国家标准 GB/T29584一2013 黄瓜黑星病菌检疫鉴定方法 1cucumerinumEIl.etArthur Deteetionamdidentifieatioofcadosporiwm飞 2013-07-19发布 2013-12-06实施国家质量监督检监检疫总局发布国家标准花管理委员会国家标准
GB/T29584一2013 前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口本标淮起草单位;内蒙古出人境检验检疫局、厦门出人境检验检疫局、湖北出人境检验检疫局本标准主要起草人;杨永生,罗志伴、昌国忠、陈青,教威华、郭铁筝,尹风民,张永宏,朱子平、白桦、李刚
GB/T29584一2013 黄瓜黑星病菌检疫鉴定方法范围本标准规定了黄瓜黑星病菌Clados El.etArthur以植株症状、病原菌形态 po11c'cunerr74m 特征为依据的检疫鉴定方法本标准适用于黄瓜及其他葫芦科植物的种子、秧苗上黄瓜黑星病菌的检疫和鉴定规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 sN/T1157进出境植物苗木检疫规程 sN/T1809进出境植物种子检疫规程黄瓜黑星病菌基本信息中文名称:黄瓜黑星病菌学名;CladlosporiumcucumerinumEll.etArthur1889 异名:ScolecotrichummelobhthorumPrill.&.Delacr1891; Macnosor oriummelophthorumPostrup1893; Cladosporiumcucumeri、Frank1893 CladlosboriunscabiesCooke1903 病害英文名 :cucumberScab 属于真菌界Fungi,有丝分裂袍子真菌Mitosporiefungi 该病菌的有性型为子囊菌门球腔菌科 Mycosphaerellaceae e,球腔菌属MycosphaerellaJoht 在传统分类上,该菌属于半知菌亚门Deu- 1ansOn teromycotina、 ,丝袍纲Hyphomycetes、 ,丝袍目Hyphomyeetales,暗色袍科Dematiaceae,枝抱属C'adws porin 黄瓜黑星病菌的其他信息参见附录A 方法原理通过现场检查植株症状,实验室检验,利用病原菌在寄主植株上的症状,病原菌的形态学特征、致病性测定等依据进行鉴定仪器及用具体视解剖镜 5.2生物显微镜高压灭菌锅
GB/T29584一2013 5.4生物培养箱 5.5超净工作台 5.6pH计 5.7电子天平 5.8冰箱 5.9培养皿、锻子、解剖刀、载玻片、盖玻片、酒精灯试剂和培养基 6.1次氯酸钠 6.2葡萄糖 6.3琼脂 6.4酒精 6.5PDA培养基;马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂17只一20g 马铃薯切块煮沸10min,纱布过滤,加人葡萄糖、琼脂,pH值至68,加水定容至1000ml,121C高压灭菌20min,分装备用现场检测 7.1现场植株症状检查按照SN/T1157规定执行现场检查中根据黄瓜黑星病在秧苗、瓜条下的症状,将具有典型症状及疑似症状的叶片,茎蔓,果实用塑料袋装好,加贴标识后送实验室进行病原菌分离和鉴定种子抽样按照SN/T1809规定执行实验室检测植株病组织检测从现场检疫中采集的感病植物组织上挑取灰黑绿色霉层或用刀片于叶背病斑处刮取病菌子实体，移于载玻片中央的水滴中,盖上盖玻片,进行显微镜检观察 8.2种子检测 8.2.1PDA培养基培养法取试验样品种子400粒,经3%一5%次氯酸钠消毒5min一15min,将以上处理的种子按每皿 10粒15粒摆放于PDA平板上，置于20C一22C恒温箱中培养7d11d,待长出菌落后,挑选典型菌株,接种在PDA培养基上进行纯化培养,待形成子实体后进行显微镜检观察 8.2.2致病性测定选用黄瓜感病品种(如津杂2号)在温室培养至长出两片真叶的幼苗,将待测菌株制备成袍子悬浮
GB/T29584一2013 液(浓度为2×10个抱子/mL),采用喷雾接种法接种黄瓜幼苗,罩上塑料袋保湿过夜,在20一22 条件下孵育7d14d,进行症状检查,并对病原菌进行显微镜检观察鉴定特征植株症状特征 9.1.1叶片症状叶片受害初期为近圆形褪绿色小斑点,后扩展成直径2mm3mm黄白色圆形病斑,后期病斑易呈星状开裂穿孔,孔洞边缘锯齿状,周围叶组织扭皱;病斑具黄白色晕圈,后期不明显叶脉上病斑一般为长纺锤形,后形成木栓化组织龟裂 9.1.2茎、叶柄,果柄、卷须症状茎,叶柄、果柄处初呈水浸状暗绿色梭形病斑,大小不等,最长可达4cn左右,淡黄褐色,中间开裂下陷龟裂,少数病斑开裂深度可达2mm~3mm 发病初期,病斑处有透明分泌物,后变为琥珀色胶状物,胶状物脱落后,病斑龟裂成疮痂状空气湿度大时,病斑长出灰黑绿色霉层卷须顶端及中间易被侵染,病斑长梭形,受害部分变为褐色或黑褐色,呈成段萎蔫,直至整个卷须干枯,失去功能 g.1.3果实症状瓜条被害病斑龟裂成疮痴状,果实畸形,病斑凹陷一般深2mm一3mm.最深可达了mm,病瓜一般不腐烂病斑处溢出半透明胶状物,后变为琥珀色空气湿度大时,病斑上长出灰黑绿色霉层参见附录B中的图B.1) 9.2病原菌特征 9.2.1培养性状 PDA培养基上菌落为圆形、平展、绒状,灰黑绿色菌丝白色至灰色,具分隔,具分枝菌丝白色至灰色、有时卷曲菌落背面为绿黑色 9.2.2形态特征分生抱子梗细长,单生或丛生,淡褐色至褐色,基部常膨大,顶部或近顶部有少量分枝,大小平均为 76 一3804m)×(3.2m一5m) 分生袍子芽殖,串生,形成分枝的长链,淡褐色至褐色,椭圆形或 6Mm 柠檬形,多数单胞,少数具一隔,分隔处略缢缩光滑或具微刺,大小差异很大,单胞袍子大小平均为 (3.8um~23.5Am)×(2.5Am64m);双胞抱子大小平均为(4Am~25Am)×(2am~6Am)(参见附录B中的图B.2) 1 结果判定植株症状符合9.1的特征,其染病组织上分离的病原菌形态特征符合9.2中的描述;种子在PDA 培养基上培养的病原菌特征符合9.2中的描述,经致病性测定植株表现症状符合9.1的病原菌均可判定为黄瓜黑星病菌(黄瓜黑星病菌及近似种类的分类检索表参见附录C,形态特征图参见附录D)
GB/T29584一2013 11 菌种保藏分离并鉴定的菌株需转接在PDA培养基的斜面上,待斜面表面布满菌丝后,置于4C冰箱保存有条件可进行冷冻干燥保藏菌种保存期满后灭活处理
GB/T29584一2013 附录A 资料性附录黄瓜黑星病菌其他信息分布亚洲:日本,,土库曼斯坦,巴基斯坦、吉尔吉斯斯坦,泰国,印度,柬埔寨、哈萨克斯坦、塞浦路斯、格鲁吉亚、,阿塞拜疆、乌兹别克斯坦欧洲;丹麦、西班牙,荷兰、意大利、德国、捷克、斯洛伐克、奥地利、瑞士,瑞典、罗马尼亚,法国、波兰,爱尔兰,英国、比利时,前南斯拉夫、卢森堡,俄罗斯,匈牙利,芬兰,爱沙尼亚、,拉脱维亚、乌克兰,立陶宛、挪威、保加利亚美洲;哥斯达黎加,巴拿马、萨尔瓦多将危地马拉,加拿大、墨西哥,美国、阿根廷、哥伦比亚大洋洲;澳大利亚、新西兰、新喀里多尼亚非洲;南非,摩洛哥、毛里求斯,津巴布韦、肯尼亚、马拉维 A.2寄主 nissalivs 黄瓜Cucu L、笋瓜Cue acumisma.rimaDuch.、蓝葫芦LagenariasicerariaMolina) Standl,丝瓜Lufacylindrica(L.)Roem、苦瓜NMomordlica.charanlialL 和其他葫芦科植物
GB/T29584?2013 ? B ?? ?????????? ??????????B.1,?B.2 ?B.1??????? ?B.2??????" 1)EllisM.B.1971
GB/T29584一2013 c 附录资料性附录黄瓜黑星病菌及近似种类的分类检索表？ 1.分生抱子痕明显分生抱子痕不明显 1 Amorphothecaresinae 2 分生袍子梗的柄坚硬,具黑团弛霉属(Periconia)状袍子头 Cladosporiumchlorocephalumn 分生袍子梗其他特征 2 分生抱子多数404m~50Am×12m15m，具小刺 3 Mycoshaerelladlianthi 3 分生抱子多数40Am一60Am×17m一22m，具小刺 Mycosphaerellama4crosporu 分生袍子较小,光滑或具小疣分生袍子梗常具有末端和中间膨大(节状分生袍子梗不呈节状 5分生抱子多数宽 Cla 3Am6Am,分生袍子梗常长500 Am laclosporiumo.rysporumn 分生袍子多数宽6Am或更宽,分生抱子梗短小分生袍子多数宽6Am8Anm 分生抱子多数宽7 um m Cladlosboriunm 分抱子光滑,常在隔膜处缢缩分生袍子密被犹 Cladospori 8 Cladosbo1 气生菌丝呈螺旋状缠绕 8. Cladlosoriummacrocar 气生菌丝不呈螺旋状 Clalosporiuum1 分生抱子多数呈球形或近球形,直径3pm m 分生袍子不呈球形或近球形 C'ladosoriumspongiosunm 10.分生袍子常具3个厚和暗色横隔膜 10分生袍子有隔膜时也不呈明显厚和暗色 11寄生在李属Prunus植物上 Venturia ll.寄生在芭蕉属Musa植物上 Cladosoriunm 11 寄生在香瓜属Cucumi和其他葫芦科植物上 Cladlosporiumcucumerinum ll.腐生,有些菌株为寄生 Cladosporiumncladosporioiles 21 引自EllisM.B.1971
GB/T29584?2013 ?D ?? ????? ?????D.1??D.6 A1orpho1hecaresinae Mycosphaerellamaerospora b Cadosporiwmchoroeephalwmn Myeosphaerelladiamthi ?D.2Mycosphaerelladianthi ?D.1 Amorphothecaresinae Mycosphaerellamaerospora?? Cadosporiumchloroephadum?? Cladosporiwmoxysporwm h Cladosporiumcoocasiae ?D.3Cadosporiumoxysporum,cadosporiwmcolocasiae??
GB/T29584一2013 Cladosporiwmherbarun Cladosporivriabile Cladosporiummaerocarpum" 图D.4Cladosporiuumherbaru.Cladosporiumvariabile和 Cladosporiummaerocarpum形态特征图 Cladosporiumsphaerospermumn Cadosporiumspongiosun yentwriacarpophila 图D.5Cladosporimsphaerospermmum、,Cladosporimspongiosm和 venturiacarpophila形态特征图
GB/T29584一2013 Cladosporiusa b Cadosporiumeucumerinumn Cladosporiumcladosporioides riummsae,Clados 图D.6Cadospor osporium.ccumerinum和 Cadosporiumcladosporioides形态特征图 10

黄瓜黑星病菌检疫鉴定方法GB/T29584-2013

随着全球贸易的不断发展，植物疾病的传播愈发频繁。黄瓜是我国重要的经济作物之一，而黄瓜黑星病菌则是威胁黄瓜生产的主要病原体之一。为了保证黄瓜产品的质量安全，我们需要进行黄瓜黑星病菌检疫鉴定。

黄瓜黑星病菌的危害

黄瓜黑星病菌是一种常见的病原体，会导致黄瓜叶片出现黑色斑点，进而扩散至整个叶片，并可能感染黄瓜果实。感染后的黄瓜果实外观不佳，口感差，降低了商品价值和市场竞争力。

检测流程

黄瓜黑星病菌的检测需要先对样品进行采集，一般采用无菌方法，避免污染。采集的样品要求新鲜、完整，不受损伤。

然后对样品进行处理，主要是提取黄瓜黑星病菌的DNA或RNA等。这个过程需要专业的实验室设备和技术支持，可以请相关机构或企业来完成。

最后进行PCR扩增反应，通过比对检测结果与标准阴性样品进行对比，来判定是否存在黄瓜黑星病菌感染。

标准要求

GB/T29584-2013《植物病原菌检疫鉴定技术通则》规定了黄瓜黑星病菌检测的技术要求和标准要求。

其中，样品的采集要求新鲜、完整，不受损伤。提取方法需要可靠，并且不能对目标基因进行破坏。PCR扩增条件需要精确可靠，结果应该准确。

此外，标准还规定了检测过程中的控制要求，如阴性对照、阳性对照等，以确保检测结果的正确性和可靠性。

结论

黄瓜黑星病菌检疫鉴定是保障黄瓜质量安全的重要手段之一，GB/T29584-2013指导下，我们可以通过科学合理的检测流程和标准要求来对黄瓜黑星病菌进行检测，提高黄瓜产品的品质和市场竞争力。