畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

国家标准 GB/T20759一2006 畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Methodforthedeterminationofsixteensulfonamideresidues inlivestockandpoultry muscleS LC-MS-MSmethod 2007-03-01实施 2006-12-31发布 国家质量监督检验检疫总局 发布 中 国国家标准化管委员会国家标准
GB/T20759一2006 前 言 本标准的附录A和附录B为资料性附录 本标准由秦皇岛出人境检验检疫局提出 本标准由国家质量监督检验检疫总局归口 本标准起草单位:秦皇岛出人境检验检疫局 本标准主要起草人;庞国芳,曹彦忠,贾光群,张进杰,范春林,李学民、刘永明、石玉秋 本标准系首次发布的国家标准
GB/T20759一2006 畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉中十六种磺胺类药物残留量液相色谱-串联质谱测定 方法 本标准适用于牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉中十六种磺胺类药物残留量的测定 本标准的方法检出限，,颧胶甲嚓二瞪为2.了1EAkg.碱胶附酸、,顾贼膀唉,喷贼毗唉、顾贼二甲异喝 幽、磺胺甲基嗜唉、磺胺氯哒嗓,磺胺-6-甲氧嗜,磺胺邻二甲氧嗜,磺胺甲基异恶陛为5.0g/kg,磺 胶嚷陛,碱胶甲氧哒唉,碱胶间二甲氧喘院为10.0pe/ke,碱胶对甲氧喘唉,碱股二甲喘院为20.0g/keg 磺胺苯毗幽为40.0g/kg 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准 GB/T6379.！测量方法与结果的准确度正确度与精密度第1部分:总则与定义 (GB/T6379.1一2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分;确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法(GB/T6379.2-2004,IsO5725-21994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682-1992,neqIso3696;1987) 原理 畜禽肉中磺胺类药物残留用乙晴提取,离心后，上清液用旋转蒸发器浓缩近干,残渣用流动相溶解， 并用正已烧脱脂后,样品溶液供液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量 试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水 4.1乙睛:色谱纯 4.2异丙醉 4.3正己炕 4.4乙酸铵 4.5无水硫酸钠;经650C灼烧4h,置于干燥器中备用 4.6流动相:乙猜+0.01mol/儿L乙酸铵溶液(12+88) 磺胺醋酰、磺胺甲嚷二陛,磺胺二甲异飕陛、磺胺氯哒嗦、磺胺嗜、碱胺甲基异嗯陛、磺胺瞎陛,磺 胺-6-甲氧密,磺胺甲基喀唁、磺胺邻二甲氧嗜、磺胺毗、磺胺对甲氧密嚏,磺胺甲氧哒嗦、磺胺二 甲密唁、磺胺苯毗陛、磺胺间二甲氧密唁标准物质;纯度>99% 4.8十六种磺胺标准储备溶液:0.1mg/ml 准确称取适量的每种碱胺标准物质,用甲醇配成 nmg/m的标准储备溶液,该溶液在4C保存,可使用二个月 0.1
GB/T20759一2006 4.9基质混合标准工作溶液:根据每种磺胺的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成不同浓度 ng/mL)的基质混合标准工作溶液,基质混合标准工作溶液在4C保存,可使用一周 4.10滤膜;0.2Amm 仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源 5.2匀质器 5.3旋转蒸发器 5.4液体混匀器 5.5离心机 5. 分析天平;感量0.1 ,0.01 mg g 557移液器l ml,2mL 5.8鸡心瓶.100nL 5.9样品瓶;2mL,带聚四氟乙烯旋盖 试样的制备与保存 试样的制备 6. 从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分搅碎,混匀,均分成两份,分别装人诘净容器内 密 封作为试样,标明标记 在抽样和制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 6.2试样保存 将试样于一18C冷冻保存 测定步骤 样品制备 称取5迟试样,精确至0.01g,置于50mL离心管中,加人20区无水硫酸销(4.5)和20ml乙腊 4.1),均质2nmin,以3000r/nmin离心3min 上清液倒人100mL鸡心瓶中,残渣再加人20mL乙晴 重复上述操作一次 合并极取液.,问鸡心瓶中加人I0mL异闪膀4.2,用能转燕发器(G.3)于sac水 浴燕干,准确加人1nml流动相(4.6)和1nml 正已烧(4.3)溶解残渣 转移至5ml离心管中,涡旋 nmin,以3000r/min离心3min,吸取上层正己烧弃去,再加人1mL正己烧,重复上述步骤,直至下层 水相变成透明液体 按上述操作步骤制备样品空白提取液 取下层清液,过0.2um滤膜(4.10)后,用 液相色谱-串联质谱仪测定 7.2色谱测定 7.2.1液相色谱条件 色谱柱;Lichrospher100RP18,54m,250mm×4.6mm(内径)或相当者; a bb 流动相;乙睛+0.01mol/L乙酸铵溶液(12+88); 流速:0.8mL/min 柱温:35C; d 进样量:40L; e f 分流比:l 3 7.2.2质谱条件 离子源电喷雾离子源; a b 扫描方式:正离子扫描; 检测方式:多反应监测; c
GB/T20759?2006 ?:5500V; d ?:0.076MPa; e ?:0.069MPa; :6L/min g h)??:350C; ????????1 1???????????? ? ?? ??? ? m/: m/e 215/156 18 40 ? sulfacetamide 215/156 28 215/108 45 20 271/156 50 ? sulfamethizole 271/156 3 271/107 5o 268/156 45 ? sulfisoxazole 268/156 45 268/113 285/156 50 ?? sulfachloropyridazine 285/156 s0 285/108 5 251/156 ? 251/156 sulfadiazine 50 251/185 254/156 50 2 ??? 254/156 sulfamethoxazole 22 254/147 45 256/156 55 sulfathiazole ?? 256/156 32 256/107 47 281/156 65 25 sulfamonoethoxine 281/156 ?-6- 281/215 50 265/156 50 ?? 265/156 suliamerazine 265/172 60 31/156 70 ??? sulfadoxinm 311/156 311/108 55 250/156 50 ? 250/156 sulfapyridine 250/184 6o 281/156 65 ?? sulfameter 281/156 50 281/215 281/156 65 ?? sulfamethoxypyridazine 281/156 0 281/215 279/156 5 ??? sulfamethazine 279/156 60 279/204 315/156 5 ? sulfaphenazole 315/156 5 315/160 31 311/156 70 ?? 311/156 sulfadimethoxine 27 311/218 70
GB/T20759一2006 7.2.3液相色谱-串联质谱测定 用混合标准工作溶液(4.9)分别进样,以工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标 准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中十六种磺胺的响应值均应在仪器测定的线性 范围内 在上述色谱条件和质谱条件下,十六种碱胺的参考保留时间见表2 十六种碱胺混合标准总 离子流图参见图A.1和图A.2 表2十六种磺胺参考保留时间 药物名 保留时间/nnin 药物名称 保留时间/min 秘 碱胺醋酰 2.61 磺胺甲基嗜 9.93 碱胶甲嚓二 碱胶邻二甲氧喘唉 必 4.54 ll.29 4.91 碳胺毗唉 l1.62 碱胺二甲异恶哗 碱胺对甲氧喘嚏 碱胺噼唰 5.20 12.66 6.54 胺甲氧哒嗦 17.28 硕胺氯哒嗦 碱胺甲基异恶哗 8.4 碱胺二甲咄 17.95 碱胶嚷睡 碱胶苯毗哗 9,13 22.29 磺胺-6-甲氧密唉 9.48 磺胺间二甲氧 28,97 7. 平行试验 按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定 空白试验 除不称取样品外,均按上述步骤进行 结果计算 结果按式(1)计算 x=cx×I 006 mn 式中 试样中被测组分残留量,单位为微克每千克(ug/kg)1 从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); 试样溶液定容体积,单位为毫升(mL); 试样溶液所代表试样的质量,单位为克(g) 7 注:计算结果应扣除空白值 精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的,其重复性和再现性的 值以95%的可信度来计算 9.1重复性 在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,畜禽肉中十六种磺胺含 量范围及重复性方程见表3
GB/T20759一2006 表3含量范围及重复性和再现性方程 药物名称 含量范围/(ug/kg 重复性限r 再现性限R 碱胺醋酷 5.0100.0 lgr=0.8332lgm一0.8908 lgR=0.8867lgm一0,4736 磺胺甲咪二哗 lgr=1.1482lgm-1.2062 lgR=0.872olgm一0.6719 2.5一50.0 碱胺二甲异恶咪 5.0~100,0 er=价.9en -0.9498 lgkR=0.9721lem一0.7648 碱胺氯哒嗓 5.0100.0 lgp=1.037olgm-1.104o lgR=0.7629lgm一0.481 碱胺唉 5,0100.0 lgr=1.0066lgm-1.0967 lgR=0.8626lgm一0.707 碱胺甲基异恶哗 5.0~100.0 lgr=1.0039lgm一1.1020 lgR=0.7669lgm-0.4725 10,0~200,0 lgr=0.8958lgm-0.8754 lgR=0.7792lgm-0,5137 硕胺嚷哗 碱胶-6-甲氧喘唉 5,0~l00,0 lgr=0,8156lgm-0.7523 lgR=0,8422lgm-0.6139 碱胶甲基略唉 5.0100.0 lgr=1.2468lgm-1.4415 lgR=0.9169lgm一0.702 磺胺邻二甲氧密 5.0l00.0 l.1848lg一l.4l31 lgR=0.8869lgn一0.6944 lgr 磺胺毗咙 5.0~100,0 lgr=0.9672lgm-1.0260 lgR=0.8551lgm-0.671 碱胺对甲氧嗜 20.0400.o lg"=0.7789lgm-0.5842 lR=0.7880lgm-0.4602 磺胺甲氧哒嗓 10.0~200.0 lgr=0.8173lgm一0.8225 lgR=0.7385lgm-0.4498 碱胺二甲喀 20.0400.o lgr=0.9702lgm-0.9970 lgR=0.8554lgm-0.5892 磺胺苯毗陛 30.0一600.0 lgr=1.0839lgm一1.1994 lgR=1.043llgm一0,8233 碱胶间二甲氧喘唉 10.0200.0 lgr=1.0697lgm一1.3020 lgR=0,7637lgm一0,4218 注;m为两次测定值的算术平均值 如果差值超过重复性限r,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 再现性 在再现性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,畜禽肉中十六种磺胺的 含量范围及再现性方程见表3
GB/T20759?2006 ? A ?? ?? A.1???????,?A.1 12.66 6.4e4 6.0e4 ?,2.61 min; ???,4.54min; 5.0e4 17.28 ?,5.20min 4.0e4 ??,6.54mimr 5.20 ???,8.41min; 22.29 3.e4 11.62 ??,9.93min: 6.54 2.0e4 ?,l1.62min; 4.5 9.93 28.97 2.61 ??,12.66min 8.4 1.0e4 ?,17.28min ?,22.29min; 0.0 20 24262830 ?,28.97min. /min ?A.1??????? A.2?????,?A.2 9.13 5.5e4 5.0e4 11.29 ??,4.91min 4.0e4 ?,9.13nmin 11.20 ?-6-,9.48min; 3.0e4 17.95 ??,l1.29nmin 2.0e4 ?.17.5n ? 4.91 1.0e4 20 /min ?A.2?????
GB/T20759一2006 B 附录 资料性附录 回 收率 本方法中十六种磺胺添加浓度及其平均回收率的试验数据,见表B.1 表B.1十六种磺胺添加浓度及其平均回收率的试验数据 添加浓度/(ag/ke 平均回收率/(% 称 药物名 5.0 77.5 10,o 96.6 碱胺醋酰 50.0 81.6 100.0 82.5 2.5 92.8 5.0 87.5 碱胺甲嚷二隆 25.o 93.6 50.o 86.0 5.0 85.5 10.o 87.3 磺胺嗜吭 50.o 85.6 100.0 86.2 5.0 95.3 10.0 91.3 磷胺氯哒嗓 50.o 88.o 100,0 82.o 5.0 85.2 10.0 86.8 碱胺甲基异嘻陛 50.0 85.1 100.0 83.0 85.7 5.0 10.0 88.1 碱胶甲基喘吹 50.0 88,8 100.0 88.7 5.0 92.o 10.0 88.2 碱胺毗啶 50.o 85.o 79.7 100.0 20.o 91.6 40.0 90.l 碱胺对甲氧唁啶 200.0 93.2 400.0 93.2
GB/T20759?2006 B.1( ? ?/ ?/% G8 92.6 l0.0 20.0 87.4 ?? 100,0 88.5 200.0 78.2 83.o 30.0 82.5 60.0 ? 300.o 84.2 600.0 78.3 10.,o 83.8 20.0 86.5 ? 100,0 84.2 200.0 78.3 5,0 81.7 6. 10.0 ?? 50.0 5.4 100.0 84.4 5.0 92.9 10.0 86.9 ?-6- 50.0 88.9 100.0 86.8 10.,o 84.0 20.0 83.4 ?? 100,0 84.7 200.0 81.8 5,0 97.3 10.0 88.8 ??? 50.0 92.9 100.0 93.9 20.0 90.8 40.0 96.9 ?? 200.o 90.9 400.0 91.3