海带

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国家标准 GB20554一2006 海 带 Kep 自2017年3月23日起，本标准转为推荐性 标准，编号改为GB/T205542006. 2006-12-01实施 2006-09-29发布 国家质量监督检验检疫总局 发布 小 国国家标准化管委员会国家标准
根据国家标准公告(2017年第7 号)和强制性标准整合精简结论，本标准自2017 GB20554一2006 年3月23日起，转为推荐性标准，不再强制执行 前 本标准的第3章为强制性条款,其余为推荐性条款 本标准的附录A为规范性附录 本标准由农业部提出 本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口 本标准起草单位;水产科学研究院黄海水产研究所、科学院海洋研究所、海洋大学 本标准主要起草人:王飞久、段德麟、刘涛、陈四清、张岩、高淳仁、于东祥、崔竞进
GB20554一2006 海 带 范围 本标准给出了海带(L.amimariaiaomicaAresch)的名称与分类、,主要形态构造特征、生活周期与繁 殖、遗传学特征以及检测方法 本标准适用于海带的种质监测和鉴定 名称与分类 2.1学名 海带(L.aminariajabonicaAresch) 分类位置" 褐藻门(Phaeophyta)、游袍子纲(Phaeosporeae)、海带目(Laminariales)、海带科(Laminariaceae) 海带属(LaminariaLamx.. 主要形态构造特征 3.1抱子体外部形态特征 藻体明显分为固着器、柄和叶片三部分 海带抱子体外部形态见图1 -固着器 -柄; -叶片; -纵沟 中带部; -叶缘部 图1海带袍子体的外部形态 3.1.1固着器 由多次双分枝的圆柱形假根组成,其末端有吸盘 3.1.2 柄 呈圆柱形或扁圆柱形,深褐色,成藻柄长3cm一6cm 3.1.3叶片 带状,褐色具光泽,基部幼时楔形,厚成阶段为扁圆形 养殖的海带成藻一般长2m一4m,宽 20 20 cm40cm野生的海带成藻一般长0.8ml.8m,宽8cm~ cm 有两条浅的纵沟贯穿叶片的 中部形成较厚的中带部,叶片边缘薄而软,有波褶
GB20554一2006 3.2抱子体内部构造特征 柄和叶片均分三层组织,外层为表皮,其内为皮层,中央为髓部 3.2.1表皮 由一层个体小,排列紧密和整齐的细胞组成,呈栅栏状 细胞含粒状色素体 3.2.2皮层 外皮层细胞呈柱状,大小不等,排列不整齐 内皮层细胞大小相近,排列较整齐 3.2.3髓部 由喇叭丝和髓丝组成 生活周期与繁殖 生活史 明显的袍子体(2m)与配子体(n)不等世代交替型 4.2生命周期 海底自然繁生的海带,其寿命为两年 4.3繁殖 4.3.1性成熟年龄 10个月12个月 4.3.2无性繁殖 抱子体产生单室袍子囊群,每个抱子囊内形成32个游袍子 游抱子单细胞,梨形,长6.9Am一 8.2am,宽4.1um5.5am,有两条侧生不等长鞭毛,前面一条长17.8 m一19.6m后面一条长 6.9 8.2 m 2Ama 4.3.3有性繁殖 卵配方式 雄配子体产生精子囊,每个精子囊产生一个梨形精子 精子长44pm一6.2wm,宽 2.7wm一3.4wm,具两条侧生不等长鞭毛,前面一条长13.了m一16wm,后面一条长16wm一1Amn 精子(n)与附着在卵囊口处的卵(n)结合生成合子(2n 遗传学特征 5.1染色体数 袍子体泪胞染色体数2n- =44 5.2NA序列特征 5.2.1ITs-1序列:总长度238bp 1CCGAAAGCGGGTTCGTTCAATCCCCCCCGCTCTATAAATTGTCTGTGAGGCCGCTTCGTG 61cGGCCTCTTTACCCcGAGAAAGAATTCGTTATGCGAAGTTGGGCGAGGGGCGCCTcGCcG 121AGAGCCTGTGAAAAGGcCCCTCGAATCAAAGCGCACCCCACATTTCAACCCATTAAACTCT 181GAATcTGAACTCAAAGGGGCGCTGCGCTAGccGCGGCTCccCCAACcTTTAACGTTGT Ts序列.总长度5sLp 5.2.2 1GACACCACTCGcCCCTCTTC TCTCCTGTCTCACGACGGGGGAGTCGCGGCGGCGGAC'TTT 61GAGTGTTcCGGAGTTcCcATGCTCcGAGTGCACCTAATCTcGTGAACGAAGCCTCTCGCG 121cCcTGCCGCACAGAGTTGTTGACGGCGCTcGCTTCGGCGGcGACTCTCGACTCACCAAAC 181GTGCGCAGGATGCCTGCCTCATTCCGGCGCTCCGACGCCGACCCTTCTGGGTCAGCGTCG 241GAAACCGTACCACTTTCG
GB20554一2006 检测方法 6.1形态构造检验 采用肉眼和显微镜观察相结合的方法 染色体检验 6.2.1标本的制备 压片法 6.2.2染色液 2%(质量分数)地衣红溶于70%体积分数)的乙酸中 6.2.3染色方法 固定材料在自来水中浸泡15min30min后压片 揭开盖片,滴人醋酸地衣红后盖片0.5h,用滤 纸吸出多余的染色液,石蜡封片 6.3海带IIs序列的检测 6.3.1海带配子体DNA的提取 取约1g(湿重)的海带配子体,加少量石英沙和PVP-40,在液氮中研成粉末 将粉未转至50mlL 的离心管中,加人15ml裂解缓冲液10mmol/LTris-HCI,10mmol/LEDTA,1.0mol/INaCl 1.0%CTAB,1%sDS,pHH8.0),在65C保温1h,期间摇匀几次 用同体积的三氧甲烧十异戊醇 24十1)抽提一次,再将水相转移至一新的50m离心管中,加人1/3体积的4mol/LTris-HCl mmol/儿EDTA，pH8.0中,加2lRNaseA.37C保温1h,再用三氧甲烧十异戊醇(24十1)抽提一 次,异内醉沉诧回收DNA NA最后游于一定体积的TE中,检测DNA的浓度 6.3.2IIs特异性扩增 总反应体积为20L，含10mmol/ITris-HCl(pH8.3),50mmv nol/L KCI,1.5 mm nol/儿MgCl Taqpolymmerase1U,4种dNTP各2mmmol/L,两个引物各4mmol/L6mmol/L,模板DNA10ng 其余用双蒸水补满 PCR反应参数.96C预变性5min;96c、30s,72c、60s,55C,30s.37个循环;72C,保温5min 6.3.3IIs序列扩增引物 正向引物;5'-AGAAGTcGTAACAAGGTTTcCGTAGG3'" 反向引物:5'-AATcCTGGTTAGTTTcTTTTcCTC-3' 6.3.4测序 参照DNA测序仪进行测序,见附录A 6. 判定规则 以第3章为主,结合第4章,第6章判断检验样品结果 经检验,符合上述质量要求的样品为合格 样品
GB20554一2006 附录 A 规范性附录》 DNA序列的测定 测序样品预处理;PCR扩增完毕,将样品置于一20C条件下 随后除去矿物油,残留的部分用等 体积的三氯甲熔抽提一两次 经纯化后,获取纯化的DNA A.2洗脱用洗脱液[10mmol/LTris和0.1mmol/LEDTApH8.0]将纯化的DNA进行洗脱,然 后克隆到pT7BlueT-vector中,PCR产物和载体的摩尔比为5:1,所用的酶为高活性的T4连接酶,接 着进行细菌转化 A.3从含有合适插人片段的克隆中分离出质粒DNA A.4用质粒纯化试剂盒从细菌克隆中提取和纯化DNA A.5纯化后的DNA在DNA测序仪上采用Sanger双脱氧链终止法原理在两端同时进行测序 具体 如下 A.5.1设立双脱氧测序反应 引物,测序引物即为扩增引物 a b)微量滴定板,为96孔U形微量滴定板 链延伸链终止反应混合液的配置 c A.5.2准备样品和列表，上样到微量滴定板中进行测序 A.6测序条件:电压160V/em,温度42C A.7根据凝胶的荧光放射自显影,运用计算机读取DNA编码 A.8打印测试结果,然后进行数据处理