牛奶和奶粉中八种镇定剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法

牛奶和奶粉中八种镇定剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T22993一2008 牛奶和奶粉中八种镇定剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationofeighttranquilizersresidues nboinemilkandmilkpowder LC-MS-MSmethod 2008-12-31发布 2009-05-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22993一2008 前 言 本标准的附录A,附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口 本标准起草单位;秦皇岛出人境检验检疫局、辽宁出人境检验检 疫局 本标准主要起草人:宋文斌、李一尘、李军、隋凯、董振霖、李百艇、王旭、赵守成、庞国芳
GB/T22993一2008 牛奶和奶粉中八种镇定剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了牛奶和奶粉中乙酰丙嗦(cetopromaizine)、氯丙嗦(chlorpromazin、氟哌醇(halo peridol),丙酰二甲氨基丙盼嚓嗓(propionylpromazine)、甲苯嚷嗓(xylazine),阿扎噪隆(azaperone)及其 代谢物阿扎听醉(azaperol)和阻断剂咔陛心安(carazool残留量的液相色谱-串联质谱测定方法 本标准适用于牛奶和奶粉中乙酰丙嗦、氯丙嗦、氟噪醇、,丙酰二甲氨基丙吩嚷嗓、甲苯嚷嗓、阿扎 哌隆、阿扎噪醇、咔陛心安残留量的测定 本标准方法检出限:牛奶中乙酰丙嗦、氯丙嗦、丙酰二甲氨基丙吩嚷嗦、咔幽心安均为0.54g/L,甲 苯嚓嗓为0.254g/L,阿扎哌隆为0.24g/L,阿扎哌醇为0.154g/L,氟哌醇为0.1g/L,奶粉中乙 酰丙嗦、氯丙嗓、丙酰二甲氨基丙吩嚷嗓、咔陛心安均为4.04g/kg,甲苯嚷嗓为2.04g/kg,阿扎噪隆为 1.64g/kg,阿扎哌醇为1.2g/kg,氟哌唉醉为0.8g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准 然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研 究是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注明日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.I测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 (GB/T6379.1一2004,Is5725-1:1994,IDT GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法GB/T6379.2一2004,IsO5725-2,1994,IDT) GB:/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一2008,IsO3696;1987,MoD) 原理 样品在碱性条件下用特丁基甲酥提取,提取液用磷酸盐缓冲液调成酸性,弃去有机相,水相再调成 碱性用特丁基甲酷净反萃后浓缩定容,进行液相色谱-申联质谱仪测定,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 乙睛:色谱纯 4.2甲醇:色谱纯 4.3无水乙醉色谱纯 4.4盐酸:优级纯 45特丁基甲醒 4.6氢氧化钠 4.7氢氧化钠浴液;5molL 称取50.0只氢氧化钠(4.6)用水溶解,定容到250mL 4.8磷酸二氢钾 4.9磷酸二氢钾溶液:lmol/L,pH=3.0,称取68.045g磷酸二氢钾(4.8)用水溶解,用盐酸(4.4)将
GB/T22993一2008 溶液的pH值调至3.0,定容到500mL 4.10甲酸铵 4.11甲酸:色谱纯 4.12甲酸铵缓冲液;0.1mol/L,pH=4.0,称取6.306g甲酸铵(4.10)用水溶解,用甲酸(4.1l)将 pH值调至4.0,定容至1000ml. 4.13甲酸铵缓冲液:0.01mol/L,pH=4.0,取甲酸铵缓冲液(4.12)100mL 用水稀释定容到 1000ml 4.14流动相A:0.01mol/L甲酸铵缓冲液,pH=4.0(4.13),通过0.2m过滤器过滤 415流动相B;乙睛(4.1)通过0.24m过滤器过滤 4.16流动相C,甲醉(4.2)通过0.2am过滤器过滤 4.17混合流动相;将70mL流动相A,15mL流动相B以及15mL流动相C混合 4.18镇定剂及其代谢物和阻断剂的标准物质:乙酰丙嗓 马来酸,纯度大于等于99%;阿扎哌隆 纯度大于等于99%;咔陛心安,纯度:99%;氧丙嗦盐酸,纯度:99%;氟噪畦醇,纯度大于等于99%; ml 丙酰二甲氨基丙盼嘿嗦 盐酸，纯度.98%甲苯嘿嗓 盐酸,纯度;99%,阿扎眼醉,浓度10.Og/" 甲醇) 4.19八种镇定剂标准储备溶液 4.19.1乙酰丙嗓、阿扎崛隆、咔陛心安、氯丙嗦、氟哌唁醇、丙酰二甲氨基丙吩嚷嗦、甲苯嚷嗦标准储备 /ml 称取适量的上述标准物质(4.18),分别用无水乙醉醇(4.3),配成0.10mg/ml的标 溶液;0.10mg" 准储备液 储备液避光在24C条件下贮存 每年配制一次 4.19.2阿扎噪醇标准储备溶液:l.0g/ml 准确移取1.0ml阿扎咏醇标准液(4.18)于l0ml容量 瓶中,用无水乙醉(4.3)定容至刻度,混匀,配成1.04g/mL的标准储备液 储备液避光在2C4C条 件下贮存 每年配制一次 八种镇定剂混合标准储备溶液;量取适量的6种镇定剂及其代谢物标准储备溶液(4.19.1和 4.20 4C条件下贮存 4.19.2),用乙睛配制成混合标准储备溶液 在2C" 八种镇定剂混合标准工作溶液;根据每种镇定剂及其代谢物的灵敏度和仪器线性范围用空白样 4.21 品提取液配成不同浓度的混合标准工作游液 在2C~4C条件下避光贮存 注，称取标准物的质量是按纯度和含盐量修正过的质量 仪器 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪;配有电喷雾的离子源 电子天平;感量0.1mg和0.1g 5. 2 55 离心机;最大转速为10000r/min. 3 5.4离心管;锥形底玻璃离心管，15ml和10ml.具塞;锥形底聚丙烯离心管,50mL,具螺旋盖 ×13 5 过滤器;聚四氟乙烯过滤器,0.2Am mm;尼龙薄膜过滤器,0.24m×47 5 mma 50 液体分配器,lml" 一10mL和5mL. 5 6 ml 5.7微量移吸器;10l一100nL和100l~1000 5. 8 流动相过滤装置 5.9氨气浓缩仪 10高速涡流混合器 s 11振荡器 5 2 -次性移液管 5.13酸度计:测量精度为士0.02 5.14超声波仪
GB/T22993一2008 15 -次性注射器:lmL 5. 5 16试样瓶;2.0ml 试样的制备与保存 试样的制备 将牛奶和奶粉样品分别混合均匀 各自分出0.5kg作为试样,将分出的试样密封,并作上标记 6.2试样保存 将试样置于4C条件下贮存 测定步骤 7.1提取 牛奶样品 称取牛奶试样2.00mlL精确到0.01mL,放人50ml聚丙烯离心管中,加人200L乙睛进行涡流 混合,混合后加人400Al5mol/1氢氧化钠溶液,并进行涡流混合30s 在80C士5C水浴中放置 1h 在此期间,要对每个测定样品进行两次涡流混合 1h后,将样品从水浴中取出并冷却至室温 加 人12ml特丁基甲酥,置于振荡器上高速振荡15min,离心15min(转速为5000r/min) 吸出上清 液,将特丁基甲腿定量转移到干净的15ml的玻璃离心管内,待净化 7.1.2奶粉样品 称取奶粉样品0.25g(精确到0.01g),放人50nml聚丙烯离心管中,加人1.75g水超声溶解得到 复原乳,加人200L乙睛,以下步骤同7.1.1 7.2净化 在上述15ml离心管中加人lmol/磷酸二氢钾溶液(pH=3.0)3mL,振荡10min,离心10 min 5000r/min) 将特丁基甲腿层吸出弃去 在磷酸盐溶液中加人2ml特丁基甲腿,振荡5min,离心 5min(5000r/min),吸出特丁基甲髅层弃去 然后再在磷酸盐缓冲溶液中加人2ml特丁基甲髅重复 上述步骤 加人1ml5mol/I氢氧化钠溶液摇匀后加人10ml特丁基甲腿,振荡15min,离心5m mln (G000r/'minm) 定量吸取特丁基甲醒转移到一个干净的10ml的离心管中 在40C条件下用氮吹仪 燕发至干 在浓缩至干的提取物中加人1000L流动相溶液(4.17),进行涡流混合,超声处理10min. 用0.2mX13mm的聚四氟乙烯注射式过滤器过滤样液将样液转移到试样瓶中,供液相色谱-串联质 谱测定 7.3 色谱测定 7.3.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下 色谱柱;,nertsiloDs3,5m,l50mmX2.1mm(内径)或相当者; a) b) 柱温;35C; e)进样量;20l; 色谱柱总流量;200nL/min; d 流动相及梯度见表1 e 表1流动相及梯度 步 骤 运行时间/min 流动相A/% 流动相B/% 流动相C/% 15 0,00 70 15 15 4.00 70 40 9.00 15 45
GB/T22993一2008 表1(续 步 骤 运行时间/min 流动相A/% 流动相B/% 流动相C/% 15 50 25.00 35 28.00 20 30 50 15 15 30.00 70 15 15 60.00 70 质谱参考条件 质谱参考条件如下 a)离子源;电喷雾离子源; D) 扫描方式;正离子扫描; 检测方式;多反应检测(MRM) 电喷雾电压(IS);5000V; 雾化气压力(CAs1):482.6kPa; 气帘气压力(cUR):68.9kPa fD 辅助气压力(CAS2);482.6kPa; 中 hh 离子源温度(TEM):700C; 接口加热(ihe);ON; 定性离子对、定量离子对、采集时间(Dwell)、去簇电压(DP)、碰撞气能量(CE)、人口电压(EP 及碰撞室出口电压(cXP)见表2. 表2八种镇定剂的质谱参数 定性离子对 定量离子对 采集时间/去簇电压 碰撞气 人口电压/出口电压 化合物名称 能量y / / ms 327.40/58.20 327.40/58.20 68.00 200 61.00 5.00 0.00 乙酰内嗓 acetopromaizine 327.40/86.20 327.40/86.20 200 61.00 68.00 5.00 15.60 319.30/58,20 319.30/58.20 200 60.00 66.00 10.00 l0.00 氯丙嗓 chlorpromazine 319.30/86.20 319.30/86.20 200 60.00 30.00 10.00 7.00 376,40/165,40o 376,40/165,4o 200 70.00 35.00 11.00 11.00 氟噪嶙醇 376.40/122.90 376.40/122.90 70.00 11.00 11.00 haloperidol 200 57.00 341.20/58.20 341.20/58.20 200 64.00 59.8o 10.60 9.70 丙酰二甲氨 propionylpromazine 341.20/86.30 341.20/86.30 200 64.00 30.00 10.60 15.00 221.30/90.10 221.30/90.10 200 85.00 33.00 11.00 8.00 甲苯咪味 Xylazine" 221.30/164.40221.30/164.40 200 85.00 38.00 11.00 13.00 200 阿扎崛隆 328,40/121.00 328.40/121.00 60,00 30.00 11.00 l10.00 azaperone .4/147,10 328.4/147.1o 200 60.00 30.00 11.00 10,00 328 330.30/121.00 330.30/121.00 200 60.00 35.00 11.00 12.00 阿扎眼醉 330.30/149.10 330.30/149.10 200 60.00 40.00 11.00 12.00 azaperol 330,30/312.20 330.30/312.20 200 60.00 25.00 ll.00 0.00 ll.00 299,50/116.20299.50/116.20 200 83.00 30.00 1l.00 咔陛心安 carazool 299.50/222.40299.50/222.40 200 83.00 30.00 l1.00 6.0
GB/T22993一2008 7.3.3液相色谱-串联质谱测定 7.3.3.1定性测定 按照液相色谱-串联质谱测定条件进行样品溶液测定 如果检出的色谱峰的保留时间与基质标准 中物质相一致,并且所选择的离子均出现,选择1个母离子和2个以上子离子,样品谱图中定性离子的 相对丰度与浓度接近的基质标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较,偏差不超过表3规 定要的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K 20GB/T22993一2008 9.2重复性 在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,牛奶和奶粉中六种镇定 剂及其代谢物的添加浓度范围及重复性方程见表5 表5牛奶和奶粉中八种镇定剂的添加浓度范围及重复性限 和再现性限方程 单位为微克每千克 化合物名称 添加浓度范围 重复性限" 再现性限 R 0.749 -1.113 乙酰丙嗦 gR=0.662lg朋十0.436 0.50一4.00 lg"一 lgm- 0.504.00 尸=0.5971 -1.0663 gR=0.7682l 氧丙嗦 gm十0.4355 gr= lgm 氟噪吭醇 0.100.8o =0.97153lgm-1.39365lgR=0,.92256lgm十0.4471 丙酰二甲氨基丙吩嚷嗓 0.504.00 g"=1.0188lgm-1.4323 lgR=1.5916lgm+2.2075 甲苯嚓嗓 0.252.00 lgr=2.4448一3,9187lgm lgR=3.4365十6.0859lgmn 阿扎噪隆 0.20l.60 lgr=0.6706lgm一-0.1095 lgR=0,6997lgm十0,356 阿扎喉醉 0.151.20 lgr=1.03479lgm-1.0999 lgR=1.106lgm一2.1312 gr=0.3726l =0.4622l 安 咔陛心 5lgm一0.6302 lgR=0 lgm十0,4401 注"为两次测定结果的算术平均值 如果差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 .3 9. 在再现性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，牛奶和奶粉中六种镇 定剂及其代谢物的添加浓度范围及再现性方程见表5
GB/T22993?2008 ?A ?? ?? ????.?A.1 15.90 9.2e5 9. .0e5 8,5e5 8.0e5 7.5es 7.0e5 9.21 6.5e5 13.0o1 6.0e5 5.5e5 5.0e5 4.5e5 4.Oeb5 5.12 3.5e5 3.e5 1l.38 2,5e5 2.0e5" I16.56 18.84 1.5e5 19.74 1.0es5 5.0e4 25 30 min 5.12min ??? ? ?? 9.21min 11.38min ?13,01min?15,90min,?l6,56min, ??18.8min,??19.74minm ?A.1????
GB/T22993一2008 附 录 B 资料性附录 回 收 率 八种镇定剂添加浓度及其平均试验数据,见表B.1、表B.2 表B.1牛奶中八种镇定剂添加浓度及其平均试验数据 化合物名称 添加浓度/(4g/L 平均回收率/% 0.50o 88.10 1,00 89.20 乙酰丙嗦 2.00 89.93 91.94 4.00 0,50 89.61 1.00o 86.29 氯丙嗓 2.00 89.39 4.00o 90.29 0.10 87.60 0.20 89.28 叙喉碗醇 0.40 86.90 0.80 90.72 0.50 88.52 l.00o 91.39 丙酰二甲氨基丙盼唾嗓 2.00 92.37 4.00 90.38 0.25 89.90 91.38 0.50 甲苯嚷嗓 l.00 92.12 2.00 90.59 0.20 89.35 0.400 88.15 阿扎噪隆 90.07 0,80 1.60 90.26 0.15 91.44 0.30 91.45 阿扎崛醇 0.6o 87.11 .20 87.42 0.50 89.72 1.00 88.58 咔陛心安 2.00 92.49 4.00 90.39
GB/T22993?2008 B.2?а????? ?/% ?/g/lkg 4.0 92.85 8.0 91.68 ? 12.0 90.30 6.0 94.13 4.0 90,71 8.0 83.68 ? 12.o 84. 1 6.0 88.61 0.8 88.79 1.6 93.52 ? 88.02 2.4 87.91 3.2 4.0 92.18 8.0 4 90 ?? 2.0 87.24 16.o 87.54 2.0 90.62 4.0 86,98 ?? 6.0 87.52 8.0 81.59 1.6 90.80 3.2 85.89 ?? 86.05 4.8 6,4 94.65 85,15 1.2 2.4 89.98 3.6 93.36 4.8 97.45 4.0 92.87 91.00 8.0 ? 2.0 88.04 91.72 16.0