间
2.3 供试物 testSubstance 试验中需要测试的物质
2.4 化学农药chemiealpesticide 利用化学物质人工合成的农药
其中有些以天然产品中的活性物质为母体,进行仿制、结构改造， 创新而成,为仿生合成农药
同义词;有机合成农药ynthetieorganiepestiede [NY/T1667.1一2008,定义2.3.1 2.5 原药techniealmaterial 在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品,不能含有可见的外来物质和任何添加物,必 要时可加人少量的稳定剂
[NY/T1667.2一2008,定义2.5.1] 2.6 制剂formulationproduct 由农药原药(或寻药)和助剂制成使用状态稳定的产品
[NY/T1667.2一2008,定义2.打
GB/T31270.21一2014 有效成分active ingredient;a.i 农药产品中具有生物活性的特定化学结构成分
[NY/T1667.2一2008,定义3.1 2.8 semi-statictest 半静态试验法 试验期间每隔一定时间(如24h)更换一次药液,以保持试验药液的浓度不低于初始浓度的80% 静态试验法statie test 试验期间不更换试验药液
2.10 流水式试验法low-thr Iroughtest 试验期间药液连续更新
试验概述 大型甲壳类生物毒性试验包括急性毒性试验和亚慢性毒性试验方法,根据农药登记管理法规及其 他规定选择相关方法进行试验
大型甲壳类生物急性毒性测定方法有静态法,半静态法与流水式试验 法三种
应根据供试物的性质采用适宜的方法
分别配制不同浓度的供试物药液,急性毒性试验在 96h的试验期间,于试验开始后的24h、48h、72h和96h观察并记录试验用虾或蟹的中毒症状和死亡 数,并分别求出48h和96h的LC值及95%置信限;亚慢性毒性试验推荐试验期限不低于28d,于 7d、14d,21d和28d观察并记录虾或蟹的中毒症状、死亡率,蜕壳率和蜕壳间期体重体长,并计算供 试物对供试生物的MATC范围 试验方法 4.1 材料和条件 4.1.1供试生物 试验用大型甲壳类生物推荐使用日本沼虾(Mac robrachiuipponense)、中华锯齿米虾(Neocar" idinadlenticulata )或中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis)
试验用沼虾的虾龄期为产出后1个月左右,大 小 一致,平均体长(连尾)约2.5cm;试验用米虾推荐使用体长额角尖端至尾柄末端的长度为 0.5cm~0.8cm的米虾幼苗;试验用蟹的蟹龄约为5个月(扣蟹),大小一致,重量约5g
试验前,供试 生物应在实验室条件下预养7d,试验前及试验过程中正常喂食
4.1.2供试物 农药制剂、原药或纯品
对难溶于水的农药,可用少量对生物低毒的有机溶剂、乳化剂或分散剂助 溶,其用量不得超过0.1mL(g)/L 4.1.3主要仪器设备 玻璃缸、容量瓶、溶解氧测定仪.,pH计,温度计,充气泵、温度控制设备等;如用流水式试验方法,可 采用流水式试验装置,但应有供试物储备液连续分配和稀释系统,且该装置应有控温、充气和流量控制 等装置
GB/I31270.21一2014 4.1.4试验用水 试验用稀释水为经活性炭处理,存放并曝气处理24h以上的自来水或能注明配方的稀释水
水质 硬度在10mg/L250mg/儿之间(以CacO计),pH在6.0一8.5之间,溶解氧不应低于空气饱和值 ASV)的60%
4.1.5承载量 静态和半静态试验系统最大承载量为1.0g(受试生物/L,流水式试验系统承载量可高一些 4.1.6试验条件 试验温度(23士1)C,每日光照与黑暗时间比为14h:10h
4.1.7试验期限 急性毒性试验期限一般为96h(根据供试物特性可适当延长观察期),亚慢性毒性试验期限不低于 28 d
4.2试验操作 4.2.1急性毒性试验方法 4.2.1.1方法的选择 应根据农药的特性选择静态试验法、半静态试验法或流水式试验法
如使用静态或半静态试验法、 应确保试验期间试验药液中供试物浓度不低于初始浓度的80%
如果在试验期间试验药液中供试物 浓度发生超过20%的偏离,则应检测试验药液中供试物的实际浓度并以此计算结果,或使用流动试验 法进行试验,以稳定试验药液中供试物浓度
4.2.1.2预试验 一般选择静态试验法,按正式试验的条件,以较大的间距设若干组浓度(如1,10,I00 i./L) mga
每处理组放人虾10尾或蟹10只,不设重复,观察并记录受试虾或蟹48h和96h的死亡情况和中毒症 状
通过预试验求出受试虾或蟹最高全存活浓度及最低全致死浓度,为正式试验确定浓度范围
4.2.1.3正式试验 在预试验确定的浓度范围内以一定几何级差间距(1.5一2.0)设置5个7个浓度组,并设一个稀释 水对照组,使用有机溶剂助溶的增设溶剂对照组,每个浓度组设3个重复
每缸放人虾10尾或蟹 10只，试验开始后6h内随时观察并记录受试虾或蟹的中毒症状及死亡率,其后于24h、48h、72h和 96h观察并记录受试虾蟹的中毒症状及死亡数,及时清除死虾或蟹
每天测定并记录试液温度、pH 及溶解氧
4.2.1.4限度试验 以供试物的最大水溶解度为限度试验浓度(当供试物的最大水溶解度大于100mga
i./L时,以 100mga.i./L为试验浓度进行试验),如供试生物死亡率未超过空白对照组,可判定供试物对供试生 物低毒,则无需继续进行试验
试验结果以LC96h)大于该物质的最大水溶解度或大于100mgai./几 表示
GB/T31270.21一2014 4.2.2亚慢性毒性试验方法 4.2.2.1方法的选择 应根据农药的特性选择半静态试验法或流水式试验法
如使用半静态试验法,应确保试验期间试 验药液中供试物浓度不低于初始浓度的80%
如果在试验期间试验药液中供试物浓度发生超过20% 的偏离,则应检测试验药液中供试物的实际浓度并以此计算结果,或使用流动试验法进行试验,以稳定 试验药液中供试物浓度
4.2.2.2正式试验 根据急性毒性试验结果Lc(96h)确定试验浓度范围，一般选择半静态试验法,以一定几何极差 间距(1.5一2.0)设置5个~7个浓度组,并设一个稀释水对照组,使用有机溶剂助溶的增设溶剂对照组 每个浓度组重复三次
每缸至少放人虾20尾或蟹20只,试验开始后7d、14d,21d和28d观察并记录 虾、蟹的中毒症状和死亡率;每日记录蜕壳次数并及时清除蜕壳,计算蜕壳频率和蜕壳间期;试验开始前 和结束时分别记录虾或蟹的体重体长,计算体重相对增重率和体长相对增长率;ATC可以从上述评 价终点中的最敏感指标来确定
试验期间及时清除死虾、蟹
每天测定并记录试液温度,pl!及游 解氧
4.3数据处理 4.3.1统计分析方法的选择 可采用寇民法、直线内插法或概率单位图解法计算每一观察时间的大型甲壳类生物的半致死浓度 L.C.和95%置信限,也可采用数据统计软件进行分析和计算;最大可接受毒物浓度(MATc)范围可选 择死亡率、蜕壳频率、蜕壳间期、体重相对增重率和体长相对增长率等指标中的最敏感指标来确定,计算 方法参见附录A中A.1
死亡率,蜕壳频率,蜕壳间期、体重相对增重率和体长相对增长率等指标计算 方法参见附录A中A.2
4.3.2寇氏法 用寇氏法可求出大型甲壳类生物24h和48h的LD值及95%置信限
LD.的计算见式(1) logLD(LCa)=X.一i(习P一0.5) 式中 -最高浓度的对数 -相邻浓度比值的对数; 习P各组死亡率的总和(以小数表示). 95%置信限的计算见式(2): .(2 95%置信限=logLDn(LCm)士1.96SlogLDn(LCn 标准误的计算见式(3): 唇" 3 SlogLD.n(L.Cn= 式中 1个组的死亡率; l一p; 各浓度组生物的数量
GB/I31270.21一2014 4.3.3直线内插法 采用线性刻度坐标,绘制试验物质浓度对死亡百分率的曲线,求出50%死亡时的LD值
4.3.4概率单位图解法 用半对数纸,以浓度对数为横坐标,死亡百分率对应的概率单位为纵坐标绘图
将各实测值在图上 用目测法画一条相关直线,从直线中读出致死50%的浓度对数,估算出LD值
4.4质量控制 质量控制条件包括 -预养期间,供试生物的死亡率不得超过20%; -急性毒性试验期间,对照组死亡率不超过10%,且无异常行为出现; -亚慢性毒性试验期间,对照组死亡率不超过20%,且无异常行为出现 -试验期间,试验溶液的溶解氧含量不应低于空气饱和值(AsV)的60%
试验报告 试验报告至少应包括下列内容 供试物的信息,包括供试农药的通用名.化学名称.结构式.cAs号、纯度,基本理化性质,来 源等; 供试生物名称,来源,大小及驯养情况 试验条件,包括试验温度、光照等,定期记录所采用稀释水的温度.溶解氧浓度及pH等; 试验液的浓度及急性毒性试验中LCa(48h),Lca(96h)值和95%置信限,亚慢性毒性试验 中7d,14d、21d.28d的LC、蜕壳频率、蜕壳间期、体重相对增重率和体长相对增长率,最敏 感指标的MATc范围,并给出所采用的计算方法; 对照组虾,蟹是否出现死亡及异常反应 -对大型甲壳类生物的急性毒性等级划分参见附录B
GB/T31270.21一2014 附 录A 资料性附录 毒性计算方法 A.1MATC范围计算方法 大型甲壳类生物慢性毒性试验的MATC范围计算可选择死亡率、蜕壳频率、体重和体长等指标中 的最敏感指标来确定,通过选择合适的统计检验方法比较低供试物浓度和最高供试物浓度下评价终点 的平均值间的显著性差异(p<0.05)来确定MATC范围
参数选择标准可考虑最短暴露期内,和空白 对照组相比出现显著性差异的最低供试物浓度值
MATC数值介于最大无影响浓度(NOEC)和最低 有影响浓度(LOEC)之间
A.2亚慢性毒性试验其他参数计算方法 试验进行28d后对所有虾或蟹称重,试验参数的计算公式见式(A.l)~式(A.5) (A.1 死亡率=100%×(N
一N,)/N 式中: N -试验开始前受试生物的数量; N -试验结束时受试生物的数量
(A.2 NMT=100%×N/N. 式中: MT -蜕壳频率,%; 每日每个水族箱的蜕壳总次数 N 每日每个水族箱的初始受试生物数量 N A.3 IP=习T/N
式中: 蜕壳间期,单位为天(d); 11 -试验持续时间,单位为天(d); -每日每个水族箱的蜕壳总次数
N 体重相对增重率=100%×(w,一w./w (A.4 式中: 试验开始前受试生物的体重 w Ww 试验结束时受试生物的体重
体长相对增长率=100%×(L，一L/L A.5) 式中: 试验开始前受试生物的体长; L 试验结束时受试生物的体长
GB/I31270.21一2014 B 附 录 资料性附录 农药对大型甲壳类生物急性毒性划分 按大型甲壳类生物半致死浓度LC(96h)值,将农药对甲壳类生物急性毒性划分为四个等级,见 表B.1
表B.1农药对大型甲壳类急性毒性的毒性等级划分标准 毒性等级 L.Cn96h/mga.i./L) 剧毒 L.Ca<0. 高毒 0.1
GB/T31270.21一2014 考 文 献 [1]NY/T1667.1一2008农药登记管理术语第1部分;基本术语 [2]NY/T1667.2一2008农药登记管理术语第2部分:产品化学 acutetoxieit EffectsTest [3]USEPA1996)Mysid itytestOCSPP850.1035)Ecolo legiceal theacuetoxieityofeffluentsand Guidelines
USEPA2002)
Methodsfor receivingwa measuring！ terstofreshwaterandmarineorganisms
EPA-821-R-02-012，Washi DC，UnitedStatesof ington America [4]OECD(1992)Guideline203:Fish，acutetoxieitytest，OECDGuidelinesfortheTestinm of ing Chemicals. [5 OECD2004Guideline202:Daphnisp.，aeuteimmobilisation，OECDGuidelinesfor the Testing ofChemicals.
[6]OECD(2012Gudeline211:Daphniamugnareproduetion,OECDGuidelinesfortheTes- ofChemicals ting" 蔡道基
农药环境毒理学研究北京;环境科学出版社
1999.
大型甲壳类生物毒性试验GB/T31270.21-2014的环境安全评价
随着人类对自然资源的不断利用，化学农药成为了现代农业中广泛使用的一种农药。但同时，化学农药也会对生态环境和生命健康造成潜在危害。为了确保化学农药的安全使用，有必要开展化学农药环境安全评价试验。
大型甲壳类生物是海洋生物中的重要代表，包括虾、蟹等。它们在生态系统中扮演着重要的角色。GB/T31270.21-2014是中国标准化协会发布的大型甲壳类生物毒性试验的标准，其中规定如何通过观察和测量实验动物的生理指标、行为和死亡情况来评估化学农药对大型甲壳类生物的急性毒性影响。
这个标准要求在试验中，应该选择不同的实验动物进行毒性实验，并且进行严格的实验室环境控制。同时，化学农药样品也需要经过规范的制备方法才能用于实验。通过对实验结果的分析和评估，可以确定化学农药对大型甲壳类生物的安全使用剂量范围。
同时，在进行化学农药环境安全评价试验时，还有其他类型的试验，如水生生物急性毒性试验、蜜蜂急性毒性试验等。这些试验能够全面评估化学农药对不同生物体系的影响，建立起完整的化学农药环境安全评价系统。
总之，GB/T31270.21-2014的制定对于保障化学农药的安全使用、保护生态环境和维护人类健康都具有重要的作用。通过开展化学农药环境安全评价试验，可以确保化学农药的安全使用，切实保护人类和动物的健康，维护整个生态系统的平衡。
