蜚蠊抗药性检测方法德国小蠊不敏感乙酰胆碱酯酶法

蜚蠊抗药性检测方法德国小蠊不敏感乙酰胆碱酯酶法

国家标准 GB/T26351一2010 翡嫌抗药性检测方法 德国小镰不敏感乙酰胆碱酯酶法 Testmmethodsofcockroachresistancetoinsectieides一 TestmethodsofinsensitiveacetylcholinesteraseforBlattellagermanica 2011-01-14发布 2011-05-01实施 卫生部 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/T26351一2010 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由卫生部提出并归口 本标准起草单位:北京市疾病预防控制中心、农业大学,人民解放军军事医学科学院微生 物流行病研究所 本标淮主要起草人;曾晓龙、高希武,马彦,钱坤,终颖、梁浦,赵影言
GB/T26351一2010 镰抗药性检测方法 德国小嫌不敏感乙酰胆碱酯酶法 范围 本标准规定了德国小蛾(Bla tlelagermanica)体内不敏感乙酰胆碱酯酶(AChE)的检测方法 本标准适用于德国小螂对有机磷、氨基甲酸酯类药剂抗药性的生物化学检测 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 乙酰胆碱酯酶区分浓度discriminatingconcentrationofacetyeholinesterase 能够抑制敏感品系德国小蛳乙酰胆碱酯酶正常活性90%的杀虫药剂的浓度,单位为mol/L或 mmol/L F1代F1generation 从现场捕捉的德国小螂,繁殖后得到的第一代 试虫 现场采集德国小蛳,室内饲养,F1代羽化后7d15d的雄性德国小螂 冰浴条件下储存不超过 1d,一20C条件下储存不超过1周或一80C条件下储存6个月以内 试剂 4.1磷酸氢二钠(NaHPo.),化学纯 4.2磷酸二氢钾(KH.PO,),化学纯 4.3曲拉通X-100TritonX-100). 乙酰硫代胆碱(ATCh).分析纯 4.4 4.55,5'-二硫双硝基苯甲酸(DTNB),分析纯 4.6磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH7.5PBS);称取30.18gNa,HPO12H.0和2.16gKH,PO,燕憎 水定容至1000mL 4.7DTNB乙醇显色剂:称取12.4mgDTNB,溶于125mL95%乙醇中,加人50mL磷酸缓冲液,最 后用蒸水定容至250mL,4C避光保存 4.8ATCh溶液;称取28.9mgATCh溶于10mL蒸水中,一20丫避光保存 4.9ATCh-DTNB混合溶液:称取75mgATCh和13mgDTNB,用100mL磷酸盐缓冲液溶解
GB/T26351一2010 分光光度法 仪器设备 5.1 5.1.1分光光度计 恒温水浴箱 5.1.3玻璃组织匀浆器 5.1.4台式冷冻离心机(离心力10000以上) 加液器 5.1.5 5.2杀虫药剂的配制 用丙酮或其他的有机溶剂将杀虫药剂配制成母液,实验前用磷酸盐缓冲液稀释到区分浓度(常见杀 虫药剂对敏感德国小嫌品系乙酰胆碱酯酶的区分浓度参见附录A)的2倍,溶剂在反应体系中的最终浓 度应小于1% 5.3操作步骤 5.3.1将单头德国小雄性成虫,放人4C预冷的玻璃组织匀浆器中,加人lmL4C预冷的磷酸盐缓 冲液(pH7.5.0.1mol/L..含0.1%Tritonx-100),充分匀浆 5.3.2匀浆液在4,10,000g,离心15min,弃沉淀,取上清即为酶液,冰浴保存备用 5.3.3取4支试管,分别加人上述酶液0.1mL,在其中3支试管中分别加人杀虫药剂水溶液0.1mL 使其终浓度达到区分浓度,第4支试管中加人0.1mlL磷酸盐缓冲液作为无药剂对照管;另取1支试管 加人0.2ml磷酸盐缓冲液,作为空白对照 5.3.4将上述5支试管于30C保温5min,再分别加人0.1mL乙酰硫代胆碱(ATCh),30C继续保 温15nmin后,加人1.6mLDTNB乙醇显色剂 5.3.5以空白对照调分光光度计0点,于412nm波长下测定无药剂对照管和药剂处理管的光密度值 (ODn2). 5.3.6按上述方法检测100头德国小廉 结果表述 测定AChE残存活性的计算见公式(1). OD. E ×100% OD 式中 E -AChE残存活性; OD 药剂处理管平均光密度值OD; OD -无药剂对照管平均光密度值OD1 5 判别标准 5 AChE残存活性大于20%为不敏感的AChE 具有不敏感AChE的个体为对有机磷或氨基甲酸酯 类药剂具有抗性的个体,抗性个体在种群中的比例达到10%时为抗性种群
GB/T26351一2010 酶标仪法 6.1仪器设备 6.1.1酶标仪 6 1.2恒温水浴箱 6. 1.3玻璃组织匀浆器 台式冷冻离心机(离心力10000g以上) 6.1.4 加液器 6.1.5 6.2杀虫药剂的配制 用丙酮或其他的有机溶剂将杀虫药剂配制成母液,实验前用磷酸盐缓冲液稀释到区分浓度(常见杀 虫药剂对敏感德国小乙酰胆碱酯酶的区分浓度参见附录A)的2.5倍,溶剂在反应体系中的最终浓度 应小于1% 6.3操作步骤 6.3.1将单头德国小蟑雄成虫,放人4C预冷的玻璃组织匀浆器中,加人1ml4C预冷的磷酸盐缓冲 液(pH7.5,0.1mol/L,含0.1%TritonX-100),充分匀浆 6.3.2匀浆液在4笔,10000g离心15min,弃沉淀,取上清即为酶液,冰浴保存备用 6.3.3在酶标板中的4个孔中分别加人上述酶液0.1ml,在其中3个孔中分别加人一定浓度的杀虫 药剂溶液0.05mL,使其终浓度达到区分浓度,第！个孔中加人0.05mL磷酸盐缓冲液作为无药剂对 照管,在30C保温5min后,分别加人0.1mlATCh-DTNB混合溶液,在412nm测定5min时间动 力学曲线,曲线的斜率作为反应初速度(o) 计算平均值 结果表述 测定AChE残存活性的计算见公式(2) E-×100% U 式中 E -AChE残存活性; 奶 -药剂处理组平均反应初速度; 无药剂对照组平均反应初速度 U 6.5判别标准 AChE残存活性大于20%为不敏感的AChE 具有不敏感AChE的个体为对有机磷或氨基甲酸酯 类药剂具有抗性的个体,抗性个体在种群中的比例达到10%时为抗性种群
GB/T26351一2010 附录 A 资料性附录 常用杀虫药剂对敏感德国小镰品系乙酰胆碱酯酶的区分浓度 表A.1给出了敌敌畏和残杀威对敏感德国小蟑品系乙酰胆碱酯酶的区分浓度 表A.1常用杀虫药剂对敏感德国小镰品系乙酰胆碱酯酶的区分浓度 区分浓度 杀虫药剂 LC0 mol/L 敌敌畏(DDvP) 0.056×10 残杀威(propoxur) 4.69X10" 注，敏感品系来自北京市疾病预防控制中心医学昆虫饲养室,测定时间为2005年3月

蜚蠊抗药性检测方法德国小蠊不敏感乙酰胆碱酯酶法GB/T26351-2010

什么是蜚蠊抗药性？

蜚蠊抗药性是指蜚蠊对杀虫剂的耐受性增加，使得常规剂量的杀虫剂无法灭杀它们。这种现象在居住环境中和公共卫生领域都具有重要意义，因为它会导致杀虫剂的失效，进而影响到人类健康。

传统的抗药性检测方法存在的问题：

传统的抗药性检测方法主要是基于对死蜚蠊进行化学分析，如酶活性等，但这些方法存在一些问题，如：

• 结果不够准确，误差较大；
• 需要大量的死蜚蠊样本，且需要进行复杂的处理；
• 不能直接反映活体蜚蠊的抗药性情况。

德国小蠊不敏感乙酰胆碱酯酶法GB/T26351-2010：

为了克服传统抗药性检测方法的缺陷，近年来，德国小蠊不敏感乙酰胆碱酯酶法逐渐得到广泛应用。

德国小蠊不敏感乙酰胆碱酯酶法是指通过检测蜚蠊体内的乙酰胆碱酯酶（AChE）活性水平，来判断其对杀虫剂的敏感性。通常情况下，蜚蠊对杀虫剂的耐受性与AChE活性水平成负相关，即抗药性蜚蠊的AChE活性水平通常要低于敏感性蜚蠊。

相比于传统的抗药性检测方法，德国小蠊不敏感乙酰胆碱酯酶法具有以下优点：

• 结果准确度高，误差小；
• 样本数量少，处理简便；
• 能够直接反映活体蜚蠊的抗药性情况。

总结：

在蜚蠊防治工作中，抗药性检测是非常重要的一环。德国小蠊不敏感乙酰胆碱酯酶法GB/T26351-2010作为一种有效的抗药性检测方法，将会在居住环境和公共卫生领域得到广泛应用。

蜚蠊抗药性检测方法德国小蠊不敏感乙酰胆碱酯酶法的相关资料

和蜚蠊抗药性检测方法德国小蠊不敏感乙酰胆碱酯酶法类似的标准