饲料中甲基睾丸酮的测定高效液相色谱串联质谱法

饲料中甲基睾丸酮的测定高效液相色谱串联质谱法

国家标准 GB/T22260一2008 饲料中甲基睾丸酮的测定 高效液相色谱串联质谱法 Determinationofmethyltest0steroneinfeeds一 Hlighperformaneeliaquidechroatographytandemmassspeetroetry 2008-08-01发布 2008-11-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管蹬委员会国家标准
GB/T22260一2008 前 言 本标准的附录A为资料性附录 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口 本标准起草单位;农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心 北京门 本标准主要起草人:赵根龙、苏晓鸥、苏淑清、孙志文、索德成
GB/T22260一2008 饲料中甲基睾丸酮的测定 高效液相色谱串联质谱法 范围 本标准规定了以高效液相色谱串联质谱法(LC/Ms/MS)测定饲料中甲基睾丸酮含量的方法 本标准适用于配合饲料,浓缩料、添加剂预混合饲料中甲基睾丸酮的测定,配合饲料,浓缩饲料、 添加剂预混合饲料的定量限为104g/kg. 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GBy/T6882一1992,neqIso3896,1987) GB/T20195动物饲料试样的制备 原理 饲料样品中的甲基睾丸酮以甲醇溶液超声提取,提取液离心后经C固相萃取柱净化,以甲醇洗 脱,用高效液相色谱串联质谱仪、电喷雾正离子方式进行测定 试剂和材料 除特殊注明外,本标准所用的试剂均为分析纯,水为蒸憎水,色谱用水符合GB/T6682一级用水的 规定 甲醇;色谱纯 4.1 4.2甲醉溶液I;分别用量筒量取500ml甲醉(4.1)和500ml水,混匀 4.3甲醇溶液I;分别用量筒量取200ml甲醇(4.1)和800mL水,混匀 甲基睾丸酮标准品;纯度97%103% 4.5甲基睾丸酮标准溶液 4.5.1甲基睾丸围标准储备液;准确称取甲基睾丸酬标准品(.0.0500只，置于50mL容量瓶中,用 甲醉(4.1)溶解并定容至刻度摇匀,其浓度为1mg/ml贮于4C一6C冰箱中有效期三个月 甲基睾丸酮标准工作液;准确吸取甲基睾丸酮标准储备液(4.5.l)5.00ml,置于50ml.容量瓶 4.5.2 1)荐解并定容至刻度,摇匀.其张度为Ip/. 中,用甲醇(4 再以此稀释液配置10" pg/ml 1pg/mL.100ng/mLI0ng/mL的标准工作液 有效期一个月 4.6C固相萃取柱;载体60nmg;承载液体积3ml 仪器 实验室常用仪器,设备 5.2分析天平:感量为0.0001g和0.001g各一台 5.3超声水浴 5.4离心机:4000r/min5000r/min
GB/T22260一2008 5.5固相萃取装置 5.6配备电喷雾离子源(ESI)的液相色谱串联质谱仪 可控温30C~50C氮吹装置 试样制备 按照GB/T20195制备样品,全部通过0.28mm孔筛,混匀,装人密闭容器中,避光低温保存 备用 分析步骤 7.1提取 称取饲料样品5g(准确至0.001因),置于100ml离心管中,准确加人提取溶剂(4.2)50.00mL.加塞" 充分摇动1nmin,再置超声水浴中超声提取20min,其间充分摇动两次 取出后于离心机上5000r/min离 心l0min. 7.2净化 分别用3nmL甲醇,3mL水活化固相萃取柱(4.6),准确移取5mL离心液(7.l)分次上柱,控制过 柱速度在1mL/ /min以内 再用3mL水和3m甲醇溶液(4.3)洗涤固相萃取柱,抽近干后用甲醇 4.l)2ml洗脱 在氮吹装置(5.7上40C下用氮气吹干 准确加人2mL 甲醇(4.1),涡旋振荡 1min,过0.45Am滤膜，上机测定 测定 7.3.1液相色谱条件 色谱柱:C柱,柱长150mm,柱内径2.1mm,粒度3.5m或性能类似的分析柱 柱温;室温 流动相组成;甲醇十0.1%乙酸溶液=80十20(V十,) 流动相流速300L/min. 进样量;20AL 7.3.2质谱条件 电喷雾离子源(ESI)正离子方式检测 喷雾电压:5000V 壳气流速:0.26L/min 辅助气流速:6.9L/" /min 毛细管温度:310C 母离子303,二级子离子为285,267 碰撞能量见表1 表1甲基睾丸酮母离子及子离子碰撞能量表 母离子 子离子 碰撞能量/eV 303 285 23 303 267 22 其相对丰度比见表2 表2甲基睾丸酮的子离子及相对丰度比 子离子m/z) 285 267 相对丰度/% 100 95士19
GB/T22260一2008 7.3.3定性定量测定 取适量由7.2获得的样品制备液和相应浓度的甲基睾丸酮标准工作液(4.5.2)进行测定,以保留时 间和二级子离子m/z285,267进行定性 定性方法;试样保留时间与标准品的相对偏差不大于15%， 特征离子丰度与标准品相差不大于20% 定量方法:以二级子离子m/z285,267峰面积之和进行单点 或多点校正定量 结果计算与表述 8.1结果计算 甲基睾丸酮在饲料中的质量分数X,以微克每千克g/kg)表示,可用式(l)计算 m ×n X= m 式中 选择性子离子色谱峰对应的甲基睾丸酮质量,单位为纳克(ng) m 试样质量,单位为克(g); n 稀释倍数 7 8.2结果表示 平行测定结果用算术平均值表示,保留三位有效数字 重复性 在同一实验室由同一操作人员完成的两个平行测定的相对偏差不大于10%
GB/T22260?2008 ?A ?? ????? A.1100ng/mL???????A.1 ?2.66 :615541 :298 100 5 90 85 0 75 70 55 45 0 35 0 15 10 1/min ?A.1100ng/mL?????
GB/T22260?2008 A.2??????A.2 303.13 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 5 40 35 30 5 285.01 n0 267.11 15 27.06 188.97 10 21l.04 244.99 429.76 457.27 493.67 340.33359.26 394.55 150 200 250 300 350 400 450 500 m/2z ?A.2?????