饲料中维吉尼亚霉素的测定高效液相色谱法

饲料中维吉尼亚霉素的测定高效液相色谱法

国家标准 GB/T22261一2008 饲料中维吉尼亚霉素的测定 高效液相色谱法 Determinationofvirginiamycininfeeds- Highperformmanceliquidehromatography 2008-08-01发布 2008-11-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22261一2008 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口 本标准起草单位;农业部饲料质量监督检验测试中心(南京) 本标准主要起草人:冯三令、耿士伟、储瑞武、冯群科、贾书静
GB/T22261一2008 饲料中维吉尼亚霉素的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了饲料中维吉尼亚霉素含量的高效液相色谱测定方法 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中维吉尼亚霉素含量的测定,检出限为 0.5mg/kg,定量限为2mg/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992,eqI!so3696,198m) GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 原理 饲料中的维吉尼亚霉素用乙酸乙酯提取出来,提取液经硅胶柱和亲水亲脂平衡型固相萃取柱净化， 在高效液相色谱仪(HPLC)反相柱上分离,用紫外检测器(或二极管阵列检测器)在210nm波长处检 测,根据维吉尼亚霉素M和s，峰面积加和值用外标法计算饲料中维吉尼亚霉素的含量 试剂和溶液 除特殊说明外,所用试剂均为分析纯,水为燕憎水,色谱用水符合GB/T6682中一级用水规定 乙酸乙 4.2无水碗酸钠 4.3正己烧 4.4无水乙酸乙酯-正己婉:将乙酸乙酯和正己婉按体积1十1混合,通过无水硫酸钠脱水 4.5乙睛 4.6甲醇 乙脱钱缓冲容被(pH..aGmma/L 称取孔.后无水乙股钱,溶解于10wml水中,用冰 乙酸调节pH至4.0. 甲脾-乙般彼缓冲洛液;将甲脉和乙酸做缓冲游液((.7)按11a比例混合,摇匀 4.8 4.9 40%甲醉水溶液;将甲醉和水按4十昏比例混合,摇匀 4.10乙晴:色谱纯,用于配制流动相 4.11磷酸 4.12流动相;乙睛十水十磷酸=400十600+1,混匀,用前脱气 4.13维吉尼亚霉素标准溶液 4.13.1维吉尼亚霉素标准品;维吉尼亚霉素M和s总和不少于95.0% 4.13.2维吉尼亚霉素标准贮备液:准确称取维吉尼亚霉素标准品(4.13.1)100mg,置于100mL棕色
GB/T22261一2008 量瓶中,用乙睛(4.5)溶解定容,摇匀,该溶液中维吉尼亚霉素浓度为1mg/ml 贮存于4C冰箱中,有 效期三个月 4.13.3维吉尼亚霉素标准系列工作液;准确吸取维吉尼亚霉素标准贮备液(4.13.2)置于棕色量瓶中， 用流动相(4.12)配制成浓度分别为2,5,10,25,50,1004g/mL的标准系列工作溶液 贮存于4冰箱 中,有效期一周 仪器和设备 5.1高效液相色谱仪:配紫外检测器或二极管阵列检测器 5.2分析天平:感量0.1mg 5.3涡旋混合器 5.4超声波水浴仪 5.5离心机:4000r/min. a6 氨吹仪;可控温5o C 5.7固相萃取柱 7.1 硅胶柱:690mg/3ml 5.7.2亲水亲脂平衡型固相拳取柱;onmw/3ml. 5.8固相萃取装置 5.9pH计 5.100.45um微孔滤膜 试样制备 6.1按GB/T14699.1采样 6.2选取有代表性饲料样品至少500g,按GB/T20195制备样品 测定步骤 7.1提取 称取试样适量配合饲料,浓缩饲料2g一5g,预混料1g2g),精确至1mg,置于50mL离心管 中,加2mL水,使试样充分湿润并混匀,加人20mL乙酸乙酯(4.1),加盖,置涡旋混合器上混匀后,置 超声波水浴中超声提取30min 于离心机上以4000r/min离心10min 准确吸取10m上层乙酸乙酯清液于另一离心管中,加人5g无水硫酸钠(4.2)和10mL正己烧 (4.3),置涡旋混合器上充分混匀后,于离心机上以4 r/min离心10nmin,上清液备用 10001 7 净化 2 用2.5ml无水乙酸乙酯-正己炕(4.4)预淋洗活化硅胶柱(5.7.1),将上清液(7.1)小心转移人硅胶 柱内保持过柱流速不超过2mL/min,且不得抽干),用5 无水乙酸乙酯-正己炕(4.4)洗涤离心管 ml 中无水硫酸钠,洗涤液一并转移人硅胶柱内,抽干,用2 m 乙晴(4.5)淋洗硅胶柱,抽干 用1mL甲醇(4.6)和1ml乙酸铵缓冲溶液(4.7)预淋洗活化亲水亲脂平衡型固相萃取柱 (5.7.2),将抽干的硅胶柱安装在亲水亲脂平衡型固相萃取柱(5.7.2)的上面,用5ml甲醉-乙酸铵缓冲 溶液(4.8)淋洗硅胶柱,淋洗液正好通过亲水亲脂平衡型固相萃取柱(5.7.2),保持过柱流速不超过 2mL/ /min 淋洗完毕后,弃去硅胶柱,用5ml40%甲醉-水溶液(4.9)淋洗亲水亲脂平衡型固相萃取柱 (5.7.2),弃去淋洗液 最后用5ml甲醇(4.6)进行洗脱,收集洗脱液,于50C氮吹仪上蒸发至干,用 0.5ml5mL的流动相(4.12)溶解残渣,过0.45am微孔滤膜,供上机测定 7.3 色谱条件 色谱柱:C柱,长150mm,内径4.6mm,粒径5m,或相当者
GB/T22261一2008 7.3.2柱温:室温 7.3.3流动相:同4.12. 7.3.4流速:1.0mL/min. 7.3.5检测器;紫外检测器(或二极管阵列检测器),检测波长210nm. 7.3.6进样体积;20L 7.4定量测定 按上述色谐条件,分别将维吉尼亚霉素标准系列工作液(4.13.3)及试样溶液(7.2)上机测定,根据 维吉尼亚霉素M和S，峰面积加和值,用外标法定量 7.5结果计算 试样中维吉尼亚霉素的含量(X)以质量分数(mg/kg)表示,按式(1)计算 ，×V×V×a G X= 又 V m× 式中: 试样中维吉尼亚霉素的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); 试样溶液中M和s色谱峰面积加和值对应的浓度,单位为微克每毫升(ug/mL); 加人试样中的乙酸乙酯总体积,单位为毫升(mL); 最终溶解残渣用流动相的体积,单位为毫升(mL); 维吉尼亚霉素标准品含量,% 试样质量,单位为克(g): mn -移取的乙酸乙酯体积,单位为毫升(mL. 结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字 精密度 在重复性试验条件下两次平行测定结果的相对偏差不大于10%
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